黑曲霉淀粉酶酶学性质研究

本实验对黑曲霉JLSP-15淀粉酶的酶学性质进行了研究.该淀粉酶的最适温度为60℃,其热稳定性较差;最适pH为pH 6.0,在pH4.0-8.0范围内稳定性较好.Ca2+对淀粉酶活性具有显著促进作用,而Fe3+和Cu2+对其活性具有强烈的抑制作用.     

鲐鲅鱼生产抗疲劳多肽酶解工艺初步研究

用动物蛋白酶和中性蛋白酶联合对鲐鲅鱼进行酶解.采用正交实验法优化制备鲐鲅鱼蛋白酶解物的最适工艺条件,探讨了影响鲐鲅鱼蛋白酶水解的主要因素.实验表明,最适的酶解条件为:动物蛋白水解酶与中性蛋白酶(酶活13万u/g)之比为2:1;加酶量为4.0%;酶解时间为4.5 h;酶解温度为50℃;酶解pH为7.0～7.5,在此条件下,鲐鲅鱼酶解液中氨基态氮浓度为1169.32g/100mL.     

黑曲霉HYA4菌株产果胶酶酶学性质研究

对黑曲霉HYA4菌株所产果胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶反应最适温度为48℃,果胶酶最适pH值为4.8,果胶酶活力稳定的pH范围为3.0-6.0;Km值为4.33mg/mL;金属离子Ca2＋、Mg2＋对果胶酶有较强的激活作用,Ba2＋对果胶酶也有一定的激活作用,Ag＋、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、K＋对果胶酶有抑制作用。由SDS-PAGE测定果胶酶的相对分子量为46000＆#177;3000Da;IEF电泳测定其等电点为4.7＆#177;0.2。     

羽毛的生物降解及其酶学性质的研究

羽毛角蛋白是一种环境污染有机废弃物,通过微生物对角蛋的进行降解为合理利用,可以使它成为丰富的饲料蛋白来源。适当的降解方法对于羽毛资源的转化有着重要作用。采用正交设计优化地衣芽孢杆菌细胞转化羽毛的条件,得出角蛋白酶的合成和羽毛的分解指标,三因子最合适配比为:液料比20:1,反应pH 7.5,BC细胞加量0.5克,40℃下120 r/min处理72 h,其中细胞加量对羽毛分解有关键影响。粗酶液最适温度在37℃,在35℃~40℃有很好的热稳定性。不同pH下酶活变化明显,在pH 5-8范围内比较稳定。     

南极假丝酵母(Candida antarctica)肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质

将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体.并将其电转化入毕赤酵母GS115中.通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子.重组细胞经过120 h培养后.发酵液上清酶活达到13 U/mL.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD.比原始脂肪酶略大.粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后.得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶.该酶最适反应温度为75 ℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性.     

枯草芽孢杆菌淀粉酶酶学性质的研究

对枯草芽孢杆菌（BacmussubtilisJL-7）产淀粉酶的酶学性质进行了分析。该淀粉酶的最适温度为65℃,最适pH为6．0,在pH6．0-80范围内稳定性较好。该淀粉酶的Km和Vmax分别为和0．785mg／mL,41．3μmol／min／mL。Ca2＋、K＋对淀粉酶活性具有显著促进作用,而Pb2＋、Fe3＋和Cu2＋对其活性具有强烈的抑制作用。     

碳羟基磷灰石对废水中Ni～(2+)的吸附性能研究

以废弃蛋壳为原料,通过煅烧法合成了碳羟基磷灰石。采用红外光谱法对其结构进行了表征。利用碳羟基磷灰石吸附模拟废水中的Ni2+,考察Ni2+初始浓度、pH值、吸附时间、吸附剂用量以及温度等因素对吸附效果的影响。结果表明:当废水中Ni2+初始浓度为30mg/L、pH=7、吸附时间为10min、吸附剂用量为0.08g、温度为35℃时,羟基磷灰石对Ni2+去除率接近100%。     

亲水性单胞菌几丁质酶发酵工艺优化

首次报道从温州浅海海水中筛选得到的一株产几丁质酶的亲水性单胞菌属细菌(Aeromonas hydrophila sp.)。在探索了碳、氮源和环境因子对细菌产酶影响的基础上,利用均匀设计法优化得到了较佳的产酶发酵培养基配方(g/L):胶体几丁质5.0,蛋白胨12.0,尿素2.0,MgSO4 0.5,K2HPO4 0.3,NaCl5.0,初始pH 6.5。在接种量6%,培养温度28℃,180 r/min的较佳工艺下振荡发酵5 d,该菌产酶活力达到1.89 U/mL。     

Bacillus sp.ZJU318脂肪酶发酵条件的优化及其酶学性质的研究

利用均匀设计法对Bacillus sp．ZJU318产酶的最佳培养基进行了快速优化研究。结果表明，其最适产酶培养基为：3．28％黄豆粉，0．023％蔗糖，0．075％K2HPO4，配制时的pH为12（灭菌后pH为8～9）；此外，其发酵的最佳条件为：发酵温度28℃，接种量20％，摇瓶装量20mL（250mL三角瓶）。在最适的发酵条件下，脂肪酶的发酵水平可达24．7U／mL。Bacillus sp．ZJU318脂肪酶作用的最适温度为45℃，40℃保温1h，活力几乎没有损失；但是，在50℃和60℃的条件下保温1h后，酶活降低得比较明显；酶作用的最适pH为9．0。在pH7～10，该脂肪酶较稳定，但是在酸性的环境中，酶的稳定性较低。     

黄孢原毛平革菌胞外过氧化物酶系的固定化及性质研究

通过共价结合法将木素过氧化物酶(Lip)与锰过氧化物酶(Mnp)固定于聚氨酯泡沫上.固定化酶的Lip与Mnp活力分别为1.45 U/g(泡沫干重)和0.49 U/g(泡沫干重),酶活回收率分别达到34.79%和27.78%.固定化酶Lip和Mnp热稳定性提高,在温度达到50℃时酶活损失均少于20%.与游离酶相比,固定化酶稳定的pH范围前后都扩大了0.5个单位.固定化酶重复利用性好,连续使用6次,酶活力损失少于3%.     

南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质

将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体,并将其电转化入毕赤酵母GS115中。通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子。重组细胞经过120 h培养后,发酵液上清酶活达到13 U/mL。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD,比原始脂肪酶略大。粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后,得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。该酶最适反应温度为75℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性。     

一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。     

平菇纤溶酶酶学性质研究

血栓栓塞性疾病严重威胁人类生命和健康,溶栓治疗是血栓性疾病安全有效的手段。目前临床使用的溶栓药物疗效肯定但还存在许多缺陷,而且价格昂贵。因此对高效、快速、副作用小、价格低廉的新型溶栓药物的研究开发仍在继续。微生物是获得溶栓药物的重要来源,本课题对平菇纤溶酶的部分酶学性质进行了研究。研究表明此平菇纤溶酶最适作用p H值为7.4;在p H5.0~9.0范围内稳定性很好。此平菇纤溶酶的最适作用温度为45℃,在45℃以上时此平菇纤溶酶酶活下降较快,在31~45℃时酶活变化较小,由此可见此平菇纤溶酶对高温较为敏感,但在人体正常体温条件下可保持稳定。金属离子对此平菇纤溶酶有不同程度的抑制作用和激活作用。     

黑曲霉Aspergillus nigerS菌株所产β-葡糖苷酶 的纯化和酶学性质

利用黑曲霉Aspergillus niger S菌株, 通过液体发酵的方法, 得到了一种可同时高效水解大豆异黄酮糖苷成大豆异黄酮,水解白藜芦醇苷成白藜芦醇的糖基水解酶.该酶经硫酸铵分级沉淀、离子交换层析及分子排阻色谱纯化得单一条带, 经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的表观分子量约为165ku 1u=1.660540×10-27kg。 ,比通常所报道的传统β-葡糖苷酶都大,该酶的最适反应温度为50℃; 最适pH值为5~10.     

响应面法优化米曲霉HML366产β-葡萄糖苷酶发酵培养基

文章研究旨在优化前期筛选到的米曲霉HML366产β-葡萄糖苷酶的培养基条件。通过单因素实验和响应面设计对米曲霉HML366产β-葡萄糖苷酶的培养基条件进行了优化组合,确定最佳的发酵培养基配方为:甘蔗渣3.49%,豆饼粉0.375%,KH2PO4 0.255%。在此培养条件下得到β-葡萄糖苷酶酶活力达92.64 U/g,是未优化前酶活71.12 U/g的1.30倍。     

软质干酪的酶凝乳工艺研究

为了探求软质干酪的最佳酶凝乳工艺,采用L9(34)和L16(45)正交试验,研究了皱胃酶、木瓜酶、米黑毛霉酶三种单酶的最佳工艺以及复配酶最佳工艺,确定了皱胃酶添加量0.0125%,凝乳温度32℃,时间45 min;木瓜酶添加量0.01%,凝乳温度33℃,时间35min;米黑毛霉酶添加量0.0035%,凝乳温度32℃,时间40 min;复配酶最佳工艺参数为皱胃酶用量0.004%,木瓜酶用量0.006%,米黑毛霉酶用量0.0023%,温度32℃,凝乳时间30 min。结果表明,单酶复配具有协同作用,能够有效优化干酪酶凝乳工艺。     

厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达

厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。     

王祖农菌酯酶基因表达蛋白EstA酶学性质分析

利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因est A,对其表达蛋白Est A的酶学性质进行分析,发现Est A的最适温度是48℃,在60℃仍具有较好的热稳定性;最适pH是8.0,在p H7.5-8.5具有较好的p H值稳定性。Zn~(2+)对酶的活性具有促进作用,而Mn~(2+)、Na~+等其他金属离子,有机溶剂PMSF对酶的活性具有强烈的抑制作用。上述性质中碱性酯酶、Zn~(2+)强烈激活作用及SDS耐受力等特点,表明该酶具有重要的应用价值,后续研究工作还需依赖于基因工程技术进行改造与提高。     

酶解马铃薯辛烯基琥珀酸淀粉酯的制备及性能研究

以马铃薯淀粉为原料,通过单因素实验方法研究湿法工艺、喷雾工艺制备酶解马铃薯辛烯基琥珀酸淀粉酯,并对性能进行研究。确定制备参数:淀粉乳浓度40%、p H值8.9、温度35℃、时间4h、酸酐3%。酶添加量为0.2(U/ml),在此条件下,乳液乳化能力达到保油4.5倍,乳液稳定性48h,0.1,干粉溶解不托尾,溶解时间30min以内,干粉流动性测定值2.5。     

一株产纤维素酶的诺卡氏属菌株筛选及产酶条件研究

通过对秸秆和牛粪干的增殖培养,从中分离、纯化获得42株菌株。经滤纸条崩解实验、溶菌圈大小测定及CMCase(羧甲基纤维素酶活)测定,筛选得到1株代号为GNA120对纤维素降解具有优势的放线菌,初步鉴定为诺卡氏菌属(Nocardia spp.)。实验确定该菌株的最佳产酶条件为:温度28℃;pH值5.6;硫酸铵作氮源时产酶能力最强。