丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响

目的：探讨丝裂霉素对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-trans ferase,GSTπ）表达的影响。方法：利用人胃癌细胞株BGC-823进行培养，加入丝裂霉素后5h和10h后采集细胞，进行免疫组化染色。结果：5h组，胞质中GSTπ含量下降，胞核中GSTn增多；10h组其胞质与胞核中仍有少量GSTπ表达。结论：丝裂霉素对BGC-823癌细胞有明显的杀伤作用。其途径之一可能与抑制GSTπ基因表达有关。     

5-Fu对人胃癌细胞金属硫蛋白表达的影响

目的:探讨5-Fu对人胃癌细胞的杀伤作用及对金属硫蛋白(MT)表达的影响.方法:利用人胃癌BGC-823细胞株在培养过程中加入5-Fu继续培养5h或10h收获,然后用HE和免疫组化染色,光镜下进行观察.结果:实验组BGC-823细胞变形,MT表达强度和位置有明显变化.结论:5-Fu作用5h对胃癌细胞有杀伤作用,对癌细胞形态和MT的表达均有明显影响.     

阿霉素对人胃癌细胞GSTπ表达的影响

目的:探讨阿霉素对人胃癌细胞的杀伤作用及致GSTπ表达的变化。方法:利用人胃癌BGC-823细胞株,CO2培养箱进行培养过程中,加入阿霉素注射液继续培养5h或10h。然后用HE和免疫组化染色。光镜下观察并进行图象分析。结果:实验组BGC-823细胞变形,GSTπ表达位置和灰度有明显变化。结论:阿霉素作用5h可对胃癌细胞有杀伤作用,使胃癌细胞形态和GST基因表达有明显变化。     

5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞超微结构和GSTπ表达的影响

目的:探讨5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞的结构和GSTπ表达的影响。方法:在人胃癌BGC-823细胞株培养液中加入5-氟尿嘧啶,继续培养5h或10h,然后用HE、免疫组化染色和铀-铅染色。光镜、电镜下观察。结果:10h组胃癌细胞外型畸变、细胞器破坏严重;GSTπ灰度发生变化。结论:5-氟尿嘧啶作用10h对人胃癌细胞超微结构及GSTπ基因表达有明显影响。     

手性2,2'-联吡啶衍生物的不对称合成

联吡啶及其衍生物是一类重要的血管内皮生长因子抑制剂,根据化合物的构效关系,以含有不同取代基的吡啶作为起始原料,以不同的光学纯的α-氨基酸作为手性源,设计并合成了新型的含有手性中心的联吡啶衍生物,其结构通过1H NMR,13C NMR和HRMS进行了表征.体外抗肿瘤活性测定,选择五种不同的肿瘤细胞株HCT-8:人结肠癌细胞;Bel7402:人肝癌细胞;BGC-823:人胃癌细胞;A549:人肺腺癌细胞;A2780:人卵巢癌细胞对目标化合物的抗肿瘤活性进行了生物评价.     

黄芪成分F_3新制剂对胃癌细胞株的抑制作用

[目的]观察黄芪成分F3新制剂对胃癌(BGC-823)细胞株体外细胞生长、抑制作用.[方法]利用基因组DNA电泳,流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果]基因组DNA电泳出现“梯形”条带;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡率.[结论]黄芪成分F3新制剂对胃癌细胞有明显的抑制作用.     

DNA修复酶和拓朴异构酶Ⅱα在乳腺癌中的表达及临床意义

目的：探讨乳腺癌中拓朴异构酶Ⅱα（TopoⅡα）和DNA修复酶（MGMT）表达的相关性及临床意义。方法：采用SABC免疫组织化学方法，检测76例乳腺癌标本中TopoⅡα和MGMT的表达率。结果：乳腺癌中MGMT阳性率为59．21％（45／76），TopoⅡα阳性率为68．42％（52／76）。TopoⅡα和MGMT有低度相关性（γ=0．234），61岁以上老年组TopoⅡα和MGMT阳性率均低于60岁以下组，有淋巴结转移组阳性率高于无转移组。结论：TopoⅡα和MGMT过表达率与乳癌患者年龄及有否淋巴结癌转移有关。检测乳腺癌中TopoⅡα和MGMT对提示预后和临床选择化学治疗方案有指导意义。     

ATP—MgCl_2对腹膜炎大鼠脾淋巴细胞免疫调节作用的形态学研究

选择健康SD大鼠48只,经腹腔注射大肠杆菌以造成腹膜炎模型,并随机分成二组,采用ATP-MgCl_2和生理盐水分别进行腹腔注射:各组动物于造成模型后4小时和8小时分批处死12只,剖腹取脾脏标本,经固定、包埋后制成超薄切片,并采用JEM-2000EX型透射电子显微镜观察脾脏超微结构变化,结果显示,AM治疗组在4h时电镜下所见脾淋巴细胞数目、核内常染色质及胞质中粗面内质网和线粒体均明显增多;而NS对照组相对很少,且细胞核内异染色质增多,部分核模已融解,在8h时,二组间仍有明显差异;但AM治疗组与4h时相比,胞质中粗面内质网腔扩张、线粒体固缩,细胞开始衰变:而NS对照组与治疗组相比,胞质中粗面内质网和线粒体仍较少,且细胞核趋于融解,上述观察结果表明,治疗组脾淋巴细胞代谢旺盛,细胞功能活跃;而对照组则相反,但随时间推移,治疗组脾淋巴细胞功能亦逐渐减退;这可能与药物(ATP-MgCl_2)作用相对减弱以及细胞开始衰变有关,这一结果亦间接证实,ATP-MgCl_2能恢复腹膜炎大鼠脾淋巴细胞的功能,具有明显的免疫增强作用。     

HDAC1、8在肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的表达及意义

目的：观察TGF-β1作用下,肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN在EMT过程中HDAC1、8的表达情况及TSA对TGF-β1诱导细胞EMT的影响。方法：将TGF-β1加入到体外培养的细胞中,于不同时间收取细胞,采用WB及Real-time RT-PCR检测HDAC1、8及E-cad、α-SMA的表达情况。然后将TGF-β1加入经过TSA预处理的细胞中,于不同时间收取细胞,重新检测上述基因。结果：加入TGF-β1后,E-cad蛋白表达下调;α-SMA蛋白表达上调;HDAC1蛋白表达上调;HDAC8蛋白表达下调。E-cad mRNA表达下调;α-SMA及HDAC8的mRNA均于12 h表达上调,6 h、24 h表达下调;HDAC1 mRNA表达于6 h下调,24 h上调。加入TSA后,E-cad蛋白表达上调;α-SMA、HDAC1及HDAC8蛋白的表达均下调。E-cad mRNA表达上调;α-SMA mRNA表达于6 h、12 h上调,24 h下调;HDAC1 mRNA表达下调;HDAC8 mRNA表达上调。结论：TGF-β1体外诱导的RLE-6TN细胞EMT,可以通过应用TSA抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型,从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮EMT。     

预热处理对大鼠急性运动股四头肌保护作用的实验研究

目的:通过观察预热处理前后大鼠急性运动股四头肌热休克蛋白70(HSP70)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化,探讨预热处理诱导HSP70表达对运动机体的保护作用.方法:三月龄雄性SD大鼠随机分为室温安静组、室温运动后即刻组、室温运动后3 h组、预热处理安静组、预热处理运动后即刻组、预热处理运动后3 h组.预热处理组进行热暴露处理后,室温恢复24 h后,运动组大鼠进行一次急性运动,运动后即刻和3h进行取样,对股四头肌HSP70的含量、SOD活性、MDA含量进行测试.结果:(1)预热处理安静组HSP70含量明显高于室温安静组(P<0.05)(2)室温组运动后即刻股四头肌HSP70有上升的趋势,但与安静组比较没有显著性的差异,预热处理组运动后即刻HSP70的含量与预热处理安静组比较有显著性的差异,运动后3 h,两组HSP70的表达都明显增加.(3)运动后即刻股四头肌SOD的活性明显升高,3 h后其活性降低,但与安静组比较仍具有显著性差异.在变化过程中预热处理组SOD活性高于室温组.(4)运动后即刻股四头肌MDA的含量明显升高,3 h后减少,在运动后前3 h,预热处理组MDA的清除比室温组迅速,有显著性差异.以上结果表明预热处理诱导HSP70的大量表达可提高运动时SOD活性,降低MDA的含量.提示HSP70可能会提高机体的抗氧化能力,减少自由基对机体的损害,对运动机体具有一定的保护作用.     

SD大鼠脑梗死急性期血清HIF-1α、VEGF因子的变化特点及相关性研究

目的：研究低氧诱导因子（HIF-1α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达水平在SD大鼠脑梗死急性期不同时间点的动态变化;探讨两个因子之间的变化是否具有相关性;为脑梗死的治疗和相关的药物研制提供新的靶点。方法：将雌雄各半的36只SD大鼠（月龄2-3月,体重250-320g）随机分为三个组,手术组（简称甲组,16只）、假手术组（简称乙组,16只）、空白组（4只）。甲、乙两组又分为ABCD四个小组。每个小组有4只大鼠,雌雄鼠各两只。参照改良线栓法闭塞右侧大脑中动脉,制作大鼠局灶性脑梗死模型。取血后用ELISA法测定血液中HIF-1α与VEGF的浓度;通过方差分析统计HIF-1α与VEGF两个因子在手术组、假手术组、空白组不同时间点的变化特点;通过线性相关分析的统计方法分析HIF-1α与VEGF因子之间表达的相关性。结果：（1）HIF-1α因子的表达在1/2h出现上调,2h、3h、6h持续少量增高,12h达到高峰。随后表达有所下降,但在168h（7d）时表达又有所增高。（2）VEGF因子的表达也在1/2h出现上调,2h、3h、6h、12h持续少量增高,并在24h达到高峰。随后表达有所下降,在168h（7d）时表达又有所增加。（3）HIF-1α因子和VEGF因子的表达在12小时内表现明显的相关性。结论：（1）HIF-1α自1/2h开始变化,在脑梗死超早期就开始出现表达增加,12h达高峰,对脑梗死后一系列缺氧反应起到重要作用;（2）VEGF自1/2h开始变化,24h达高峰,也参与了脑梗死后的应急表达;（3）HIF-1α因子和VEGF因子在12h内的表达具有明显的相关性。     

蛋白激酶Cα-EGFP及其突变体真核表达载体的构建和在C2C12细胞中的表达

目的研究PKCα结构与转位的关系.方法用PCR的方法构建了4个PKCα突变体,在DNA连接酶的作用下与pEGFP-N1结合后转移至质粒中,构建PKCα突变体-EGFP真核表达载体.观察它们在C2C12细胞中的表达及转位情况.结果pPKCα-EGFP-N1转染C2C12肌细胞24h后,细胞内表达的PKCα-GFP融合蛋白主要定位于细胞浆,细胞核中未见分布.pPKCα-βI-EGFP-N1、pPKCβI-α-EGFP转染C2C12细胞24h的表达产物集中在胞浆.pPKCα(-)-EGFP-N1、pPKCα(m)-EGFP-N1转染C2C12细胞24h的定位与野生型明显不同.结论PKCα的调节区(C1V1C2)尤其是RACK结合区(C2)、PKCα的催化区(C3V4C4)尤其是ATP结合位点与PKCα的转位密切相关.     

NSCLC患者血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其临床意义

目的:探讨肺癌血管内皮生长因子(VEGF)的表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系及其临床意义。方法:用免疫组化SP法检测87例非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)组织、17例良性肺疾病和6例正常肺组织中VEGF的表达。结果:在NSCLC组织中血管内皮细胞VEGF的高表达率62.69%(54/87),良性肺疾病和正常肺组织中的高表达率4.35%(1/23),两者比较有显著性差异,P<0.01;低分化NSCLC细胞胞质VEGF的高表达率90.63%(29/32)明显高于高、中分化NSCLC细胞胞质的高表达率45.45%(25/55),P<0.01;在有淋巴结转移的NSCLC细胞胞质中VEGF高表达率90.20%(46/51),明显高于无淋巴结转移组的高表达率22.22%(8/36),P<0.01;NSCLC胞质中VEGF蛋白高表达率与临床分期密切相关,Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期,分别是87.50%(49/56),16.13%(5/31),P<0.01。结论:VEGF高表达与NSCLC的生物学行为密切相关,它的高表达提示NSCLC患者预后不良。     

两种不同给药计算方法对体外药效实验结果的影响

目的:研究按浓度与按单个细胞药物含量两种不同计算方法对甲基阿魏酸(methyl ferulic acid,MFA)抑制TGF-β1刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)α-SMA表达的影响,评价两种给药计算方法在细胞实验中的应用效果。方法:体外培养HSC-LX2,MTT法测定MFA抑制HSC-LX2增殖的作用,由此确定MFA 1.25、2.5、5mg/L(其相应的单个细胞MFA含量为1.13×10-7、2.25×10-7和4.5×10-7 mg)3个浓度进行后续的实验;以两种不同的细胞数量接种到培养皿,分别以上述浓度和单个细胞MFA含量干预72h,采用RT-PCR检测细胞α-SMA mRNA的表达和Western blotting检测细胞内α-SMA蛋白含量。结果:在两种不同细胞数量情况下,以单个细胞MFA含量计算方法干预后,相同MFA含量组α-SMA mRNA和蛋白的表达趋势一致,且与MTT结果相吻合;而以浓度计算方法干预后,相同MFA浓度组α-SMA mRNA和蛋白表达差异较大。结论:以单个细胞药物含量计算方法在MFA对HSC-LX2细胞体外药效实验中的应用效果更稳定,更科学,实验可重复性较好。     

安石榴苷对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤的保护作用（英文）

目的:评估安石榴苷对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次证明安石榴苷对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤具有保护作用,且此作用与核转录因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的抑制相关。方法:用不同浓度的脂多糖(1、10、30、50和100μg/ml)刺激奶牛子宫内膜上皮细胞3、6、9、12和18 h,筛选出建立炎症损伤的最佳作用浓度和时间。安石榴苷预处理细胞2 h后用脂多糖刺激12 h,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)的方法检测核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化的p65、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达水平。结论:MTT结果显示,30μg/ml脂多糖刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h能够造成细胞活力下降和形态改变(图2和3)。RT-PCR结果显示,安石榴苷预处理后炎症因子显著降低(图4)。Western blotting结果显示,安石榴苷预处理能显著抑制IκBα降解以及p65、p38、JNK和ERK的磷酸化表达水平(图5和6)。综上所述,安石榴苷对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤具有保护作用,在治疗奶牛子宫内膜炎中具有重要价值。     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠胰腺β细胞凋亡的影响

目的:探讨α-硫辛酸对1型糖尿病大鼠胰腺β细胞凋亡的作用机制。方法:20只雄性Wistar大鼠制作1型糖尿病模型后随机分为α-硫辛酸组和糖尿病组,α-硫辛酸组腹腔注射α-硫辛酸50 mg/kg,连续4周,糖尿病组大鼠腹腔注射同体积的生理盐水。每周检测各组大鼠空腹血糖和胰岛素水平,Western blot检测胰腺组织中Caspase-3和Bcl-2的含量。另取10只雄性Wistar大鼠作为正常对照。结果:4周后α-硫辛酸组大鼠空腹血糖显著低于糖尿病组(P&lt;0.05),但胰岛素值逐渐升高超过糖尿病组(P&lt;0.05)。胰腺β细胞中Caspase-3的表达显著低于糖尿病组(P&lt;0.05),Bcl-2的表达则显著高于糖尿病组(P&lt;0.05)。结论:α-硫辛酸可能通过线粒体途径减少β细胞凋亡而发挥保护作用。     

α-SMA在臀肌挛缩症中的免疫组化研究

目的:观察α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth,muscleactin,α-SMA)在臀肌挛缩症的表达、分布。方法押利用免疫组化染色辅以计算机图像定量分析技术,对26例臀肌挛缩症及12例正常臀肌标本α-平滑肌肌动蛋白的表达进行观察和检测。结果:α-SMA在对照组中未见明显表达。12例臀肌挛缩症组织中α-SMA染色阳性,14例臀肌挛缩组织中染色阴性,病变组与对照组两者差异有非常显著性意义(P<0.001);臀肌挛缩症组织7岁以上组α-SMA表达明显减弱,与7岁以下组(包括7岁)比较差异有显著性意义(t=2.364熏P=0.028)。结论:①肌纤维母细胞是臀肌挛缩症发病关键病理因素。②臀肌挛缩症中肌纤维母细胞的表达强度与病程有关,7岁以上组病程较长表达明显减弱,这给临床治疗提供新思路。     

姜黄素对糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及机制研究

探讨姜黄素对糖尿病心肌病（DCM）大鼠心肌组织损伤的保护作用及其可能的机制。方法：50只SPF级健康雄性SD大鼠随机选取10只作为空白对照组,其余复制糖尿病心肌病模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组。连续给药4周后,给大鼠做超声心电图、HE和Masson染色检测心肌纤维化程度;生化检测血脂血糖;Westem blot检测心肌组织中PPARα、PPARβ、PPARγ和CYP2J2蛋白表达。结果：与空白对照组相比,模型组大鼠血糖血脂指标明显升高,心脏收缩功能降低,HE染色显示心肌细胞肥大,Masson染色显示心肌胶原纤维明显增多,PPARα、PPARβ、PPARγ和CYP2J2蛋白表达减少（P<0.05）。与模型组比较,姜黄素可明显改善DCM大鼠血糖血脂水平,使心脏收缩功能显著提高,心肌细胞形态恢复,胶原纤维沉积减少,PPARα、PPARβ、PPARγ和CYP2J2蛋白明显升高（P<0.05）。结论：姜黄素可以改善糖尿病心肌病大鼠心肌损伤,其分子机制可能与其激活心肌CYP2J2/PPARs信号通路有关。     

谷胱甘肽转移酶和拓扑异构酶在乳腺癌表达的临床意义

目的：探讨谷胱甘肽转移酶（GSTπ）和拓扑异构酶（TopoⅡα）在乳腺癌组织中表达状况及意义。方法：取乳腺癌标本72例，乳腺腺瘤30例，利用SP免疫组织化学方法，检测GSTπ和TopoⅡα阳性率。结果：GSTπ在乳腺腺瘤中阳性率为26．67％，在乳癌中阳性率为68．05％。TopoⅡα在腺瘤和腺癌中阳性率分别为0．00％和50．00％。Ⅲ级乳癌中GSTπ表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ级；TopoⅡα则在乳癌Ⅰ级中表达高于Ⅲ级。结论：GSTπ和TopoⅡα在乳癌中阳性率明显高于腺瘤。检测GSTπ和TopoⅡα对乳腺癌化疗药物的选择有指导作用。