氧化硫硫杆菌质粒pTt12酶切图谱分析及其在E．coli中克隆

目的改造氧化硫硫杆菌的质粒pTt12,建立一个既能在氧化硫硫杆菌中复制又能在大肠杆菌中复制的穿梭质粒,为用基因工程改造在细菌浸矿、环境保护中使用的．T-业菌株提供实验根据。方法首先进行氧化硫硫杆菌（Thiobacillusthiooxidans-1）的pTt12质粒的限制性内切酶XhoⅠ、PvuⅡ、Bgl Ⅱ、HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、BamHⅠ和SalⅠ酶切分析,构建质粒pTt12的物理图谱。通过pBR325质粒（E．cold的SalⅠ切点和pTt12质粒的XhoI切点进行了体外重塑,构成了一个分子量为12．71Md的杂合质粒pSD125,并成功地转入了大肠杆菌HB101菌种。结论经分子量测定、酶切分析、转化试验证明,pSD125质粒确系pBR325和pTt12重组而成,且能在大肠杆菌HB101和Thiobacillusthlooxidans--1中转化克隆。     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了绿色木霉WS-71纤维素酶系中的内切型β-1,4-葡聚糖苷酶组分。通过SDS-PAGE电泳测得分子量为41.8kD,该酶组分的最佳水解温度是50℃,最适pH为4.6。酶在温度40～70℃和在pH4.0￣5.0的区间稳定。Fe3+,K+,Ca2+,Mg2+,Mn2+对酶解有促进作用,Hg2+,Cu2+,Zn2+和EDTA对酶解有不同程度的抑制作用。作用于羧甲基纤维素钠的Km值为16.78mmol/L,Vmax为5.612×10-4mol/min,Kcat为6.97S-1。     

厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达

厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。     

在HBsAg阳性母亲流产的胎儿肝细胞基因组中检出整合型HBV DNA顺序

从9例HBsAg(RPHA法)和HBeAg(ID法)均阳性母亲流产的9例胎儿肝组织抽提高分子量肝细胞DNA,与~(32)P标记的克隆HBV DNA探针进行Southern blot杂交试验,以检测胎肝细胞中HBV DNA的存在状态,并与胎儿的血清学、免疫电镜及免疫组织化学的检测结果相比较。经EcoRI酶切的9例胎肝细胞DNA与放射性标记的探针杂交后,F27胎肝DNA样品在9.0kb和5.2kb处各有一条杂交带,F31胎肝DNA样品在8.2kb、6.6kb及4.8kb处有杂交带,而F32胎肝DNA样品出现的两条杂交带则分別在6.6kb及5.4kb处(图略),     

西藏地区乙型肝炎病毒基因及其亚型的研究

目的 探讨西藏地区乙型肝炎病毒及其亚型;方法 随机选择HBsAg阳性携带者34例,慢性乙型肝炎患者9例,应用FQ-PCR方法检测血清HBV-DNA含量;采用聚合酶链反应限制性酶长度多态性分析法,通过PCR扩增出目标基因片段,然后用特定的限制性内切酶进行酶切,根据酶切图谱进行基因型及亚型的测定.结果 43例HBV-DNA定量阳性血中c基因型占83.72%(36/43例);B型占6.9%(3/43);B、C混合型占4.65%(2/43);D型占4.65%(2/43).B基因型的亚型中Ba6.91%(5/43);B、C型混合型中C2亚型4.65%(2/43).结论 西藏地区HBV基因型以C型为主,B型次之,B型亚型以Ba占优势.     

一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。     

昆虫病原白僵菌的分子生物学研究进展

主要阐述了可溶性蛋白图谱、同功酶多态性、限制性片段长度多态性(RFLP)和DNA随机扩增多态性(RAPD)等分子标记技术在昆虫病原白僵菌鉴定、分类和进化中的应用,以及病原白僵菌入侵昆虫体壁过程中各种酶作用的研究情况,同时简要介绍了白僵菌作为生物活性物质材料的研究进展。     

黑曲霉HYA4菌株产果胶酶酶学性质研究

对黑曲霉HYA4菌株所产果胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶反应最适温度为48℃,果胶酶最适pH值为4.8,果胶酶活力稳定的pH范围为3.0-6.0;Km值为4.33mg/mL;金属离子Ca2＋、Mg2＋对果胶酶有较强的激活作用,Ba2＋对果胶酶也有一定的激活作用,Ag＋、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、K＋对果胶酶有抑制作用。由SDS-PAGE测定果胶酶的相对分子量为46000＆#177;3000Da;IEF电泳测定其等电点为4.7＆#177;0.2。     

老年人血小板谷胱甘肽过氧化物酶的纯化和分子特性研究

报道老年人血小板谷胱甘肽过氧化物酶由ＳｅｐｈａｒｏｓｅＱ柱层析、ＭｏｎｏＱＨＲ５／５ＦＰＬＣ和亲和层析后，经ＳＤＳ／ＰＡＧＥ鉴定为一条区带，其分子量为２３ｋＤａ．等电聚焦测定ＰＩ为５．１．用Ｓｕｐｅｒ－ｏｓｅＨＲ１０／３０柱经ＦＰＬＣ测定的分子量为９２ｋＤａ，这表明在自然状态下血小板谷胱甘肽过氧化物酶由四个相同的亚单位组成。这些结果与人红细胞谷胱甘肽过氧化物酶的特性相一致．     

枇杷果肉酶促褐变的研究——I.枇杷果肉中多酚氧化酶的分离、纯化和动力学特征

枇杷果肉制成丙酮粉,经硫酸铵分级沉淀、透析,DEAE-纤维素柱层析、ACA_(34)柱层析和FPLC分离等方法,分离和纯化得到多酚氧化酶的两个同工酶(酶A和酶B).酶B由一个或几个分子量为42×10~3D的亚基组成.酶的动力学研究表明:酶A、酶B的K_m(多巴胺为底物)均为2.40×10~(-3)mol/L,以邻苯二酚为底物时,酶A和酶B的K_m分别为0.163×10~(-3)mol/L和1.54×10~(-3)mol/L.酶底物特异性表明,酶B是邻位二酚酶,不能作用于单酚和间位二酚.     

西部开发中资金支持问题的对策研究

缩小东西部差距、加快西部地区的开发,资金问题至关重要。只有正视东西部地区在资金上的不平衡,积极扩大西部地区融资渠道,才能打破资金瓶颈,保证西部地区的可持续开发。     

农民工NGO发展的制约因素分析

农民工NGO是因应社会需求而成立的服务于农民工群体的公益组织,但由于涉及到"劳工"、"人权"等敏感话题,目前该类组织的发展可谓举步维艰。在构建和谐社会的背景下,正确认识农民工NGO发展的制约因素,对于推动该类组织的发展具有一定的参考意义。     

Dietary restriction (DR) and its advantages

Dietary restriction (DR) also called dietary control or calorie restriction is reported to have many advantages with regard to human health. It leads to suppression of obesity, mitigates free radicals and increases available antioxidants which are accounted for extending the life span of individuals. DR is also reported to induce synthesis of heat shock proteins in animals as a control mechanism against stress. Further, it is known to play a significant role in decreasing toxicity and lethality due to a variety of toxic chemicals and drugs by stimulating tissue repair damaged by the toxicants leading to restoration of intact organ and its functions. Moreover, extensive work done on animals indicate DR has an important role in suppressing certain types of cancer. In this review an effort is made to highlight the various advantages of DR from the point of human health perspective.     

谈谈科学的宽容精神

宽容是一种生活智慧 ,也是一种科学精神。科学的进步和发展需要宽容精神 ,科研人员的成长和成功需要宽容。同时宽容又是有限度的 ,不可滥宽容 ,我们提倡在一定原则和规范下的宽容。     

从人力资本管理实践分析人力资本的二重性

从人力资本管理的实践，通过企业产权结构的重新调整，通过调整高层企业治理结构，通过企业章程，法律，市场等分析了人力资本的二重性激励和约束机制的重要性。     

基于领域限定网络检索的术语相似度计算

在分析基于搜索引擎的术语相似度算法基础上,设计并实现了基于领域限定网络检索的术语相似度算法,通过将语义上下文和领域上下文引入检索式构造过程,有效提升了特定领域术语相似度计算效果。     

How do users cope with trial restrictions? A field experiment on free trial software

Software vendors often provide free downloads of free trial versions of software but normally with some restrictions attached (e.g., time and/or functionality restrictions). The question arises as to what extent the restrictions could influence a user’s propensity to procure the full version. This study seeks to answer this question through two important theoretical backbones: expectation-disconfirmation and coping. Based on these two theories, we built a research model of a user’s coping reactions toward software trial restrictions. A field experiment was conducted to verify the hypotheses. Results show that negative disconfirmation on time/functionality restriction positively influenced the adoption of rational thinking strategy, which in turn positively influence the level of action coping. As a result, the degree to which rational thinking and action coping strategy were exploited positively influenced a user’s willingness to pay for the full-version software. Theoretical and practical implications of the findings are discussed.     

企业网络的多重效应分析

传统的战略理论由于将单个企业置于一种单独决策和自由行动的状态而存在理论缺陷,企业网络理论试图弥补这一缺陷,指出企业的行为是嵌于社会网络的,企业网络能为成员提供多种竞争优势：隐性知识利益,信息利益,制度利益,但与此同时企业网络的长期约束效应不应被忽视,企业长期受到路径依赖、锁人效应、组织趋同效应的威胁。     

能源约束与中国可再生能源开发利用对策

开发利用可再生能源是解决中国经济发展和能源约束矛盾的有效途径。可再生能源（Renewable Energy）是指经利用消耗后可以不断得到补充、“再生”的能源。这类能源有太阳能、水能、风能、地热能、生物质能、海洋能、潮汐能等,是一种取之不尽,用之不竭的能源资源。科学地开发可再生能源,提高可再生能源对化石能源的替代,是坚持以人为本,树立和落实科学发展观的具体体现,是转变经济增长方式,从根本上缓解能源约束和环境压力,走可持续发展道路的战略选择。本文重点对以下内容进行了研究：分析了我国的能源约束与经济增长的矛盾,指出化石能源面临枯竭,不足以支持我国经济增长的事实;针对我国可再生能源开发利用潜力巨大,得出开发利用可再生能源可以保障我国能源安全、有利于保护环境和卖现经济的可持续发展的结论;分析了我国在可再生能源开发利用过程中存在的问题;最后对解决我国可再生能源开发利用提出相关对策和建议。     

国内制造业集群式转移趋势及其约束条件研究

以制造业的宏观生产环境发生变化为背景，文章通过实证分析认为制造业企业生存状况决定了国内集群式转移的趋势正在形成。转移的约束条件是复杂的，对这些条件进行归纳与分类，发现具有主观性质的人为因素在集群转移过程中的作用被忽视或曲解。制造业的集群式转移即资本等中性因素对投资地点的选择取决于不同经济区域的约束力条件之间的对比。