一类新型含炔基结构查尔酮的合成及表征

报道了一种新型含炔基查尔酮的合成方法,以邻溴苯甲醛和含取代基苯乙炔为原料,通过Sonogashira偶联反应,生成的炔基苯甲醛进一步与苯乙酮反应生成含炔基结构的查尔酮,此类查尔酮在过渡金属催化的串联反应研究领域有着重要的作用,该类化合物拓展了金、钯、铜等过渡金属参与催化的有机合成反应的底物范围,对进一步研究过渡金属参与的串联反应有一定的指导意义。该方法具有原料简单易得、反应过程操作容易、收率高等优点,产物经红外、核磁共振和质谱等分析手段确证结构。     

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNALeu的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组

第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1 和tRNALeu2 ,研究tRNA与亮氨酰 tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高 1 0倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种,研究了一个在CP1结构域插入 40个氨基酸残基的变种LeuRS A对tRNALeu2种等受体的识别,证明了tRNA Leu1 和tRNA Leu2 接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS A识别的关键.　　第二部分:在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因 1 0倍以上.研究了它的α 亚基的N 端变化(LAEP →MGIP )对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N 端亲和水解的酰化酶     

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNALeu的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组

第一部分为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1和tRNALeu2,研究tRNA与亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高10倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种,研究了一个在CP1结构域插入40个氨基酸残基的变种LeuRS-A对tRNALeu2种等受体的识别,证明了tRNA Leu1和tRNALeu2接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS-A识别的关键.第二部分在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因10倍以上.研究了它的α-亚基的N-端变化(LAEP…→MGIP…)对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N-端亲和水解的酰化酶.     

鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析

根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物，应用RT-PCR技术，从脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession，AY628648）。扩增片段全长591bp，共编码197个氨基酸的前体蛋白，其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失，分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达，获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达，并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。     

黑曲霉淀粉酶酶学性质研究

本实验对黑曲霉JLSP-15淀粉酶的酶学性质进行了研究.该淀粉酶的最适温度为60℃,其热稳定性较差;最适pH为pH 6.0,在pH4.0-8.0范围内稳定性较好.Ca2+对淀粉酶活性具有显著促进作用,而Fe3+和Cu2+对其活性具有强烈的抑制作用.     

微生物所在大肠杆菌高效全细胞催化青霉素方面取得进展

<正>中科院微生物所陶勇课题组在大肠杆菌中表达青霉素扩环酶(DAOCS),利用全细胞催化高效转化青霉素G生成G-7-ADCA。该研究通过对大肠杆菌初级代谢网络的精巧设计,重构TCA并偶联生物合成反应,实现高效的生物转化。展示了通过重构的TCA循环来推动目标酶促反应的可能性。该研究策略在α-酮戊二酸依赖型加氧酶类以及其他与     

茶树菇中多酚氧化酶的活性研究

本文通过分光光度法研究茶树菇中多酚氧化酶的活性,以磷酸盐作为缓冲液,提取茶树菇中多酚氧化酶的粗酶液,以邻苯二酚为底物,研究了多酚氧化酶作用的最适条件以及一些抑制剂对酶活性的影响。茶树菇中多酚氧化酶酶促反应的适宜温度25℃,最适pH值为5.0,亚硫酸钠、维生素C为较好的抑制剂,柠檬酸对多酚氧化酶的抑制作用随浓度不同而不同。     

羧甲基壳聚糖体外溶菌酶降解的研究

目的研究不同取代羧甲基壳聚糖(CMC)的生物降解性.方法通过体外酶解试验,用粘度测定法研究了在溶菌酶作用下CMC的分子量.结果溶菌酶作为催化CMC降解的非专一性酶,能有效地催化CMC降解;酶解反应程度与酶浓度成线性关系;随着羧甲基壳聚糖取代度的增加,CMC的降解速度加快.结论通过控制取代度,可以得到不同生物降解要求的羧甲基壳聚糖.     

一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。     

家蚕质型多角体病毒(苏州株)基因组片段8 cDNA克隆与分析

为研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV1)的遗传与变异、探讨S8片段的功能,通过RT-PCR克隆BmCPV1苏州株(BmCPV1-SZ)S8的cDNA,并对其核苷酸序列(GenBank登录号:GQ150539)和编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示:S8由1328 bp构成,具有一个编码390个氨基酸残基的开放阅读框;在BmCPV1-SZ S8的编码氨基酸序列与BmCPV1-I和BmCPV1-H的一致性达93%,但与其他非CPV1型的相似程度较低;在推导的蛋白的氨基酸序列中间区域;具有E-丰富和P-丰富的区,域,其局部区域的氨基酸序列与某些蛋白的功能(细胞周期控制、蛋白降解和RNA降解)区域的序列具有一定的相似性;结构域家族分析显示,BmCPV1-SZ S8编码蛋白属GcrA家族,具有与DNA结合的HTH结构域.Blocks分析显示,S8编码蛋白同时具有DNA聚合酶家族、RNA聚合酶2的结构功能域;高级结构分类显示,S8编码蛋白具有与TIM桶酶、肽酶、核苷三磷酸水解酶相似的同源结构.推测该蛋白具有转录调控因子和多功能酶的功能.基于S8编码的氨基酸序列的进化分析显示,相同类型的CPV聚为一类,同一宿主不同类型的CPV相距较远,推测CPV主要根据其类型聚类,而宿主昆虫对聚类的影响相对较小.