霍乱弧菌单克隆抗体研制及应用

采用霍乱弧菌菌株免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/O,在PEG作用下进行细胞融合,获得二株能分泌抗霍乱弧菌单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤株.体内外培养可用辣根过氧化物酶、亲和素生物素及荧光标记葡萄球菌A蛋白测定霍乱弧菌专一的单克隆抗体,经6个月传代培养和液氮冷冻复苏培养良好,产生抗体稳定.细胞培养液效价为1∶8,小鼠腹水效价1∶3200,经44株霍乱弧菌(EL Tor生物型)和10株其它肠道内致病菌检测结果,对霍乱弧菌有特异性抗体.经IgG亚型测定属IgG_3,杂交瘤细胞染色体稳定在95～105条。本文还对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体若干问题,进行了讨论。     

克百威单克隆抗体的制备及鉴定

本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB／CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水．腹水效价达10^-6～10^-7。琼脂双扩试验表明各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白均为IgG2a亚类。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,并测定抗体蛋白含量为3～8mg／mL;用SDS—PAGE进行纯度鉴定,电泳图谱均显示了IgG抗体及其重链和轻链条带,分离的抗体纯度在90％以上。对纯化的单抗5E2进一步做交叉反应试验,与其他氨基甲酸酯类杀虫剂残杀威、速灭威、灭多威、甲奈威、异丙威、仲丁威的交叉反应率分别为7．2％、4．5％、2．8％、7．9％、9．5％、8．9％,结果表明单抗5E2有较好的特异性。     

操作更轻松

松下TZ1是目前体积最小的具备10倍光学变焦功能的小型数字相机。它的外形尺寸仅为112毫米×58．1毫米×402毫米．采用等效焦距为35～350毫米的徕卡镜头，最大光圈为f／2．8-7.1，支持MEGA O．I.S光学防抖技术，传感器有效像素为500万．感光度调节范围为ISO80～1600，视频拍摄分辨率为640像素×480像素。TZ1配有2.5英寸液晶屏，内     

新疆北部的富镁火成岩

本文重点讨论的富镁安山岩（MAs）是指SiO2〉53％，Mg^#≥55的安山岩，也包括富镁荚安岩和富镁闪长岩。阿尔泰南的富镁安山岩形成于中泥盆世，东、西天山和阿拉套山的富镁安山岩形成于石炭纪。本区富镁安山岩SiO2 53％-65％，TiO2含量低于1％（0．21％-1．08％），平均0．72％；MgO平均5．90％，与国外玻安岩平均值相比，Mg含量较低，Ti、K、Na含量较高。稀土元素总含量低（〈100×10^-6，范围15—95×10^-6），相对富重稀土（La/Yb）N0．98—6．4，多数在4±；Eu弱亏损到无亏损（Eu／Eu^＊ 0．65—1．15）。相容微量元素Cr、Ni含量高，分别为72×10^-6～790×10^-6和29×10^-6～276×10^-6；高场强元素Nb、Ta、Ti明显亏损；相对富集流体中富集的大离子亲石元素Rb、K、Pb；Y含量较高（〉15×10^-6）；Sr／Y比值较低（4．4～6．2）。（^143Nd／^144Nd）i值变化范围较大0，51221—0．51255，εNd（t）＋0．28-＋7．2，Nd模式年龄tDM485—1220Ma；（^87St／^86Sr）i值变化范围较大0．7029～0．7065，在8εNd（t）-（^87Sr／^86Sr）．图解中位于第一象限。上述特点表明，本区富镁安山岩源区为复合源，包括有蚀变洋壳、弧前增生棱柱的不成熟、新生地壳物质及地幔楔橄榄岩。成岩作用具复合性，既有俯冲洋壳板片的部分熔融，又有俯冲板片熔体对地幔楔橄榄岩的熔体交代作用。形成于特殊构造环境：高地热梯度和富挥发分；导致弧前增生棱柱俯冲的俯冲剥蚀作用；由俯冲板片撕裂、断离所形成的软流圈窗或洋脊俯冲。     

抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用淋巴细胞杂交瘤技术。继建立产生抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤ZMC_4后,又建立了一株能分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMC_9。本文将对ZMC_9的建株作一简报。材料与方法以正常人A型Rh阳性的红细胞为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NSI小鼠骨髓瘤细胞在50％PEG(分子量4,000)作用下融合,经HAT选择性培养基培养,生成淋巴细     

抗诺氟沙星单克隆抗体的制备及其性质的研究

为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。     

玩游戏

怀旧经典《俄罗斯方块DS》，天下布武《地球帝国2：霸权的艺术》，美女大乱斗《搏击玫瑰××》，反恐精英《杀戮地带：解放》     

心理测试

游戏规则： 几条交错的数字锁链构成了正方形的队列．锁链上的一些圆圈中已经标出了提示数字．请你用数字将空白圆圈填满．使得正方形的横排、竖列以及每个链条上的数字都不重复（见说明图）。注意．在3×3的正方形队列中,只能填1、2、3这三个数字;在4×4的队列中则只能填1、2、3、4这四个数字．以此类推。     

肺癌血清标志物CK19单克隆抗体制备及初步应用

同肺癌相关的血清标志物CK19,其存在或量变不仅可以指示肿瘤性质,还可以指导肿瘤的诊断、分类、预后以及治疗。本次研究使用BALB/C小鼠进行免疫(使用CK19的重组抗原),血清滴度进入平台期后将骨髓瘤细胞与前期经过免疫的小鼠脾细胞融合,进一步将细胞克隆化,共得到6株杂交瘤细胞株(能持续稳定分泌抗CK19抗体)。对6株抗CK19的单抗株进行腹水诱导和扩大培养,并将诱导得到的腹水进行纯化,采用亲和层析法。为获得一个最灵敏的双抗体夹心单抗配对,将纯化后的单抗株做正交配对的筛选并制备酶标抗体。最终获得了最优配对:11E6+16A5-HRP。灵敏度分析的检测结果显示,该配对对CK19重组抗原的检测灵敏度为15.6ng/ml。     

流行性出血热病毒的鉴定

报道了用长爪沙鼠从流行性出血热病人血液中直接分离到5株病毒,经直接荧光血清、单克隆抗体分型血清及电镜观察等鉴定,确定1株为家鼠型流行性出血热病毒,其余4株为野鼠型流行性出血热病毒。     

流式细胞术分析五味子乙素促进阿霉素内化的实验研究

[目的]建立流式细胞术分析肿瘤细胞内阿霉素分布的方法,并研究低浓度五味子乙素对K562细胞内化阿霉素的影响。[方法]体外培养猪内皮细胞(pEC),以20μmol/L阿霉素处理2、4和6小时;或加入不同浓度阿霉素(0、10、20、40、80和100μmol/L)处理4小时。培养K562细胞,以5μmol/L阿霉素处理2、4和6小时;或加入不同浓度阿霉素(0、2.5、5、10和20μmol/L)处理4小时。采用不同浓度(0、25、50和100μmol/L)五味子乙素(Sch B)与阿霉素联合处理K562细胞4小时。收集细胞,采用流式细胞术分析阿霉素的特异荧光。[结果]固定浓度处理pEC(20μmol/L)和K562(5μmol/L)后检测,发现细胞内荧光强度随时间延长而增加,两种细胞4小时组荧光强度分别达到6小时组的96.93%和95.23%/。在直方图上,阴性和阳性细胞群界限分明。阿霉素(2.5、5和10μmol/L)单独处理细胞的荧光强度分别为26.78±3.34、64.70±6.24和118.35±9.67;添加25μmol/L Sch B实验后荧光强度增加到43.45±4.25、103.74±7.36和146.69±8.32,Sch B显著增加了K562细胞内阿霉素的分布(p<0.05)。[结论]建立的方案可快速测定细胞内的阿霉素分布;低浓度Sch B促进肿瘤细胞内化阿霉素。     

大鼠阴道上皮细胞对白色念珠菌生长抑制作用的初探

目的研究阴道上皮细胞对白色念珠菌生长的影响。方法以雌性SD大鼠动情间期阴道上皮细胞作为效应细胞,白色念珠菌芽生孢子作为靶细胞,将效靶细胞共同孵育8h,观察念珠菌生长密度,检测念珠菌摄取3H-葡萄糖的能力,电镜观察其超微结构的改变。结果阴道上皮细胞与白色念珠菌细胞共同孵育后,念珠菌生长密度降低;效靶细胞比例为40:1,20:1,10:1,1:1时,念珠菌摄糖抑制率分别为52.34%,32.56%,28.73%,18.46%;电镜观察,单独培养的白色念珠菌结构完整,细胞壁、细胞膜及细胞器结构清晰,而与阴道细胞共孵育后的白色念珠菌细胞壁溶解破坏,细胞膜连续性破坏,细胞器肿胀溶解。结论大鼠阴道上皮细胞对白色念珠菌具有天然的生长抑制作用。     

纳米氧化锌对人肺腺癌细胞A549的毒性

探讨纳米氧化锌（ZnO）对体外培养的人肺腺癌细胞A549的生物学效应。使用原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）和X射线衍射仪（XRD）研究纳米ZnO颗粒物的理化性质。然后,使用0mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的纳米ZnO处理体外培养的人肺腺癌A549细胞,MTT 法测定细胞生长活性。并且测定1mmol/L 纳米ZnO染毒24h后细胞培养液上清中,乳酸脱氢酶（LDH）和胞内的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。使用透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。荧光染色检测细胞产生活性氧（ROS）的生成。实验所用的ZnO纳米颗粒为长75 nm、直径20nm的针状纤锌矿晶体。细胞实验结果表明,纳米ZnO颗粒对A549细胞的生长活性具有明显的抑制作用,存在剂量－效应关系。培养液上清中LDH活性显著升高（P < 0.05）,胞内CAT活性显著下降、MDA含量显著升高（P < 0.01）,但SOD活性下降不明显。荧光染色检测发现染毒后A549细胞出现细胞凋亡,而且细胞内ROS的生成与纳米ZnO存在剂量－效应关系。结论是纳米氧化锌诱导人肺腺癌A549细胞产生活性氧,引发细胞凋亡,并产生细胞毒性。     

乳腺癌耐受蛋白介导5-氟脲嘧啶的耐受及机制探讨

AIM To filtrate breast cancer resistance protein(BCRP)-mediated resistance agents and investigate the mechanism,so as to provide valuable datum for optimization clinical chemotherapy scheme to tumor with evaluation marker of BCRP expression. METHODS MTT assay was used to filtrate BCRP-mediated resistance agents with PA317/Tet-on/TRE-BCRP cell of different expression levels of BCRP after treated with different concentration anticancer agents. High performance liquid chromatography(HPLC) was applied to measure relative dose of intracellular retention resistance agents. Nuclear DNA fluorescence dye,Hochest 33258, staining and flow cytometry were adopted to detect apoptotic cells after treated with drugs. RESULTS There were shown increasing durg-resistance to 5-fluorouracil,methotrexate, doxirubicin, pirarubicin,etoposide and mitoxantrone followed with increasing expression of BCRP on PA317/Tet-on/TRE-BCRP cells(P＜0.05, n=3),but shown sensitive to paclitaxel, cisplatin, vincristine, mitomycin and vindesine. There also was shown significant negative correlation between the intracellular retention dose of 5-fluorouracil with different expression of BCRP(r=-0.885, P＜0.05, n=3).There were shown parallel results of that decreasing cellular apoptotic rate with increasing cellular expression of BCRP after treated with 5-fluorouracil by fluorescence dye staining and flow cytometry(P＜0.05, n=3),and also shown significate rise of the apoptotic rate of BCRP expression cells after treated with Ko143 (P＜0.05, n=3). Every group of cells could be different extently blocked in phase of G0/G1 treated with 5-fluorouracil. CONCLUSION Resistance of 5-fluorouracil could be especially mediated by conjugated with BCRP and acted as drug exclude-pump substrate. Cellular ability resistant to 5-fluorouracil-induced apoptosis could be reinforced by BCRP expression.     

草鱼细胞株（ZC—7901）乌苯苷抗性突变体的筛选

采用甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变草鱼吻端组织细胞（ＺＣ－７９０１）．用乌苯苷（Ｏｕａｂａｉｎ）筛选抗药性突变体．结果表明，ＥＭＳ对草鱼细胞的诱变效果与该药物对哺乳类细胞的诱变效果有明显差异．草鱼细胞对乌苯苷的敏感性也大大低于哺乳类细胞．ＺＣ－７９０１细胞在传代后２４ｈ，用浓度为２．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＭＳ处理２４ｈ，诱变效果较理想，细胞杀伤率约３０％，这比通常用ＥＭＳ诱变哺乳类细胞所使用的浓度（０．４ｍｇ／ｍｌ）增大了７倍，存留下来的细胞用浓度为２５ｍｍｏｌ／Ｌ乌苯苷筛选抗性突变体，有少数细胞存活，并具有分裂增殖能力．但在细胞瓶内不易形成单层     

氧化型低密度脂蛋白诱导LOX-1 在基因和蛋白水平表达

目的研究氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL, ox-LDL)是否能在基因和蛋白两个水平诱导内皮细胞表达凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor, LOX-1),以探讨LOX-1在动脉粥样硬化形成和发展中的作用.方法将不同浓度ox-LDL(20,40,60,80 mg/L)与内皮细胞共孵育24 h及浓度40 mg/L的ox-LDL作用内皮细胞不同时间(0、3、6、12、24 h),反转录聚合酶链反应检测LOX-1 mRNA水平表达,细胞酶联免疫法测定LOX-1蛋白水平表达.结果加入Ox-LDL 20 mg/L使LOX-1 mRNA和蛋白表达量增加(P＜0.01),40 mg/L使其表达量达最高峰,随后逐渐下降.而同一浓度下从0 h～24 h的趋势是LOX-1 mRNA和蛋白逐渐增加(P＜0.01),在12 h增加最明显.结论氧化型低密度脂蛋白呈剂量依赖性和时间依赖性地上调LOX-1 mRNA和蛋白表达,LOX-1可能在动脉粥样硬化形成和发展中起重要作用.     

Biochemical changes in polymorphonuclear leucocytes in patients suffering from diabetes

The microbicidal capacity of polymorphonuclear leucocytes of diabetic and control subjects was evaluated by estimating the release of lysosomal enzymes viz beta-glucuronidase, lysozyme, acid phosphatase, alkaline phosphatase, in response to a particulate stimulus-serum treated zymosan (STZ). The cells untreated and pretreated with cytochalasin B were exposed to STZ The total enzyme activities were estimated after cell lysis. The total enzyme activities were not altered in diabetic subjects as compared to control subjects. The release of lysosomal enzymes by cells pretreated with cytochalasin B was high as compared to untreated cells. The release of lysosomal enzymes from the cells isolated from diabetic patients, untreated and pretreated with cytochalasin B was reduced as compared to controls. The findings of the present study that the total lysosomal enzyme activities are normal while the release of these enzymes in response to stimulus is impaired in diabetics, suggest that the bactericidal capacity of these cells which involves phagocytosis is impaired in these patients.     

高效液相色谱法检测细胞能量代谢物质的方法建立与应用

建立高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比较高糖培养的MRC-5细胞和D-半乳糖诱导的拟衰老MRC-5细胞能量代谢水平。体外培养的细胞经高氯酸裂解后,用反向HPLC法检测两组细胞ATP、ADP和AMP的含量。HPLC系统采用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流动相为15mM磷酸二氢钾缓冲液和10%甲醇,流速0.5mL/min,紫外检测波长为254nm;检测温度为25℃,进样量20μL。以标准曲线法计算ATP、ADP和AMP含量,并计算腺苷酸能荷(EC)。结果显示拟衰老细胞的ATP含量及EC较对照组显著降低,而AMP含量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05),但两组之间的ADP含量没有明显差别。结果表明高效液相色谱法可检测出不同状态细胞能量物质的差异,其具有操作简便、快速、重现性好等特点,可以作为线粒体能量代谢功能的评估方法之一。     

Establishment of a pheasant (Phasianus colchicus) spermatogonial stem cell line for the production of interspecies germ line chimeras

BackgroundSpermatogonial stem cells (SSCs) are important for the production of interspecies germ line chimeras. The interspecies germ cell transfer technique has been suggested as a way to conserve endangered birds. Our objective was to develop a technique for restoring endangered birds by developing interspecies germ line chimeras between pheasant (Phasianus colchicus) and chicken (Gallus gallus) with SSCs.ResultsSSCs were isolated from the surgically removed testis of a pheasant. Growth conditions for pheasant SSCs were established by co-culturing STO (SIM mouse embryo-derived thioguanine and ouabain resistant) cells and pheasant SSCs. The colony-forming cells divided and proliferated stably to yield an established SSC line. Pheasant SSCs showed strong reactivity for GDNF family receptor alpha1 (GFRα1) marker. Finally, production of germ line chimeras was attempted by transferring pheasant SSCs into recipient embryos. Although final embryo survival was 5.6% (20/354), the initial survival rate was 88% (312/354). To measure the percent transfer of donor SSC to gonads, the pheasant SSCs were labeled with PKH 26 fluorescent dye. We observed 30% donor cells and 9.48% c-kit/CD117-positive cells in the gonads of recipient chickens. Donor SSCs were thus stably engrafted in the recipient gonads.ConclusionsThis study showed that SSCs can be used as a tool for the conservation of endangered birds and the production of germ line chimeras. Our findings yield insights into how we may use the pheasant spermatogonial stem cell line for efficient production of interspecies germ line chimeras and ultimately, to the restoration of endangered birds.