西文蜜蜂LOC724521基因座的cDNA序列克隆及TSS的分析

5’LongSAGE标签得自于全长mRNA分子的5’末端的前19 nt.该研究利用定位在西方蜜蜂基因组中的一个预测基因座LOC724521的2条5’LongSAGE标签序列作为5’引物,通过RT-PCR克隆了该预测基因座的2条长335 bp和337 bp的cDNA序列（GenBank登录号：GU358205,GU358204）.此cDNA编码一条长88个氨基酸残基的多肽.用所克隆的cDNA序列对基因座LOC724521进行功能注释发现,该基因含有3个外显子和2个＂GT-AG＂型内含子.5’LongSAGE标签序列的基因组定位结果显示：基因座LOC724521在雄蜂的头部中表达丰度很高,RNA PolⅡ可从5个转录起始位点（TSS）上以不同效率起始转录,该基因的59%和31%的转录是从2个优势TSS上起始.有趣的是,有一条5’LongSAGE标签序列被定位在内含子区,暗示该基因存在外显子的可变性选择现象.该研究结果不仅在转录水平上证实了软件预测的基因座LOC724521确实存在,同时揭示了该基因存在可变性转录起始位点和可变性外显子选择等转录调控机制.     

EST技术在植物基因克隆和基因表达谱研究中的应用

表达序列标签是cDNA的部分序列，是通过对cDNA库进行大规模上次性测序而获得．对于植物研究而言，该技术已成为一种高效、经济的克隆重要植物基因的工具．而且，通过分析来自特定组织的EST库可以定量地估计该组织中各类基因的表达丰度．这种组织基因表达谱可用于阐明植物的代谢调控网络或植物对生物、非生物胁迫反应的信号转导途径．章以几个典型的实例阐释如何利用EST技术来克隆重要的植物经济性状基因及以此技术进行表达谱研究．     

蜜蜂转基因技术

简述了建立蜜蜂转基因技术体系的方法和筛选标记，以显微注射法将改造过的piggyBac、mariner等转座子转基因载体导入受精卵是蜜蜂转基因工作的最佳候选方案，精子介导法和病毒载体法也值得尝试，增强型荧光蛋白（EGFP）基因是转基因蜜蜂的最佳筛选标记，并对蜜蜂转基因技术体系在基因功能研究和生物反应器的开发等方面的应用前景进行了探讨。     

复合蛋白酶水解罗非鱼条件的优化研究

以水解度为优化的指标,利用单因素试验研究酶解温度、pH值、反应时间等因素对鱼蛋白水解的影响,利用中心组合试验方法优化酶的添加量和蛋白质浓度．结果表明：复合蛋白酶水解罗非鱼的最佳条件为：加酶量17660U／g蛋白、蛋白质质量分数2．50％、水解温度55℃、pH值7．5、水解时间10h,在此条件下,水解体系的氨基酸态氮含量达到了1．41mg／mL,水解度为35．25％,挥发性盐基氮含量为0．048mg／mL,得到用复合蛋白酶水解罗非鱼的最佳工艺条件．     

用5’LongSAGE标签分析蜜蜂Yps基因转录起始位点的多样性

使用5'LongSAGE标签序列确定了一个新的西方蜜蜂Ypsilon Schachtel(Yps)基因的转录起始位点,并进而预测了该基因的启动子序列.5'LongSAGE标签的蜜蜂基因组定位结果表明:在成年雄蜂的头部中,蜜蜂Yps基因存在23个转录起始位点,其中优势转录起始位点有4个,其起始频率分别为27.9%、23.1%、13.5%和11.5%.Yps基因TSS的碱基组成分析发现,此23个TSS第一个碱基为A、G、T、C的概率分别为52%、39%、4%、4%.这些结果暗示RNA聚合酶和调控因子在Yps基因启动子的一个较宽范围内的互作控制着不同转录本的起始效率.     

发育中水稻种子淀粉合成分子机制的研究

对GenBank中9215条来源于水稻(Oryza sativa L.ssp．Indica)胚乳cDNA库的3’EST进行了分析，获得20个淀粉合成相关基因的表达丰度信息，研究发现淀粉合成的5个关键酶的编码基因，ADPG焦磷酸化酶基因、ADP—葡萄糖淀粉合成酶、淀粉分支酶、淀粉去分支酶、蜡质基因的表达丰度极高，表明该时期水稻胚乳内淀粉合成反应非常强烈，研究发现在淀粉合成途径中存在功能相关的基因协同表达的现象，章结合所获得的基因表达信息对淀粉合成的分子机理进行了探讨。     

米曲霉培养液水解鳕鱼粉制备蛋白胨的研究

实验结果表明,米曲霉培养液对鳕鱼粉具有明显的蛋白酶活性,能将鳕鱼粉中的蛋白质水解;适于米曲霉产蛋白酶的培养条件为初始pH 5.0、培养温度32℃、250 mL三角瓶中装90mL培养基;适于米曲霉产蛋白酶的培养基组成为麸皮4.11 g/L、豆饼粉3.78 g/L、鱼粉1.11g/L;用米曲霉培养液水解鳕鱼粉制备蛋白胨的得率为15.74%.该实验结果为进一步用米曲霉培养液为蛋白酶源,改进鱼蛋白水解工艺提供了试验参考.yh     

龙竹和凤尾竹PpMADS1序列的扩增与序列分析

以龙竹和凤尾竹基因组DNA为模板,通过试验不同的退火温度、循环数、Mg2＋浓度及DMSO浓度,获得了16条龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列片段,并得出稳定扩增PpMADS1相似序列的条件.对获得的龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列进行序列分析,发现龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列可根据序列长度差异分成组I和组II,并对其推出的氨基酸序列进行分析,找到了保守的paleoAP1基序和KIII区保守的氨基酸残基,并据此认为龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列是AP1/SQUA亚家族成员.     

水稻幼苗SAGE文库的构建和测序

基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)是功能基因组学研究中的一项功能强大的工具.对水稻幼苗SAGE文库的构建进行了探索试验,其主要操作步骤为:以磁珠法提取PolyA mRNA用于合成双链cDNA,再经过一系列的酶切、加接头序列、连接、PCR扩增,获得到26-bp的水稻双标签体,再将26-bp Ditag连接成标签链接体,并将其克隆进pZero-1载体中用于测序.DNA测序结果证明获得了水稻的SAGE标签.试验的各个中间步骤的结果均经过PCR验证.yh     

快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶

用含有TaqDNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli DH5α菌株，IPTG诱导表态TaqDNA聚合酶。利用该酶的热，经两轮－70℃深度冷冻和75℃水浴，细菌裂解释放内容物，以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合以达到快速纯化Taq DNA聚合酶的目的。PCR扩增反应表明所制备的Taq DNA聚合酶的活力、敏感性、特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。