枇杷果肉酶促褐变的研究——I.枇杷果肉中多酚氧化酶的分离、纯化和动力学特征

枇杷果肉制成丙酮粉,经硫酸铵分级沉淀、透析,DEAE-纤维素柱层析、ACA_(34)柱层析和FPLC分离等方法,分离和纯化得到多酚氧化酶的两个同工酶(酶A和酶B).酶B由一个或几个分子量为42×10~3D的亚基组成.酶的动力学研究表明:酶A、酶B的K_m(多巴胺为底物)均为2.40×10~(-3)mol/L,以邻苯二酚为底物时,酶A和酶B的K_m分别为0.163×10~(-3)mol/L和1.54×10~(-3)mol/L.酶底物特异性表明,酶B是邻位二酚酶,不能作用于单酚和间位二酚.     

枇杷果肉酶促褐变的研究Ⅲ.枇杷果实加工中酶褐变的防止

试用各种物理、化学的方法处理批把果肉,研究控制批把果浆变褐的有效方法及各种化学试剂控制酶褐变的最适剂量.试验表明:微波处理批把果实1.5～2 min(60 g果实于200 ml介质溶液中),便能有效地钝化酚酶.如将果实置于0.1％Vc溶液或400 ppm亚硫酸氢钠溶液中微波处理,防褐效果更好,果浆色泽更稳定.低浓度(小于0.1％)柠檬酸烫漂防褐效果与沸水烫漂没有差异,烫漂时间 80～100 s即可钝化酶活性.用0.2％柠檬酸烫漂 60s,护色效果已较理想.当pH值低于3时,果浆护色效果最好;pH4.4～4.6时果浆褐变最严重.各种浓度的蔗糖溶液对酶促褐变并无明显的抑制作用.若抗坏血酸浓度为300～350ppm,Vc为400ppm时,亚硫酸氢钠200～250ppm,苯基硫脲37.5 ppm,二硫苏糖醇(DTT)50ppm,护色效果较稳定.铜试剂浓度为80ppm,硫脲60～70ppm,但其抑制作用均随时间的增加而减弱.护色效果最好的处理组合为:0.01％Vc,0.1％CaCl_2(W/V),pH2.0.     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了绿色木霉WS-71纤维素酶系中的内切型β-1,4-葡聚糖苷酶组分。通过SDS-PAGE电泳测得分子量为41.8kD,该酶组分的最佳水解温度是50℃,最适pH为4.6。酶在温度40～70℃和在pH4.0￣5.0的区间稳定。Fe3+,K+,Ca2+,Mg2+,Mn2+对酶解有促进作用,Hg2+,Cu2+,Zn2+和EDTA对酶解有不同程度的抑制作用。作用于羧甲基纤维素钠的Km值为16.78mmol/L,Vmax为5.612×10-4mol/min,Kcat为6.97S-1。     

黑曲霉淀粉酶酶学性质研究

本实验对黑曲霉JLSP-15淀粉酶的酶学性质进行了研究.该淀粉酶的最适温度为60℃,其热稳定性较差;最适pH为pH 6.0,在pH4.0-8.0范围内稳定性较好.Ca2+对淀粉酶活性具有显著促进作用,而Fe3+和Cu2+对其活性具有强烈的抑制作用.     

王祖农菌酯酶基因表达蛋白EstA酶学性质分析

利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因est A,对其表达蛋白Est A的酶学性质进行分析,发现Est A的最适温度是48℃,在60℃仍具有较好的热稳定性;最适pH是8.0,在p H7.5-8.5具有较好的p H值稳定性。Zn~(2+)对酶的活性具有促进作用,而Mn~(2+)、Na~+等其他金属离子,有机溶剂PMSF对酶的活性具有强烈的抑制作用。上述性质中碱性酯酶、Zn~(2+)强烈激活作用及SDS耐受力等特点,表明该酶具有重要的应用价值,后续研究工作还需依赖于基因工程技术进行改造与提高。     

平菇纤溶酶酶学性质研究

血栓栓塞性疾病严重威胁人类生命和健康,溶栓治疗是血栓性疾病安全有效的手段。目前临床使用的溶栓药物疗效肯定但还存在许多缺陷,而且价格昂贵。因此对高效、快速、副作用小、价格低廉的新型溶栓药物的研究开发仍在继续。微生物是获得溶栓药物的重要来源,本课题对平菇纤溶酶的部分酶学性质进行了研究。研究表明此平菇纤溶酶最适作用p H值为7.4;在p H5.0~9.0范围内稳定性很好。此平菇纤溶酶的最适作用温度为45℃,在45℃以上时此平菇纤溶酶酶活下降较快,在31~45℃时酶活变化较小,由此可见此平菇纤溶酶对高温较为敏感,但在人体正常体温条件下可保持稳定。金属离子对此平菇纤溶酶有不同程度的抑制作用和激活作用。     

DNA限制酶谱构建中数据的计算机处理

双向琼脂糖凝胶电泳方法是构建DNA限制酶谱的一种简便的方法,但数据处理及推导DNA限制酶谱较复杂。本文提出了这些数据的计算机处理方法。HMAp程序HMAP构建DNA酶谱,根据以下两点思路:1.如某A酶切片段只包含A-B双酶切的一个片段,该片段不含B酶切点,此片段必然落在某B酶切片段的中间,对于B酶切片段也是如此。如图1:A_3片段在B_4片段之中,B_2片段在A_1片段之中。2.如果某A-B双酶切片段,在某A酶切片段所含的A-B双酶切片段的排列中处于两端位置,那么这A-B双酶切片段在某B酶切片段所含的A-B双酶切片段排列中也一定处     

虎杖查尔酮合酶PcCHS1基因的克隆与功能分析

从中药虎杖中通过RACE等方法克隆到一个查尔酮合酶基因的全长cDNA,命名为PcCHS1.该cDNA全长1182 bp,编码一个含393个氨基酸的蛋白质.体外酶促活性研究表明,重组PcCHS1在pH 7～8时催化形成查尔酮为其单一产物,在pH 9时除催化形成查尔酮外,还产生一定量的苯亚甲基丙酮.对PcCHS1第216位和第333位氨基酸进行了定点突变研究,结果表明这些位点对PcCHS1的体外酶促活性影响较大.     

亲水性单胞菌几丁质酶发酵工艺优化

首次报道从温州浅海海水中筛选得到的一株产几丁质酶的亲水性单胞菌属细菌(Aeromonas hydrophila sp.)。在探索了碳、氮源和环境因子对细菌产酶影响的基础上,利用均匀设计法优化得到了较佳的产酶发酵培养基配方(g/L):胶体几丁质5.0,蛋白胨12.0,尿素2.0,MgSO4 0.5,K2HPO4 0.3,NaCl5.0,初始pH 6.5。在接种量6%,培养温度28℃,180 r/min的较佳工艺下振荡发酵5 d,该菌产酶活力达到1.89 U/mL。     

黑曲霉HYA4菌株产果胶酶酶学性质研究

对黑曲霉HYA4菌株所产果胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶反应最适温度为48℃,果胶酶最适pH值为4.8,果胶酶活力稳定的pH范围为3.0-6.0;Km值为4.33mg/mL;金属离子Ca2＋、Mg2＋对果胶酶有较强的激活作用,Ba2＋对果胶酶也有一定的激活作用,Ag＋、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、K＋对果胶酶有抑制作用。由SDS-PAGE测定果胶酶的相对分子量为46000＆#177;3000Da;IEF电泳测定其等电点为4.7＆#177;0.2。     

枯草芽孢杆菌淀粉酶酶学性质的研究

对枯草芽孢杆菌（BacmussubtilisJL-7）产淀粉酶的酶学性质进行了分析。该淀粉酶的最适温度为65℃，最适pH为6．0，在pH6．0-80范围内稳定性较好。该淀粉酶的Km和Vmax分别为和0．785mg／mL，41．3μmol／min／mL。Ca2＋、K＋对淀粉酶活性具有显著促进作用，而Pb2＋、Fe3＋和Cu2＋对其活性具有强烈的抑制作用。     

药物中盐酸多巴酚丁胺的荧光分析新方法

利用盐酸多巴酚丁胺对血红蛋白模拟酶催化L-酪氨酸和H2O2体系的抑制作用,建立了酶催化荧光法测定盐酸多巴酚丁胺的新方法。研究了该猝灭反应的最佳实验条件,其猝灭程度与盐酸多巴酚丁胺的浓度呈线性关系。测定的线性范围为5.92×10-7～8.88×10-6mol/L,检出限为1.43×10-9mol/L。对浓度为5.92×10-7mol/L的盐酸多巴酚丁胺溶液进行11次平行测定,其相对标准偏差为3.2%。该方法用于药物中盐酸多巴酚丁胺含量的测定,结果满意。     

Bacillus sp.ZJU318脂肪酶发酵条件的优化及其酶学性质的研究

利用均匀设计法对Bacillus sp．ZJU318产酶的最佳培养基进行了快速优化研究。结果表明，其最适产酶培养基为：3．28％黄豆粉，0．023％蔗糖，0．075％K2HPO4，配制时的pH为12（灭菌后pH为8～9）；此外，其发酵的最佳条件为：发酵温度28℃，接种量20％，摇瓶装量20mL（250mL三角瓶）。在最适的发酵条件下，脂肪酶的发酵水平可达24．7U／mL。Bacillus sp．ZJU318脂肪酶作用的最适温度为45℃，40℃保温1h，活力几乎没有损失；但是，在50℃和60℃的条件下保温1h后，酶活降低得比较明显；酶作用的最适pH为9．0。在pH7～10，该脂肪酶较稳定，但是在酸性的环境中，酶的稳定性较低。     

水稻苗床调酸方法

水稻幼苗适宜在土壤pH4.5～5.5的偏酸性条件下生长,pH过低或过高都不利于幼苗生长。调酸方法常用的有: 硫磺粉调酸。pH在6.5左右时,每平方米苗床用硫磺粉50克,pH在7以上用100克硫     

柑桔种质资源过氧化物酶同工酶分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了柑桔属，金柑属106份种质资源的阳极(酸性)过氧化物酶同工 酶。认为该酶为单聚体，由一个基因位点控制，有A、B、C、D、F五个等位基因被发现。分析结果，认为中国、日本及印度的宽皮柑桔并无酶谱基因型差别。本文还对部分种类品种的过氧化物酶谱基因型及其分类学关系作了初步探讨。     

浅谈漆酶的研究进展

漆酶(Laccase,EC11101312)一种结合多个铜离子的蛋白质,属于铜蓝氧化酶,广泛存在于真菌与植物中;其酶活受金属离子、pH、温度等的影响。目前,已有60多种漆酶基因被克隆。漆酶的应用极其广泛,可用于造纸、食品、燃料等行业。     

羽毛的生物降解及其酶学性质的研究

羽毛角蛋白是一种环境污染有机废弃物,通过微生物对角蛋的进行降解为合理利用,可以使它成为丰富的饲料蛋白来源。适当的降解方法对于羽毛资源的转化有着重要作用。采用正交设计优化地衣芽孢杆菌细胞转化羽毛的条件,得出角蛋白酶的合成和羽毛的分解指标,三因子最合适配比为:液料比20:1,反应pH 7.5,BC细胞加量0.5克,40℃下120 r/min处理72 h,其中细胞加量对羽毛分解有关键影响。粗酶液最适温度在37℃,在35℃~40℃有很好的热稳定性。不同pH下酶活变化明显,在pH 5-8范围内比较稳定。     

极谱法探究雷酚内酯的电化学行为

研究了多种体系下雷酚内酯的单扫描示波极谱行为。实验表明,在不同体系和不同pH范围,雷酚内酯产生两个还原波,其峰电流和峰电位受酸度影响的情况不同,但在B–R缓冲体系中,峰电位基本上保持不变,峰电流明显受溶液酸度的影响;在pH=6.11的B-R缓冲溶液中,雷酚内酯的两峰电位分别为-O.11V和-1.1V(vs.SCE),两峰的峰电流与雷酚内酯的浓度在一定范围内呈线性关系,线性范围为3.0×10_6～3.0×10-5mol?L-1。     

31味中药和藏药水提物α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性研究

以阿卡波糖为阳性对照,对31种中药和藏药材水提取物进行了α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶(酵母菌)、蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性筛选。研究发现,地骨皮和桑白皮水提物与市售药物伏格列波糖和米格列醇的酶抑制类型相同,对麦芽糖酶和蔗糖酶均具有较强抑制作用。南五味子和大花红景天与阿卡波糖的酶抑制类型相同,对淀粉酶和蔗糖酶具有较强的抑制作用。首次发现了白檀水提物对α-淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶均具有很强的抑制活性,绿萝花、当归、细叶小檗、南五味子、大花红景天、细果角茴香、诃子、白檀和唐古特白刺9种药材提取物具有很强的蔗糖酶抑制活性。本研究为上述几种中药和藏药材资源的进一步深入研究和开发利用提供了数据支持和科学依据。     

药物中盐酸多巴酚丁胺的荧光分析新方法

利用盐酸多巴酚丁胺对血红蛋白模拟酶催化L-酪氨酸和H2O2体系的抑制作用,建立了酶催化荧光法测定盐酸多巴酚丁胺的新方法。研究了该猝灭反应的最佳实验条件,其猝灭程度与盐酸多巴酚丁胺的浓度呈线性关系。测定的线性范围为5.92×10-7~8.88×10-6mol/L,检出限为1.43×10-9mol/L。对浓度为5.92×10-7mol/L的盐酸多巴酚丁胺溶液进行11次平行测定,其相对标准偏差为3.2%。该方法用于药物中盐酸多巴酚丁胺含量的测定,结果满意。