发酵液中纳豆激酶盐析法分离的研究

就纳豆激酶(Nattokinase)的粗纯化方法进行了初步的研究．从初筛的10株纳豆杆菌(Bacillus natto)中筛选出一株高产纳豆激酶的菌株，用液体发酵法将其发酵，产生的纳豆激酶采用硫酸铵盐析法进行粗提纯．实验结果表明，硫酸铵盐在70％饱和度时提纯效果较好。     

纳豆杆菌的筛选

就纳豆杆菌(Bacillus natto)的筛选进行了初步研究，采用改良的培养基——纤维蛋白平板法，从20多种不同品牌和产地的豆豉中筛选出具有纤溶活性的纳豆杆菌，再对初筛的10株纳豆杆菌进行液体发酵，用纤维蛋由平板法测其发酵液的纤溶活性，比较不同菌株产物的纤溶活性，筛选出2株高产纳豆激酶的菌株。     

传统纳豆中纳豆菌分离筛选的初步研究

近年来研究显示,纳豆具有特定的生理活性,作为功能性食品而受到人们的喜爱．从古田传统纳豆中分离到具有较高纳豆激酶活性的2个菌株,综合评价认为,编号为N142、N113的菌株具备作为优良生产菌种的特性．     

响应面法优化纳豆激酶液体发酵条件的研究

为了提高纳豆激酶的酶活力,本研究借助Minitab软件,采用Plackett-Burman试验设计方法和响应面分析方法对保存的枯草芽孢杆菌纳豆亚种（Bacillus subtlis natto。简称纳豆菌）-NT207进行了液体发酵条件的优化。首先通过Plackett-Burman方法对11个相关影响因素的效应进行评价,并筛选出有显著正效应的木糖浓度和有显著负效应的接种量、K2HP04浓度等三个因素,然后利用响应面分析方法确定了上述三个因素的最佳工艺参数。实验结果表明,在优化后的发酵条件下,纳豆激酶的产量为1504．51U／mL,比优化前提高了130．3％。     

一株抗高粱蚜芽孢杆菌的分离与鉴定

为获得抗高粱蚜的芽孢杆菌,从被高粱蚜侵害的高粱根际土壤、叶片及死亡蚜虫中分离出7株芽孢杆菌.毒力试验表明,菌株RA1402对蚜虫的校正死亡率最高,可达57.3%.对该菌株进行形态特征、生理生化及16S r DNA序列分析,初步鉴定为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis).其特征为:细胞呈杆状,链状或成对排列,芽孢位于中部或近中部,无孢囊;不能将硝酸盐还原为亚硝酸盐,可分解淀粉,能利用木糖、阿拉伯糖和甘露醇.其16S r DNA序列与特基拉芽孢杆菌的相似性达到99.93%,在Gen Bank上的登录号为KR819163.     

一株互花米草耐重金属内生菌的分离及其特性分析

利用微生物分离培养方法从互花米草根部和叶片获得内生细菌,经重金属筛选,分离到一种耐受重金属Cu2＋、Pb2＋和Cr6＋的细菌．为了进一步鉴定分离菌株,利用 PCR 方法扩增其部分16S rDNA 序列,目标DNA条带约1500 bp,测序和在线分析结果后显示,所测序列均与基因库中已上传的 Lysinibacillus sphaericus菌株16S rDNA 序列（KJ878614．1,JN613478．1）相似性均为100％．初步鉴定该菌为 Lysinibacillus属球形芽孢杆菌（Lysinibacillus sphaericus）,命名为Lysinibacillus sphaericus QZ1-1．对该菌株采用促生长特性分析结果显示,该菌株具有产生 IAA和 ACC的能力,同时该菌能在无氮培养基中生长,具备固氮功能,为日后重金属污染生物修复相关研究提供了良好的目标菌株．     

酱油酿造中耐盐性乳酸菌的筛选及分子生物学鉴定

从酱醅中分离筛选出一株耐盐性乳酸菌,在18％、20％NaCl的浓度下都能生长,并产生乳酸。对该菌进行分子生物学鉴定,测得菌株的16S rRNA序列与GenBank登记号为FSB201的嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophlus）具有99％的同源性。再将该16SrRNA序列与乳酸菌分类中17个模式菌株的16SrRNA序列共同创建进化树．发现筛选菌与GenBank登记号为AB106344、AB106343的嗜盐四联球菌亲缘关系最近,证明筛选菌应属四联球菌属中嗜盐四联球菌中的一种。     

一株珙桐内生细菌GT21的鉴定及系统发育分析

以从珙桐叶柄中分离得到的一株内生细菌GT21为出发菌株,对该菌株的形态学、生理生化特征等进行了系统研究,初步鉴定为芽孢杆菌（Bacillus）。通过PCR扩增16SrDNA并测序,用BLAST软件进行相似性比对,发现其相似性最高的菌株为BacilILlssp．SAP02-l,相似性97％。系统发育分析表明：GT2l单独一支,其余6株细菌聚为一支,GT21与Bacillussp．PKSWII和Bacillussp．LM6亲缘关系更近,而与Bacillussp．SAP02—1等亲缘关系较远。     

带有二苯胺和结构类似物抗性的芽孢杆菌突变株以玉米水解液为底物合成甲萘醌-7的研究（英文）

目的:通过从自然界中筛选和传统诱变育种相结合的方法,获得一株以玉米水解液为底物且能高效合成甲萘醌-7(MK-7)的芽孢杆菌突变菌株。创新点:首次在中国的发酵豆制品——豆豉中分离得到一株能以玉米水解液为底物合成MK-7的解淀粉芽孢杆菌Y-2(Bacillus amyloliquefaciens Y-2),并通过传统诱变育种获得一株带有二苯胺和结构类似物抗性的、以玉米水解液为底物的、高产MK-7的菌株B.amyloliquefaciens H.β.D.R.-5。方法:以来自中国不同省市地区的豆豉为分离样品,筛选高产纳豆激酶的菌株,再从中挑选出高产MK-7的菌株,并通过16S r DNA分析对其种属进行鉴定。采用常压室温等离子体(ARTP)系统,对分离到的高产MK-7菌株进行诱变处理,获得解除3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(即结构类似物抗性)和聚丙烯焦磷酸合成酶(即二苯胺抗性)反馈调节的菌株。最后,考察不同氮源、乙戊烯醇和镁离子(Mg~(2+)对突变菌株合成MK-7的影响,并分析在7 L发酵罐中合成MK-7的区别。结论:从中国豆豉中分离到了一株以玉米水解液为底物合成MK-7的菌株,经16S rD NA分析比对,鉴定为Bacillus amyloliquefaciens(图1)。通过比较MK-7产量,发现利用ARTP可以有效获得解除反馈调节作用的且高产MK-7的突变菌株H.β.D.R.-5(表1)。以大豆水解液和酵母水解液为氮源,异戊醇和MgSO_4有利于突变菌株H.β.D.R.-5合成MK-7(图2、表2和表3)。综上所述,利用ARTP处理从中国豆豉中分离到的以玉米水解液为底物的合成MK-7的菌株,可获得高产的MK-7菌株,该方法对选育工业化合成MK-7的菌株有重要参考价值。     

一株巨大芽孢杆菌的分类鉴定

基于16S rRNA序列分析和生理生化实验,对从伽师瓜病瓜上分离的一株细菌ZP-1进行了分类鉴定.结果表明,该分离菌株ZP-1与Bacillus megaterium strain PAB1C5（EU221343.1）具有99%的相似性.因此,初步推断ZP-1菌株隶属于巨大芽孢杆菌属（Bacillus magaterium）.     

纳豆菌固态产酶条件的优化

实验采用单因素试验优化纳豆菌固体发酵条件,通过蛋白凝块溶解时间法测定纳豆激酶活力,筛选出最佳培养条件。固态发酵通过扎孔、添加麦芽糖、蔗糖、葡萄糖和黄豆粉观察它们对纳豆菌产酶活力的影响。试验结果表明：固态发酵最佳条件为,浸泡10 h后,扎孔、添加4%麦芽糖、4%黄豆粉,121℃下蒸煮30分钟,接入纳豆菌2%,在37℃下培养24小时,4℃下后熟24小时。在此条件下培养,测得的纳豆激酶活力相当于尿激酶943.23 IU/g。与先前实验结果相比有了明显的提高：固态发酵由670.15 IU/g提高到943.23 IU/g。     

蚓激酶基因克隆及序列分析

目的：克隆蚓激酶基因并在GENEBANK中进行序列分析．方法：采用RT—PCR技术，以蚯蚓总．RNA为模板进行扩增，克隆蚓激酶基因、用Blast软件对基因进行同源性分析．结果：克隆了一个cDNA片段，与GENEBANK中蚓激酶基因序列最高同源性为99％．结论：本方法实用可行，同源性分析表明克隆的cDNA片段具备完整的蚓激酶编码区，为下一步进行蚓激酶的表达研究奠定了良好的基础．     

马氏珠母贝核糖体蛋白S13基因的克隆和序列分析

构建马氏珠母贝腹足SMART cDNA质粒文库,测序和在GenBank中进行同源性查找,得到了核糖体40s亚基S13基因的全长cDNA序列。马氏珠母贝S13的cDNA全长554bp,推测的开放阅读框位于27-479,编码151个氨基酸,其中亮氨酸16个,所占比例为10.6%。马氏珠母贝S13同鲶鱼以及真菌纲的球毛壳的同源氨基酸序列相似性分别为90.05%和72.85%,很保守,可以用于种以上生物的进化关系研究。聚类分析显示,马氏珠母贝与脊椎动物和昆虫的亲缘关系较近,同线虫、水稻、啤酒酵母和球毛壳等动植物、真菌等相距较远。     

杉木CAD基因生物信息学分析

杉木CAD片段为信息探针,利用序列拼接方法获得了738bp的cDNA序列.利用MEGA4.0软件对不同进化层次的代表植物相应CAD基因进行比对,构建系统进化树.利用生物信息学方法分析了杉木CAD基因的结构与功能,其中包括核苷酸序列的组成、ORF识别、CpG岛、限制性酶切位点分析、卷曲螺旋、亲水性、糖基位点及二级结构.结果表明:杉木与铁杉的CAD基因具有99.00%的同源性;该序列在88～737bp片段上有一个开放性阅读框,该序列编码的是一个碱性蛋白,亲水性较强,疏水性较弱,信号肽序列为第1位～第11位,二级结构以α-螺旋(27.50%)与不规则盘绕(41.50%)为主,延伸链(22.50%)也是该蛋白的重要结构元件,β转角区域仅为8.50%.     

番茄（Lycopersicum esculentum）几丁质酶基因LeCHI的克隆与序列分析

根据GenBank发布的几丁质酶基因序列设计PCR引物,从叶片cDNA中克隆到了番茄几丁质酶基因,并命名为LeCHI,基因在NCBI中的登陆号为FJ849060。测序结果表明,LeCHI编码区全长为762 bp,编码253个氨基酸。RT-PCR检测表明,LeCHI基因在根、茎、叶和花蕾中均有表达。序列比对结果表明,LeCHI编码的氨基酸序列与同科的马铃薯、辣椒有较高的同源性。     

Molecular cloning and nucleotides sequence analysis of G1 genome segment of hantaan virus Z10 strain

The molecular cloning of the G₁ genome segment of the Z₁₀ strain of Hantaan virus and analysis of the first gene data on the currently widely used Hantavirus vaccine strain in China are presented. The G₁ genome segment of Z₁₀ virus was amplified by the method of RT-PCR, and the products were cloned into the pGEM-T vector after identification and purification. The clone was sequenced by Sanger’s dideoxy chain termination method. The 1449 bases of the Z₁₀ G₁ genome segment, and the coding for 483 amino acids were determined. The base compositions for the G₁ segment RNA determined from cDNA sequence information, were 20.6% A, 21.6% G, 18.8% C and 30.0% U. These values are similar to those of the 76/118, Lee and SR virus. As compared to the Z₁₀ G₁ segment, the sequence homology at the nucleotide level is 87% (76/118, type I), 86% (Lee, type I), 86% (Hojo, type I), 67% (R22, type II), and 59% (K22, type III). The Z₁₀ virus G₁ protein amino acid sequence identity with other Hantaan viruses (94–95% homology) was higher than that with Seoul type viruses (77–80%). More amino acid sequence heterogeneity between the Z₁₀ and 76/118 was observed in the N terminal, especially the diverging cluster of ten amino acids at position 84 to 93 of the Z₁₀ virus G₁ protein. Conclusion: (1) The Z₁₀ strain is one of the Hantaan viruses. (2) The important region of the Z₁₀ G₁ segment was conservative. (3) Although substantial divergence of nucleotide sequences of the G₁ genome segment was found between the Z₁₀ strain and other type I Hantaviruses, relatively high amino acid sequence homology was shown among them. Thus, good immune protection could be obtained with the inactivated Meriones unguiculatus kidney cell vaccine against other strains of Hantaviruses.     

鹅MYL1基因的克隆及胚胎期表达特征分析

肌球蛋白是肌纤维的主要组成成分,在肌肉生长和收缩过程中具有重要作用.本研究以鹅（Anser anser）肌肉总RNA为模板,采用RACE的方法,克隆肌球蛋白轻链1（MYL1）基因全长cDNA序列,并进行生物信息学分析.运用实时荧光定量PCR检测MYL1基因在鹅胚胎期的表达特征.结果表明,鹅MYL1基因全长cDNA为1542 bp,编码193个氨基酸残基的肽链.预测鹅MYL1蛋白等电点5.12,分子量21.75 KD,具有典型的EFh和FRQ1结构域,且不同物种间EFh氨基酸序列高度同源.荧光定量PCR结果显示鹅胚胎期MYL1基因mRNA表达量总体呈现上升后下降的趋势,该基因在胚胎期E7就有表达,E7以后表达量逐渐上升,在E18表达量达到高峰后下降.研究结果首次提供了鹅肌肉组织主要结构基因MYL1的全序列和蛋白特征信息,并揭示该基因在鹅肌肉组织发生和发育的功能.