农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥的研究

耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参与了植物的抗旱过程.我们利用基因工程手段首先构建了植物DR1372-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法成功将目的基因DR1372转入拟南芥中,最后对阳性植株进行盐胁迫,证实了DR1372基因在拟南芥中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性.初步建立了农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥体系,为后续DR1372基因的功能研究工作提供了理论基础.     

拟南芥β-淀粉酶家族基因密码子使用特性分析

该研究分析了拟南芥9个β-淀粉酶家族基因（BAM1―BAM9）在cDNA和蛋白质上的同源性,分析了每个基因反映密码子使用特性的参数：GC含量、同义密码子第1～3位置中的GC含量、有效密码子数等.结果表明,拟南芥β-淀粉酶家族基因在密码子的使用特性上不存在的偏好性.Spss分析表明,ENc与GC3s%和GC%呈显著正相关（P〈0.05）.拟南芥β-淀粉酶家族基因序列间的同源性差异较大,在cDNA和蛋白质序列上的基因同源性分别为41.6%～64.2%和29.4%～62.6%,其中,BAM5和BAM6间的同源性最高.     

龙竹和麻竹FT同源序列的扩增与序列分析

根据拟南芥Flowering Locus T（FT）基因和水稻Heading date 3a（Hd3a）基因的序列设计引物,通过PCR扩增的方法分别从麻竹和龙竹基因组DNA中各得到长为334bp的DNA片段.经BLAST检索、基因结构分析和编码蛋白功能域预测等分析,初步确定所得DNA片段可能是麻竹和龙竹中的FT同源基因的部分序列.     

盐芥ATPase E Like基因的生物信息学分析

文章利用一系列的生物信息学软件分析了盐芥ATPase E Like基因编码蛋白的氨基酸组成、等电点、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质,并同拟南芥ATPase E1、E2、E3蛋白作了对比.结果表明:盐芥ATPase E Like基因编码蛋白分子式为:C1132H1867N325O349S9,属于不稳定蛋白;二级结构主要是以α螺旋为主.在所分析的指标中,盐芥ATPase E Like蛋白与拟南芥ATPase E1、E2、E3相比存在着一定差异.     

拟南芥总RNA的提取及RT-PCR扩增CBF1基因

CBF1基因的扩增是研究植物抗旱基因的前期工作。本研究用Trizol试剂法提取模式植物拟南芥叶片的总RNA,经过反转录进行PCR扩增,将产物DNA回收后,连接PCR片段与T载体,电击转化入E.coli大肠杆菌感受态细胞;涂平板长出菌落,挑取半个白斑菌落电泳鉴定转化子;鉴定完成后提取质粒,用双酶切法进行鉴定,结果表明获得CBF1基因。     

拟南芥Formin家族蛋白AFH14基因的克隆及功能结构域分析

应用RT-PCR的方法从拟南芥cDNA中克隆了AFH14的全序列,并对其功能结构域进行分析。发现所克隆的目的基因编码区全长3 102 bp,与基因组序列比对发现该基因包含18个内含子和18个外显子,编码1 033个氨基酸残基。通过与其它formin成员的序列比对分析,发现AFH14是一个典型的拟南芥II型formin,包括PTEN结构域。     

热激对拟南芥热激因子AtHsfA1a表达的影响

为探究热激对拟南芥热激因子AtHsfA1a表达的影响,对过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的植株进行39℃热激5 min后提取其RNA,应用RT-PCR技术对热激因子AtHsfA1a的RNA进行逆转录和扩增,并对其进行电泳检测.结果表明：过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在热激和常温下表达量均比野生型高;而且野生型拟南芥和过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在39℃热激下的表达量比25℃常温下的高,说明AtHsfA1a的表达受热激诱导,结果可为研究拟南芥热激因子AtHsfA1a作用机理提供科学依据.     

转AtRD26基因烟草抗旱与耐盐性研究

从拟南芥中克隆到一个受到干旱、高盐诱导表达的NAC类转录因子基因At RD26,常规方法构建植物表达载体p BI121-35S::At RD26,并以农杆菌介导法将其转入烟草.对转基因烟草植株进行了PCR及RT-PCR验证,以及经人工干旱、高盐胁迫后,测定植物抗逆相关生理指标.结果显示:At RD26基因可成功整合到烟草基因组中,并能够正常转录.与野生型植株比较,转基因植株游离脯氨酸和可溶性糖含量更高,增加幅度更大;而叶绿素含量降低幅度更小.结果表明,At RD26基因能有效提高转基因烟草对干旱、高盐胁迫的耐受性.     

转AtRD26基因烟草抗旱与耐盐性研究

从拟南芥中克隆到一个受到干旱、高盐诱导表达的NAC类转录因子基因At RD26,常规方法构建植物表达载体p BI121-35S::At RD26,并以农杆菌介导法将其转入烟草.对转基因烟草植株进行了PCR及RT-PCR验证,以及经人工干旱、高盐胁迫后,测定植物抗逆相关生理指标.结果显示:At RD26基因可成功整合到烟草基因组中,并能够正常转录.与野生型植株比较,转基因植株游离脯氨酸和可溶性糖含量更高,增加幅度更大;而叶绿素含量降低幅度更小.结果表明,At RD26基因能有效提高转基因烟草对干旱、高盐胁迫的耐受性.     

拟南芥NHX基因密码子使用特性分析

运用CodonW程序对拟南芥NHX基因密码子组成、同义密码子使用频率和全长编码区密码子使用各项参数的计算和统计分析．结果表明：密码子适应指数（CAI值）与最优密码子使用频率（FOP）、密码子偏爱指数（CBI）均呈显著正相关（P〈0．05）;有效密码子数（ENC）与同义密码子第3位碱基含量（T3s）呈极显著负相关（P〈0．05）．拟南芥NHX基因RSCU值〉1的密码子多以A或T结尾．     

拟南芥热激因子AtHsfAla在PET原核表达系统中的表达及纯化

以pErl30a为载体构建的表达拟南芥热激因子AtHsfAla的大肠杆菌EcoliM15（pET30a／His6一AtHsfAla）为实验材料,以IPTG诱导6XHis融合蛋白的表达并经过Ni2＋柱分离纯化AtHsfAla,再通过SDS—PAGE鉴定表达蛋白和纯化蛋白．结果显示,AtHsfAla蛋白在在PET原核表达系统中能够有效表达,并能通过亲和层析获得纯化的AtHsfAla蛋白．研究结果为揭示拟南芥热激因子AtHsfAla的作用机理奠定基础．     

拟南芥热激因子HsfA1a部分氨基酸的表达与纯化

以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1a C端氨基酸331到氨基酸486（简称△HsfA1a）的大肠杆菌Ecoli M15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IVFG）诱导表达△HsfA1a,再通过Ni—NTA—Agarose亲和层析纯化表达的△HsfA1a,通过SDS—PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的△HsfA1a．     

Overexpression of the phytochrome B gene from Arabidopsis thaliana increases plant growth and yield of cotton (Gossypium hirsutum)

The phytochrome B (PHYB) gene of Arabidopsis thaliana was introduced into cotton through Agrobacterium tumefaciens. Integration and expression of PHYB gene in cotton plants were confirmed by molecular evidence. Messenger RNA (mRNA) expression in one of the transgenic lines, QCC11, was much higher than those of control and other transgenic lines. Transgenic cotton plants showed more than a two-fold increase in photosynthetic rate and more than a four-fold increase in transpiration rate and stomatal conductance. The increase in photosynthetic rate led to a 46% increase in relative growth rate and an 18% increase in net assimilation rate. Data recorded up to two generations, both in the greenhouse and in the field, revealed that overexpression of Arabidopsis thaliana PHYB gene in transgenic cotton plants resulted in an increase in the production of cotton by improving the cotton plant growth, with 35% more yield. Moreover, the presence of the Arabidopsis thaliana PHYB gene caused pleiotropic effects like semi-dwarfism, decrease in apical dominance, and increase in boll size.     

A TOM1 homologue is required for multiplication of Tobacco mosaic virus in Nicotiana benthamiana

The AtTOM1 gene of Arabidopsis thaliana had been shown to be essential for the efficient multiplication of Tobacco mosaic virus(TMV) in A.thaliana.In this study,we cloned an AtTOM1-like gene from Nicotiana benthamiana named as NbTOM1.Sequence alignment showed that NbTOM1 is closely related to AtTOM1 homologues of N.tabacum and Lycopersicon esculentum with 97.2% and 92.6% nucleotide sequence identities,respectively.Silencing of NbTOM1 by a modified viral satellite DNA-based vector resulted in complete inhibition of the multiplication of TMV in N.benthamiana.The result suggests that inhibition of NbTOM1 via RNA silencing is a potentially useful method for generating TMV-resistant plants.     

拟南芥的室内培养技术进展

综述了拟南芥培养过程中常见的问题及解决方法,并介绍了一些实践经验。     

拟南芥MPK17基因在玉米中的电子克隆分析

文章主要运用生物信息学的方法,利用拟南芥MPK17基因在玉米中进行了电子克隆,并得到了目的基因,进一步对其DNA碱基序列与蛋白质氨基酸序列进行了分析,旨在为更好地研究MPK17基因提供一定的理论资料。     

植物生长调节剂对拟南芥菜生长发育的影响

植物生长调节剂对植物的生长发育有重要影响。本实验以模式植物拟南芥菜为材料,调查了外加生长素类和细胞分裂素类生长调节剂对拟南芥菜子叶、下胚轴和根生长的影响,使人们对植物生长调节剂在植物发育调控中的作用,以及在器官发育中的功能和作用的分子机理有更进一步的认识。     

拟南芥热激蛋白HSP70基因片段克隆实验体系的建立

以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系．首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoRⅠ酶切位点双链的人工接头,通过EcoRⅠ对其进行酶切．再与经过EcoRⅠ酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置人到感受态大肠杆菌细胞中（即转化）,并让这种细胞在含有Amp＋／IPTG／X—Gal的LB培养基上生长．挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆．