新冠病毒核衣壳蛋白在大肠杆菌中表达降解的研究

截止2020年5月9日,全球感染新型冠状病毒人数已经达到370多万人,累计死亡人数达到26万多人。核衣壳蛋白(N蛋白)包裹新型冠状病毒(SARS-CoV-2)基因组RNA,也是血清抗体学检测的重要原材料之一。研究发现利用大肠杆菌表达纯化核衣壳蛋白时,N蛋白可以降解为大小为25KDa左右的肽段。本文为优化大肠杆菌中N蛋白表达纯化提供了优化条件,也为新冠病毒药物的开发提供了新的药物靶点。     

2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的结构和致病机制概述

2019年末出现的2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)与人血管紧张素转换酶2(ACE2)结合的高亲和力,促成它在世界范围的广泛传播,并造成了新型冠状病毒病(COVID 19)疫情的全球大流行,对人类的健康卫生和经济活动产生了巨大的负面影响。本文从SARS-CoV-2的结构、与ACE2的结合特点及对部分器官的影响三个方面概述其致病机制。     

用高度特异性王浆主蛋白1多克隆抗体ELISA法检测蜂王浆新鲜度(英文)

目的:为蜂王浆主蛋白1(MRJP1)的快速检测和鉴别提供科学依据,为蜂王浆的质量控制提供技术支持。创新点:首次比较了MRJP1特异性多克隆抗体与MRJP1重组表达蛋白多克隆抗体对王浆主蛋白家族的免疫反应差异,验证了蜂王浆中MRJP1蛋白降解与保温时间的相关性,建立了以MRJP1作为蜂王浆新鲜度生物标志物的快速检测方法。方法:通过蜂王浆主蛋白家族蛋白的氨基酸序列同源性分析,筛选出MRJP1的特异性多肽区域,进行人工合成,免疫兔子后取血清制备成特异性多克隆抗体。用蛋白质印迹法(Western blot)检测了MRJP1特异性多克隆抗体与MRJP1重组表达蛋白多克隆抗体对王浆主蛋白家族的免疫反应。以新鲜蜂王浆为对照品,用MRJP1特异性抗体酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)法和变性电泳胶灰度扫描法分别测定保温(40°C)7~49天的蜂王浆中MRJP1含量的变化,并进行了相关性分析。结论:MRJP1的特异性抗体对MRJP1蛋白具有专一的免疫识别特性,可特异性地检测代表蜂王浆新鲜度的MRJP1含量变化,并鉴别蜂王浆的真伪。     

癌胚抗原(CEA)胶体金检测试纸条的研制

目的:研制一种简便、快速、灵敏的检测血清中癌胚抗原(CEA)的试剂.方法:采用胶体金免疫层析法,用胶体金标记CEA单克隆抗体,用另一株CEA单克隆抗体包被硝酸纤维素膜,应用双抗体夹心的原理,制成胶体金检测试纸条.结果:用国家标准品进行检测,该试剂灵敏度达到5ng/ ml;对165份临床病人血清进行检测,结果与ELIsA法相比总符合率为99.1%.结论:癌胚抗原(CEA)胶体金检测试纸条简便快速,结果准确,能满足急诊检验的需要,具有临床推广应用价值.     

新型冠状病毒感染后治愈的女性可以进行母乳喂养吗？（英文）

概要:浙江大学医学院附属第一医院感染科收治一名新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的妊娠晚期孕妇。在其住院期间,患者进行了剖腹产术,新生儿被证实无SARS-CoV-2感染。结合已有的相关文献报道,SARS-CoV-2通过母婴垂直传播的依据不足,同时乳汁的病毒检测阴性,因此目前不能证明SARS-CoV-2病毒能通过乳汁传播。通过研究,我们建议感染SARS-CoV-2的孕妇,在治愈出院后,应经过两周隔离观察,并且病毒复查结果为阴性,才可以进行母乳喂养。     

磁微粒化学发光法与胶体金法在临床SARS-CoV-2抗体检测中的性能比较

目的:探讨磁微粒化学发光法(CLIA)与胶体金法检测新型冠状病毒抗体IgM、IgG的差异。方法:分别用CLIA与胶体金法对新型冠状病毒IgM、IgG抗体进行测定,分析两种检测方法检测新型冠状病毒抗体的敏感性以及最低检测限值。结果:CLIA检测新型冠状病毒IgM、IgG的S/CO值小于1时,胶体金法检测均为阴性;S/CO值大于10时,胶体金法检测IgM的阳性率为100%、检测IgG的阳性率为99.14%;S/CO值大于1小于10时,胶体金法检测新型冠状病毒IgM与IgG的阳性率分别为0.87%与1.56%。结论:CLIA法检测新型冠状病毒IgM、IgG的检出率高于胶体金法;CLIA检测新型冠状病毒IgM与IgG最低检测的S/CO值≥1判定为阳性,而S/CO值大于10时,胶体金法显示阳性,CLIA的阳性阈值更低。     

2004年中国教育事业发展状况(节选)

高等教育规模继续扩大。2004年全国各类高等教育在学人数已超过2000万人。高等教育毛入学率达到19%,比上年提高2个百分点。本专科招生和在校生规模持续增长。2004年全国共招收普通本科、高职(专科)学生447.34万人,比上年增加65.17万人,增长17.05%,其中本科招生209.92万人,高职(     

甲胎蛋白(AFP)胶体金检测试纸条的研制

目的:研制一种简便、快速、灵敏的检测血清中甲胎蛋白(AFP)的试剂.方法:采用胶体金免疫层析法,用胶体金标记AFP单克隆抗体,用另一株AFP单抗包被硝酸纤维素膜,制成AFP胶体金检测试纸条.结果:用国家标准品进行检测,该试剂灵敏度达到20ng/ml;对157份血清样本进行检测,结果与ELISA法相比总符合率达99%.结论:AFP胶体金检测试纸条简便快速、结果准确,能满足临床检测需要.     

大型溞胆碱酯酶蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备和适用性研究（英文）

目的:原核表达并纯化大型溞胆碱酯酶(ChE),制备鼠抗大型溞ChE多克隆抗体,并对抗体的适用性进行研究。创新点:首次通过原核表达获得了大型溞重组ChE蛋白,通过免疫小鼠获得了高效价、高特异性的多克隆抗体,通过样品检测证明了抗体的适用性。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术获得大型溞ChE基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET-29a(+),构建重组表达质粒p ET-ChE,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达;对表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶活性检测,并对蛋白进行纯化(图4);使用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体(图5),用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对处于三唑磷和低温胁迫下以及经反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量变化进行检测(图7、表6和7),以评价抗体的可适用性。结论:获得了高纯度的ChE重组蛋白;免疫小鼠后,获得了特异性强、高效价的抗体;通过对处于三唑磷和低温胁迫下以及经过反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量的检测,证明了抗体的适用性。     

2019冠状病毒病（COVID-19）概览（英文）

2019年12月中国湖北省武汉市爆发由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severeacuterespiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒肺炎。2020年2月11日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将该疾病正式命名为COVID-19(coronavirus disease2019)。COVID-19临床表现多样,典型表现为发热、干咳和乏力,常出现肺部受累。SARS-Co V-2传染性较强,人群普遍易感。野生动物宿主和患者为SARS-Co V-2主要传染源,呼吸道飞沫传播和接触传播为主要传播途径。自发现该病流行以来,中国政府和科学界迅速明确了此次疫情病原体,并及时向全世界公开病毒基因序列,同时采取一系列措施控制疫情。全球科研工作者从新型冠状病毒肺炎的病原生物学和发病机制、流行病学、临床特征、诊断治疗和药物疫苗研发等各方面入手,开展了一系列研究工作。本文通过综述最新研究成果、专家共识,以及中国抗疫经验,以期加强对该新发传染病的认识,为防控治疗提供参考。     

绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用

许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白,这种蛋白质结构很特殊,在受到蓝光或紫外线刺激时可以发射绿色荧光,并不需要任何协同因子、底物,适合用作普遍的报告标记,尤其适合于活体细胞或组织。而且它发出的荧光稳定,检测简单,结果真实可靠。并且GFP对光漂白、氧化剂、还原荆以及其他许多化学试剂具有极强的稳定性．易于构建载体。它独特的性质引起了生物学界的广泛关注。本文简要地概述了绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用,包括蛋白融合,细胞筛选,定位标记,基因表达调控,计算细胞生长速度等。     

芥菜中PP2A的生物信息学初步分析

以芥菜(Brassica juncea)中具有抗逆作用的植物蛋白磷酸酶PP2A为例,对其进行了生物信息学的初步分析。预测了PP2A的一级结构,二级结构及其基本性质。为生物信息学在研究抗逆蛋白中的应用提供了方法参考,为进一步研究PP2A在抗逆生理中的功能提供了有用的理论依据。     

柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达

柑橘黄龙病病菌的外膜蛋白(omp)极易被宿主免疫系统识别为外来物质,所以其被用制备抗体来检测柑橘黄龙病菌.本实验中截取了omp基因上的一段长为1 071 bp的片段,将其连接到p GEX6P1载体中制成了重组质粒omps-6p1进行原核诱导表达.结果表明,重组质粒可成功诱导出目的蛋白.     

Mo(Ⅵ)-DBPF-PVA分光光度法测定尿蛋白

提出了一个借钼(VI)-4,5-二溴苯基荧光酮(DBPF)-聚乙烯醇(PVA)与蛋白质显色反应光度法测定微量尿蛋白的分析方法.在pH=2.0,牛血清蛋白能与Mo(VI)-DBPF- PVA形成紫红色络合物,最大吸收波长为570nm,牛血清蛋白含量0-5μg/mL范围内服从Beer定律.尿液中其它成份不干扰测定.用拟定的方法测定人尿蛋白,获得满意结果.     

热休克蛋白65与血管内皮生长因子121偶联复合物的免疫学特性研究

为了提高血管内皮生长因子(VEGF)121的免疫原型,文章用戊二醛一步偶联法将VEGF121与HSP65偶联形成HSP65-VEGF121复合物,并研究其免疫学效果,结果发现HSP65可以提高VEGF121的免疫原性,但抗肿瘤效果并未显著增强.     

三溴偶氮胂镧(Ⅲ)与蛋白质相互作用的反射散射光度研究

研究了微晶石蜡吸萃蛋白质-三溴偶氮胂镧(Ⅲ）复合物的条件，并设计了固相反射散射分光光度直接测定石蜡相中蛋白质的方法。所拟定的方法有较好的灵敏度和选择性，可以用于实际生物样品中蛋白质含量的测定．     

树突状细胞核蛋白1的核定位信号鉴定

根据GenBank数据库中树突状细胞核蛋白1(DCNP1)的基因序列,通过PCR体外扩增构建野生型和突变型DCNP1,与GFP结合后转染细胞表达,通过对全长的树突状细胞核蛋白1(DCNP1)及其缺失突变体进行真核表达,分析其117-119aa序列对DCNP1核定位的影响。结果表明117-119位氨基酸对该蛋白的核定位是必须的,缺失该部分的突变体在真核细胞中丧失了核定位的特性。     

虫媒登革病毒的研究——Ⅱ.登革病毒非结构蛋白NS1的纯化、鉴定及其在临床检测应用

本文从纯化Den2 NS1,Mab入手,自制了Mab亲和层析系统,从感染Den2的细胞膜中,分离提取了天然的Den 2 NS1双体,比较其NGC株与我国地方株(H-87)NS1的理化性质及组成,并对某些重要的生物学性质进行了综合性研究。同时,利用上述研究结果建立了检测DF病人血清特异NS1抗体的新方法,探索其协助临床诊断及研究的可能性。     

白僵菌蛋白类代谢物对舞毒蛾毒性生测方法的研究

以舞毒蛾幼虫为试虫,采用饲喂、口服、表皮接触和血腔注射4种生测方法测定了白僵菌蛋白类代谢物提取液的毒性.结果表明,4种生测方法样品均表现一定的毒性,血腔注射生测所表现的毒性最高.通过对4种生测方法的比较分析,建议血腔注射法作为白僵菌的代谢物中毒素物质的生物测定首选方法.     

热休克蛋白(HSP70、HSP27)在食管癌组织中表达的意义

目的 :探讨HSP70和HSP2 7在食管癌组织中的表达情况。方法 :采用SP免疫组织化学染色检测 5 9例食管癌组织中HSP70和HSP2 7。结果 :HSP70和HSP2 7的总阳性率分别为 6 4.4 1% (38/5 9)和 5 8.6 2 % (34/5 8) ,HSP70和HSP2 7的共同阳性率为 30 .0 0 % (9/30 )。结论 :在食管癌中HSP70和HSP2 7普遍表达。