Myostatin基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR技术扩增5′端和3′端酶切位点为BamH I和EcoR I,然后克隆至真核表达载体pVAC1-cms,得到重组质粒pVAC-Ms。质粒纯化后采用脂质体介导转染CHO细胞,瞬时转染后收集CHO细胞,利用RT-PCR技术和细胞荧光免疫技术检测Myostatin在CHO细胞中的转录和蛋白表达。结果:酶切和测序结果表明,Myostatin真核表达载体pVAC-Ms构建成功,RT-PCR和细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中Myostatin基因明显转录,蛋白明显表达。结论:实验成功构建了在真核细胞中能有效表达人Myostatin重组蛋白的真核表达载体,为运动员Myostatin蛋白表达的检测、强力药物筛选、训练监控及废用性肌肉萎缩治疗等方面的后续研究提供实验基础。     

耐力训练和注射丙酸睾酮对雄性大鼠肝脏、心脏和腓肠肌 PPARα表达的影响

探讨持续性运动和耐力训练或注射丙酸睾酮对雄性大鼠体重增长、血脂水平以及肝脏、心脏及腓肠肌细胞内过氧化物体增殖活化受体α（PPARα）及其靶酶-酰基辅酶A氧化酶（AOX）的mRNA和PPARα蛋白量的影响。将40只SD大鼠随机分为4组：A为对照组，B为丙酸睾酮组，C为运动训练组，D为运动训练＋丙酸睾酮组。丙酸睾酮给药方式：每天皮下注射5mg／kg，每周6d，共6周。运动方式：采用跑台，速度为25m／min，每天1h，每周6d，共7周。结果发现：（1）B组和D组，实验后体重增长明显少于A组和C组（P〈0．05）；（2）D组的血清甘油三酯浓度，与A组相比，有降低的趋势（P〉0．05），而明显低于C组（P〈0．05）。总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度，各组之间无明显差异；（3）各组间的PPARα和AOX的mRNA表达均无明显差异：（4）在肝脏和心脏，C组与D组的PPARα水平明显高于A组（均为P〈0．001）。在腓肠肌，各组间PPARα水平无明显差异。结果表明：（1）注射丙酸睾酮和运动训练加注射丙酸睾酮可以明显控制体重的增长。这种作用可能与血清甘油三酯水平降低有关；（2）持续性运动在翻译及翻泽后水平上调了心脏和肝脏PPARα基因的表达，对腓肠肌PPARα基因的表达无明显作用；（3）丙酸睾酮对心脏、肝脏和腓肠肌PPARα水平无明显调节作用．可能通过其他机制发挥作用。     

肌肉代起止点的作用及意义--下肢肌肉起止点简化中心的确定

肌肉代起止点是确定肌肉长度、拉力作用线和肌力臂的关键因素，在人体运动的运动学和动力学的定量分析、在体肌肉工作形式的确定、建立生物力学模型、定量评定肌肉功能等研究中有重要作用。通过实验方法进行下肢肌肉附着点的标记。下肢作用于髋、膝、踝三个关节的共38块肌肉中．具有代起止点的肌肉为73．68％。研究结果表明：肌肉代起止点对确定肌长度、肌拉力线、肌力臂和定量评定肌肉功能有十分重要的理论意义和应用价值。     

丙酮酸钙对摔跤运动员体成分和静息代谢率的影响

探讨丙酮酸钙对摔跤运动员体成分和静息代谢率的影响。选取摔跤男运动员22人，随机分成2组即丙酮酸钙组和安慰荆组，分别给予6g／d的丙酮酸钙和安慰荆，共服用8周。观察摔跤运动员体重、体脂肪含量、体重指数、身体脂肪比率以夏腹部脂肪比率、去脂体重、肌肉量、骨骼肌含量、水分、蛋白质、无机盐含量以及静息代谢率的变化。结果表明实验束丙酮酸钙纽体重、体脂肪含量、体重指数、身体脂肪比率以厦腹部脂肪比率5项指标均较实验前呈显著下降（P〈0．05）；安慰剂组体重、去脂体重、肌肉量、体脂肪、体重指数、身体脂肪比率、腹部脂肪比率、水分、蛋白质、无机盐含量以及静息代谢率各项指标与实验前比较有所下降，但无显著意义；组间进行比较，丙酮酸钙组实验前后体重差值、体脂肪含量差值、身体脂肪比率差值以及腹部脂肪比率差值4项指标与安慰刺组相比差异存在显著（P〈0．05）；去脂体重、肌肉量、骨骼肌含量、水分、蛋白质、无机盐含量以及静息代谢率在实验前后和两组间均无明显变化。可见，丙酮酸钙能有效降低摔跤运动员体重和体脂含量而不影响去脂体重，迭到减重而不减瘦体重的目的；丙酮酸钙对于静息代谢率无明显影响。     

磁场定位磁纳米化bFGF治疗大鼠腓肠肌钝挫伤恢复效果研究

骨骼肌钝挫伤是影响运动员运动能力及运动寿命的一种常见疾病.在骨骼肌损伤修复过程中,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)骨骼肌肌原细胞有增殖作用,可以加快损伤肌肉修复.通过免疫化学偶联技术,制备重组bFGF包裹的磁性纳米粒,采用重物下落装置建立急性骨骼肌钝挫伤模型,在外加磁场的牵引下靶向聚焦至损伤部位.在损伤后第2、10、17、24和30天分别取样,测定和计算肌肉收缩力和应力松弛,并利用实时荧光定量PCR法测定大鼠腓肠肌MHC-Ⅱb mRNA的表达.结果发现,检测大鼠腓肠肌在受到钝挫伤后的第17天及第24天收缩力,磁纳米化bFGF组较bFGF组有显著性提高:在损伤后第2天,磁纳米化的bFGF即能使应力松弛恢复接近正常肌肉水平;与注射bFGF组相比,bFGF包裹磁性纳米粒对损伤肌肉收缩力的提高更明显.损伤后第2-10天,磁纳米化bFGF组与其余各组之间的MHC-Ⅱb mRNA表达差异有统计学意义.因此,磁纳米化的bFGF能明显改善大鼠急性骨骼肌钝挫伤后的收缩应力和恢复应力衰减,增强损伤肌肉 MHC-Ⅱb mRNA的表达,更好地促进损伤肌肉修复.     

病毒介导的基因治疗在运动损伤中应用展望

改造后的病毒可以有效的将遗传物质传递到一些类型的细胞，并且可以避免宿主细胞的免疫反应。因此，改造后的病毒可以成为良好的基因转移的载体。通过回顾当前使用较多的病毒载体(包括逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)以及利用这些载体进行的运动损伤基因治疗的尝试，表明：病毒载体可以有效快速的将目的基因转移到损伤部位。这提示：基因治疗方法有望治愈一些当前难于治愈的运动损伤，并且可以加速损伤的恢复或提高恢复质量。可以预言运动损伤基因治疗进入临床只是时间问题。     

柔术运动员亚高原训练前后身体机能和体成分变化特征的研究

目的：研究柔术运动员亚高原训练前后身体机能和体成分变化的特征，为柔术项目亚高原训练数据化监控和精准化实施提供科学指导。方法：以14名柔术运动员为研究对象，在亚高原训练前后对血液生化指标和体成分进行监控。结果：亚高原训练后男子运动员红细胞和血红蛋白显著升高，女子运动员网织红细胞数量显著升高；男子和女子运动员亚高原训练后肌酸激酶均显著下降，男子运动员血尿素显著下降，睾酮值显著升高；男子运动员亚高原训练后体重、体脂肪含量均有下降，去脂体重略有上升，女子运动员的体重、体脂肪含量、身体质量指数和体脂率显著下降，去脂体重无变化。运动员左右肢肌肉量均衡性均无显著性差异，亚高原训练后男子运动员各部位肌肉量百分比均有所增加，女子运动员节段脂肪均显著下降。结论：亚高原训练可促进柔术运动员携氧能力和骨髓造血功能的提高；柔术运动员在亚高原训练中机能状态良好，男子运动员合成代谢能力优于女子运动员；柔术运动员亚高原训练后体重均出现了下降，女子运动员下降更明显，且更多的是体脂肪的减少；柔术运动员亚高原训练监控中需注意身体机能和体成分的变化，关注营养状况及水分的及时补充。     

运动性损伤后肌肉再生和修复研究 ——肌肉粗提液对于运动性损伤骨骼肌的作用观察

以大鼠下坡跑运动至骨骼肌损伤为模型,利用SDS- PAGE 电泳对肌肉粗提液进行成分分析,细胞培养测定蛋白活性,免疫组化染色计数在体增殖细胞。实验结果表明,肌肉粗提液中存在促使在体卫星细胞增殖的生肌因子。     

关于针刺对蟾蜍腓肠肌标本疲劳恢复的电生理实验观察

以蟾蜍为实验对象 ,对蟾蜍腓肠肌标本进行电刺激收缩达到一定的疲劳程度后 ,分别采取休息和针刺方法恢复 ,观察整个过程中的肌肉收缩曲线并分析。实验结果显示 :针刺可以大幅度地提高肌肉在疲劳后恢复中的最大用力     

不同强度运动对AMPKα2三种不同基因状态鼠MEF2/GLUT4DNA结合活性的影响

目的:研究不同强度跑台运动对AMPKα2三种不同基因状态鼠MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达的影响,以探讨运动提高骨骼肌MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因表达可能机制.方法:野生小鼠和AMPKα2高表达转基因小鼠,AMPKα2基因敲除小鼠各30只,分别随机分为安静对照组、低强度(12m/min)跑台运动组和高强度(20/min)跑台运动组.运动时间均为1 h.运动后3 h取材.Western blot法测定AMPK(THr72)磷酸化水平.CHIP法测定MEF2/GLUT4 DNA结合活性.Real-Time PCR法测定GLUT4 mRNA含量.结果:1)野生鼠1 h不同强度跑台运动后,GLUT4基因表达量显著增加的同时.伴随着骨骼肌核内MEF2/GLUT4 DNA结合活性的显著增加;2)AMPKα2高表达转基因鼠1 h不同强度跑台运动后,其骨骼肌细胞核内MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因表达量.均比野生鼠增加更为显著;3)AMPKα2敲除鼠1 h不同强度跑台运动后,骨骼肌核内MEF2/GLUT4 DNA结合活性显著低于野生鼠,但GLUT4基因表达量与野生鼠相比没有显著差异.结论:1)运动通过提高MEF2/GLUT4 DNA结合活性而提高GLUT4表达; 2)AMPKα2参与调解了运动诱导的MEF2/GLUT4 DNA结合活性及GLUT4基因表达量的升高;3)虽然AMPKα2参与调节了运动诱导的MEF2/GLUT4 DNA结合活性的提高,但机体还可以募集其他的信号通路代偿AMPKα2对GLUT4表达的调节作用.     

肌疲劳时诱发肌电图M波和H波的变化特点

采用等长性足关节底屈运动形式 ,对比目鱼肌疲劳发生过程中诱发肌电图的 H波和 M波变化特征进行观察分析。结果表明 :运动中 Hm ax明显增加现象 ,表明在肌肉收缩时脊髓 α运动神经元受到了明显的促通作用 ;运动过程中 Mmax逐渐降低 ,说明神经—肌肉接头传递机制改变 ,也可能是导致肌肉收缩力下降的主要原因之一 ;肌疲劳后 H/Mmax比率明显降低 ,并且在运动停止 30 m in后仍未恢复正常。说明蓄积在肌肉组织中的代谢产物 ,可以较长时间对 · 类感觉神经纤维末梢的化学性感受器进行刺激 ,使 · 类感觉神经纤维传入冲动增加 ,抑制了脊髓α运动神经元的兴奋性。     

南京理工大学体育教学改革述评

大学体育教学改革这一热点问题,多年来往往是学术探讨多于实践行动,改革成效不明显.南京理工大学在“淡化竞技、注重健身、以人为本、重在实效“的指导思想下,在项目设置多样化、取消基础课、普及选项课、普及太极拳和游泳、提高理论课时、男女合斑上课、实行有偿教学等方面进行了改革并产生了一定的影响.     

不同运动能力小鼠在定制负荷运动适应中骨骼肌的基因转录响应——以细胞自噬与线粒体有关基因为例

运动能力的差异是生物个体间客观存在的。本研究以细胞自噬与线粒体有关基因为例,探讨不同年龄不同运动能力小鼠在运动适应中骨骼肌进行基因选择性表达的转录调控机制,以及骨骼肌基因响应的个性化特征。将清洁级ICR小鼠分为青年对照组(YC)、青年运动组(YR)、成年对照组(AC)、成年运动组(AR),每组10只。采用递增负荷的运动能力测试确定青年、成年小鼠可以承受的最大跑速,YR、AR组小鼠按各自最大跑速的65%~75%进行耐力训练,每天训练1 h,持续4周。取腓肠肌测试mtDNA、ATP含量以及Caspases酶活性,实时荧光定量PCR检测mRNA表达,Western blot检测蛋白表达,用染色质免疫沉淀+PCR(ChIP-PCR)检测p53、ERRα与靶基因启动子结合的DNA片段。结果表明:(1)骨骼肌mtDNA含量在成年小鼠运动后显著提高,ATP含量在成年、青年小鼠运动后均显著提高。(2) 运动显著提高成年小鼠Caspase 3,8,9的酶活性,但是对青年小鼠无显著影响。(3)成年、青年小鼠自噬基因对运动响应显著,但线粒体生物发生、COX复合物、代谢调控有关基因只在成年小鼠对运动响应显著。(4) 运动促进p53、ERRα与靶基因Tfam、SCO2、PUMA、Bax启动子的结合,但在成年、青年小鼠中靶基因转录水平不一致。结论:即使保持相对一致的运动负荷,青年小鼠骨骼肌自噬与线粒体有关基因对运动的响应也比成年小鼠低。尽管运动促进p53、ERRα与靶基因启动子的结合,但靶基因在mRNA水平并不一定表达上调。     

力竭运动对大鼠骨骼肌自由基代谢及肌细胞膜通透性的影响

以大鼠急性递增负荷运动至力竭为模型,观察运动后大鼠骨骼肌形态学改变与自由基损伤的关系。结果表明:力竭性运动后骨骼肌脂质过氧化水平显著增高,至运动后48 h 仍未恢复;骨骼肌形态改变主要表现为肌纤维膜通透性增高,线粒体肿大,Z线异常,肌原纤维降解,并以运动后24～48 h 最为严重。脂质过氧化程度与骨骼肌超微结构改变有密切关系。运动后自由基生成增多是骨骼肌结构破坏的直接因素,更是其形态进一步改变的激发因素。     

一氧化氮合成酶(NOS)cDNA 探针的制备

ＮＯ是近年来发现的一种血管和神经的信使分子。具有自由基的性质和广泛的生理和病理作用。ＮＯ是由Ｌ－精氮酸和分子氧在ＮＯＳ的催化下生成的。ＮＯＳ是限速因素。本实验通过对重组质粒ＤＮＡ的提取和ＮＯＳｃＤＮＡ的制备为运动医学研究奠定方法学基础     

基于数据挖掘的股外侧肌基因表达谱的增龄性变化研究

目的：基于数据挖掘的分析方法,研究骨骼肌增龄性的基因表达差异,探讨与老年人肌肉衰减综合症相关的差异基因,分析差异基因富集的重要分子通路,寻找相关分子标记,为后续工作提供可能的研究线索和思路。方法：利用基于高通量平台检测的老年人和年轻人的股外侧肌的基因表达数据,进行差异基因筛选,并利用相关在线数据库和分析工具进行GO和KEGG富集分析,使用STRING在线工具和Cytoscape软件分析和制作差异基因的蛋白互作网络,寻找相关分子标记。结果：筛选出2 028个股外侧肌的增龄性差异表达基因,其中2 020个为表达下调基因、8个为表达上调基因。通过基因富集分析,在维生素消化吸收、T细胞受体信号通路、神经营养蛋白信号通路、神经活性配体-受体相互作用、Jak-STAT信号通路、胰岛素抵抗等重要通路均有较多的差异基因的富集。利用蛋白互作网络分析和相关算法得到CXCR5、ADCY8、NPY等核心基因。结论：骨骼肌增龄性变化存在大量的基因表达变化,其中绝大多数为基因表达的下调;差异基因可能通过多条重要的分子通路影响老年人群骨骼肌功能的下降和衰退,调控肌肉衰减综合症的发生与发展;筛选出的核心基因可为后续深入研究肌肉衰减综合症的分子标记物提供线索。     

耐力训练和补充L-Arg对大鼠心肌、肝脏eNOS mRNA表达的影响

目的探讨耐力训练和补充L-Arg对大鼠心肌、肝脏eNOSmRNA表达的影响。采用RT-PCR法对大鼠心肌、肝脏eNOSmRNA的表达进行检测。实验结果心肌组织中,所有运动组eNOSmRNA的表达均较安静组显著下降(P<0.01);力竭组与其他各组相比较均有高度显著性差异(P<0.01),所有其他组相对表达量较力竭组相对表达量高。肝脏中,大小剂量力竭组和大剂量耐力训练组eNOSmRNA表达较安静对照组、耐力训练组、力竭组和小剂量耐力训练组均有显著下降(P<0.01)。结论耐力训练抑制心肌eNOSmRNA的表达;力竭运动提高其表达。耐力训练显著提高肝脏eNOSmRNA的表达(P<0.05);补充L-Arg抑制其表达,且抑制作用随L-Arg剂量的增加而相应增大。     

论体育运动对肌肉文化的重塑

依照多学科哲学分析的思路,从整体论的视角对肌肉文化进行了分析与探讨。首先,对肌肉所遭受的“不良对待”进行了回顾;其次,对肌肉与人类的紧密关系进行了探讨;最后,对肌肉文化与体育运动的互动进行了归纳。研究发现,肌肉虽然对人类贡献卓越,但人类往往会批判、嘲弄、忽视和指责肌肉,体育运动为肌肉文化的重塑提供了机会,体育运动让肌肉文化变得鲜活,让人类感知和记忆起肌肉之于人类的重要作用。     

血清肌酸激酶与骨骼肌损伤关系的探讨

研究目的在于对血清肌酸激酶与骨骼肌损伤之间的关系进行探讨。采用跑台一次性离心运动至力竭的动物模型,48只7周龄雌性大鼠随机分为安静对照组和运动后即刻、1、2、4和7天组,测定血清肌酸激酶活性,同时通过HE染色分析骨骼肌形态学损伤变化。结果显示血清肌酸激酶活性峰值出现在运动后即刻,运动后1天迅速下降。HE染色结果则表明离心运动后骨骼肌损伤呈现延迟性时相特点,在运动后第2天骨骼肌损伤范围达到最大。本实验表明血清肌酸激酶与骨骼肌损伤的变化趋势并不一致,血清肌酸激酶水平不能反映骨骼肌损伤。