四种植物转化的研究

用根癌农杆菌的Ti质粒载体介导的基因转移技术对哈密瓜、柚子、芹菜和辣椒四种植物的外源基因导入进行了研究,得出了较好的结果。用于感染哈密瓜、柚子和芹菜的根癌农杆菌内含Ti质粒pGV3850::neo1103,该载体上含有一个npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶Ⅱ)基因,以供选择卡那霉素抗性的转化植物细胞及一个胭脂碱合成酶基因。用于感染辣椒的根癌农杆菌内含质粒pc-27,其上带一个npt-Ⅱ基因。     

大豆子叶节的多芽形成及其转基因植株的再生

以大豆品种小黑豆的子叶节为外檀体,通过附加外源的6-BA刺激子叶节,使其膨大增粗.切下子叶节培养,结果每个子叶节最高能分化出11颗正常的苗。利用含非致瘤性Ti质粒载体的根癌农杆菌感染巳膨大的子叶节,可得到转基因的再生绿苗.该质粒载体带有一个npt-Ⅱ基因(新霉素磷酸基转移酶Ⅱ基因)和一个胭脂碱合成酶基因.对再生植株的胭脂碱测定。NPT-Ⅱ酶活性检测及DNA分子杂交试验表明,外源基因巳导入大豆子叶节细胞,并能在植株水平表达出相应的性状。     

幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的　构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法　采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果　PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论　成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.     

植物的基因转移及其发展前景

自本世纪四十年代Avery首次阐明肺炎双球菌的遗传转化机理以来,人们一直在探索适合植物转化的途径,直至1974年,Vandarl beke等人在根癌农杆菌中发现一种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒后,以此质粒为基础的植物遗传转化研究获得迅速发展,特别是1985年Horsch等人首创的叶园盘法,由于其方法简单,效果良好,因而开创了用植物外植体为材料进行基因转化的新途径,可以说这是转基因研究中的一个重要里程碑。转基因植物的发展如此迅速,意义也非常重大,在综合分析了国内外有关文献的同时,结合我们近年来的工作体会,对转基因植物的研究发表一下个人的看法及观点。     

转基因玉米的安全性讨论

<正>随着科技的进步,利用转基因技术拓展玉米传统遗传育种模式,取得高产优质的玉米品种已成为当今一大趋势。所谓转基因技术是以现代分子生物学为基础,采用基因枪或根癌农杆菌质粒介导等方法进行遗传转化、基因克隆,将目标基因转入到受体中,从而获得具有高产、优质的玉米产品,玉米转基因[1]育种是这项技术应用于玉米育种的重要成果之一。然而,自转     

农杆菌植物界的转基因大师

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,生活在植物的根的表面,依靠由根组织渗透出来的营养物质生存。它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物或裸子植物的受伤部位,并诱导植物产生冠瘿瘤或发状根。其巾,根癌农杆菌是农杆菌的重要组成部分之一。     

PHD类转录因子GmPHD2和Bar基因的植物表达载体的构建

利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。     

转基因辣椒植株再生的研究

辣椒茎尖及下胚轴切段，能被含Ｔｉ质粒ｐＣ２７的根癌农杆菌感染。该质粒带有一个ｎｐｔ－Ⅱ基因（新霉素磷酸基转移酶Ⅱ基因）以供选择卡那霉素抗性的转化辣椒细胞。卡那霉素抗性绿苗经ＮＰＴ－Ⅱ酶活性检测及ＤＮＡ分子杂交试验表明，外源基因已导入辣椒细胞，并能在植株上表达出相应的性状。     

植物基因是如何转移的?

正把一种外源性基因转移到另一种原来并不含这种基因的生物体内是基因的拼接和重组,也就是转基因,这种技术是基因工程的一种形式。目前的转基因主要分为对植物基因和对动物基因的转移两大类。本文描述的是植物转基因。转移植物基因的两种方法一种或多种外源性基因是如何转入另一种植物(作物)体内的呢?可以用一种通俗的比喻来解释。例如,人类社会是由无数个家庭组成的,每个家庭都有固定的家庭成员,除了血缘的紧密纽带关系外,还有经济和其他的关系把家庭成员固定在一起,家庭成员不会轻易分离,同时一个家庭也不会让陌生人进入。一旦有另一     

自然的食品更好

去年,绿色和平组织委托食品转基因成分检测权威——德国基因时代公司检测在中国市场销售的部分婴儿辅助食品,结果表明,在中国市场销售的亨氏营养米粉中含有转Bt(土壤苏云金杆菌)基因的水稻成分,而Bt基因是被转移到水稻或其他食品中抗虫的。这个消息让不少消费者,主要是为人父母者大吃一惊,自己的孩子所吃的婴儿食品是否安全?     

重组链球菌溶血素(SLO)的原核表达、纯化

目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。     

农杆菌介导ThNHX1基因转化烟草的研究

实验中,试图以烟草叶片为转化受体,采用根癌农杆菌介导法,将盐芥Na+/H+逆向转运蛋白基因(ThNHX1)转入烟草,获得去除卡那霉素抗性基因,仅含有转ThNHX1耐盐基因的烟草苗,并对影响遗传转化的一些关键因素进行了研究。结果表明,对6株转基因植株进行了PCR分子检测,从凝胶照片中可以看到,转基因烟草株系中有一棵烟草苗的卡那霉素抗性基因条带已不存在,但ThNHX1耐盐基因仍然存在,结果表明该苗即为仅含有转移ThNHX1耐盐基因的烟草苗。     

小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

目的克隆小鼠内皮抑素(Endostatin)编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因表达载体.方法从小鼠肝细胞提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得全长Endostatin基因,测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物,A260=0.834,A280=0.407,A260A280=2.049,总RNA浓度为1.668g/L.EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的IFNY和Endostain双基因共表达质粒pEgY-IFN(Y)-Endostatin.结论成功克隆小鼠Endostatin基因,构建了pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.     

中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆及其表达

应用RT-PCR技术从小麦病叶中扩增得到中国小麦花叶病毒(CWMV)的运动蛋白(MP)基因,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中得到大量表达,并以含表达产物的凝胶为抗原,免疫小鼠制备特异性抗血清,同时将MP基因重组到质粒pGBKT7中,电击转化酵母Y187菌株。Westernblot分析表明MP基因在酵母体内能以融合蛋白的形式正确表达,并具有免疫活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。     

奇妙的转基因植物

随着生物工程技术的发展,科学家们应用基因遗传技术,将一种生物体内的基因,移植到另一种植物体内,进行基因重组,改变植物的特性,使人类可以根据自己的意愿和需要,定向地改造植物的特性,甚至创造出新的物种。如今,世界一些国家的科学家们已研究培育出各种具有奇特功能的转基因植物。     

GUS基因和NPTⅡ基因表达的相关性及其在转基因棉花检测研究中的应用

利用农杆菌介导转化法,将含有35s启动子驱动NPTⅡ基因和Gus基因以及棉纤维特异表达启动子E6驱动目的基因FB的植物表达载体转入到常规棉花R15中．重点分析了Gus基因和NPTⅡ基因在愈伤诱导阶段．T0代及T1代转基因棉花中的表达情况综合两个基因的表达来进行转基因棉花的阳性鉴定．可以为转基因棉花后代的纯合选育提供双重保障7个转基因株系选育到T3代共获得株行51个．卡那霉素检测多数株行阳性率在90％以上．其中21个株行阳性率达100％.     

转基因食品能吃吗？

转基因食品的定义 简单地说,转基因食品是指含有转基因生物体或其成分、或者含有转基因生物体外源性基因表达产物的食品。转基因生物体是指利用基因工程技术而获得的生物体,包括转基因动物、转基因植物和转基因微生物。转基因生物体与普通生物体的主要区别之处在于它的遗传物质中含有其他生物体的基因(也叫“外源性基因”),而且这些外源性基因能够在转基因生物体中发挥作用或表达出特定产物。     

氧化硫硫杆菌质粒pTt12酶切图谱分析及其在E．coli中克隆

目的改造氧化硫硫杆菌的质粒pTt12,建立一个既能在氧化硫硫杆菌中复制又能在大肠杆菌中复制的穿梭质粒,为用基因工程改造在细菌浸矿、环境保护中使用的．T-业菌株提供实验根据。方法首先进行氧化硫硫杆菌（Thiobacillusthiooxidans-1）的pTt12质粒的限制性内切酶XhoⅠ、PvuⅡ、Bgl Ⅱ、HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、BamHⅠ和SalⅠ酶切分析,构建质粒pTt12的物理图谱。通过pBR325质粒（E．cold的SalⅠ切点和pTt12质粒的XhoI切点进行了体外重塑,构成了一个分子量为12．71Md的杂合质粒pSD125,并成功地转入了大肠杆菌HB101菌种。结论经分子量测定、酶切分析、转化试验证明,pSD125质粒确系pBR325和pTt12重组而成,且能在大肠杆菌HB101和Thiobacillusthlooxidans--1中转化克隆。     

自然的食品更好

去年，绿色和平组织委托食品转基因成分检测权威——德国基因时代公司检测在中国市场销售的部分婴儿辅助食品，结果表明，在中国市场销售的亨氏营养米粉中含有转Bt（土壤苏云金杆菌）基因的水稻成分，而Bt基因是被转移到水稻或其他食品中抗虫的。这个消息让不少消费者，主要是为人父母者大吃一惊，自己的孩子所吃的婴儿食品是否安全？