| 模板制备方法对单细胞PCR检测DMD基因的影响 |
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| 引用本文： | 陶冶,金帆,黄荷凤,徐晨明,叶英辉.模板制备方法对单细胞PCR检测DMD基因的影响[J].科技通报,2001,17(2):33-36. |
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| 作者姓名： | 陶冶 金帆 黄荷凤 徐晨明 叶英辉 |
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| 作者单位： | 浙江大学医学院附属妇产科医院, |
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| 基金项目： | 浙江省医学卫生基金资助项目!(W10 0 0 3) |
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| 摘 要： | 旨在探讨模板制备方法对单细胞 PCR准确性的影响 ,采用 KOH/ DTT和液氮冻融煮沸两种不同方法裂解单个淋巴细胞 ,行 DMD基因外显子 17、19、4 4、4 5、4 8五重巢式 PCR.用 KOH/DTT法裂解的细胞扩增成功率为 98% ( 147/ 150 ) ,失败率为 2 % ( 3/ 150 ) ;用液氮冻融煮沸法裂解的细胞扩增成功率为 78% ( 117/ 150 ) ,失败率为 2 2 % ( 33/ 150 ) ,差异有显著性 (χ2 =2 8.4 ,P <0 .0 1) .结果表明单细胞 PCR模板制备与 PCR扩增失败有密切关系 ,选用合适的细胞裂解方法可提高单细胞 PCR的准确性
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| 关 键 词： | 单细胞 PCR 模板制备 五重巢式PCR技术 DMD 基因检测 遗传病诊断 医学遗传学 PGD 植入前遗传学诊断 |
| 文章编号： | 1001-7119(2001)02-0033-04 |
| 修稿时间： | 2000年12月4日 |
The Effect of the Template of PCR Preparation on DMD Gene Detection by Single Cell PCR |
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| TAO Ye,JIN Fan,HUANG Hefeng et al..The Effect of the Template of PCR Preparation on DMD Gene Detection by Single Cell PCR[J].Bulletin of Science and Technology,2001,17(2):33-36. |
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| Authors: | TAO Ye JIN Fan HUANG Hefeng |
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| Abstract: | To study the effects of the template preparation on the accuracyof single cell PCR, two different methods, KOH/DTT and frozen-thawed-boiled are used to lyse single lymphocyte and 5-plex nest PCR of DMD gene exon 17、19、44、45、48 is followed. The successful and failure rate of amplification of the cell lysed by KOH/DTT is 98%(147/150) and 2%(3/150) respectively. And those of the cell lysed by frozen-thawed-boiled is 78%(117/150) and 22%(33/150) (χ2=28.4, P<0.01). The amplification failure rate of the single cell 5-plex nest PCR is significantly associated with the difference of the methods of cell lysed. Using appropriate method to lyse cell can improve the accuracy of single cell PCR. |
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| Keywords: | single cell template of PCR preparation 5 plex nest PCR DMD |
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