改良TRIZOL法提取真菌RNA的方法

本研究首次采用改良TRIZOL法,成功地从稻曲病菌中提取了总RNA,其总RNA具有完整性好、纯度高和产量大的特点,能进一步满足RT—PCR等分子生物学实验的需要。此外,该方法也适用于其它富含多糖、蛋白、酚类等物质的总RNA的提取。     

小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

目的克隆小鼠内皮抑素(Endostatin)编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因表达载体.方法从小鼠肝细胞提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得全长Endostatin基因,测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物,A260=0.834,A280=0.407,A260A280=2.049,总RNA浓度为1.668g/L.EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的IFNY和Endostain双基因共表达质粒pEgY-IFN(Y)-Endostatin.结论成功克隆小鼠Endostatin基因,构建了pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.     

小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

目的克隆小鼠内皮抑素（Endostatin）编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFNγ-EndostatinA基因表达载体。方法从小鼠肝细胞提取总RNA，经逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增获得全长Endostatin基因，测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFNγ-EndostatinYT．基因共表达质粒。结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物，A260=0．834，A280=0．407，A260：A280=2．049，总RNA浓度为1．668g／L。EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致，并构建了含Egr-1启动子的IFNγ和DEndostain双基因共表达质粒pEgY-IFNγ-Endostatin。结论成功克隆小鼠Endostatin基因，构建了pEgr-IFNγ-Endostatin双基因共表达质粒。     

大鼠Gast和Mln mRNA荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立一种逆转录-实时定量PCR(R T-Q PCR)检测大鼠胃组织中胃泌素(Gast)和胃动素(Mln)m R N A表达的方法。方法:提取大鼠胃组织总RNA,逆转录合成c DNA,利用SYBRGreen荧光染料法实时检测Gast和Mlnm RNA的表达水平。通过溶解曲线分析检测特异性,以管家基因β-actin为内参对Gast和Mln进行定量分析。结果:建立的大鼠Gast和Mlnm RNART-QPCR检测方法具有良好的特异性和敏感性。结论:成功建立RT-QPCR检测Gast和Mlnm RNA基因表达的方法。     

大花黄牡丹总DNA的提取初探

本文经过反复实验摸索,在没有液氮的情况下,改良了常用的总DNA的提取方法～SDS法和CTAB法,用这两种方法成功的提取了大花黄牡丹（Paeonia ludlowii）的总DNA。并通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计进行紫外检测发现,提取到的DNA纯度及含量均适合分子生物学操作的要求,为进一步遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究奠定基础：     

人内脂素的原核表达和分离纯化

目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。     

大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)包涵体蛋白mRNA的提取及电镜观察

包涵体蛋白 mRNA 是大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)感染晚期合成的主要信使 RNA.我们从染病晚期幼虫脂肪体中,用饱和苯酚法提取总核酸,用 LiCl 去除其中 DNA,经 Oligo-(dT)纤维素层析柱,mRNA 呈现二个洗脱峰,将洗脱峰组份用尿素-高甲酰胺法制样电镜观察.电镜下 mRNA 分子柔软、粗糙,呈弯曲的线状,分子长度约0.3μ(30个统计)     

理论茎区集合构建算法分析

对于基于茎区组合的RNA二级结构预测算法的第一步是构建理论茎区集合,该集合的合理性和有效性将对预测算法的最终结果有直接影响本文给出一个完整的理论茎区集合构建过程,为实现基于茎区组合的RNA二级结构预测算法提供理论基础。     

改进的CTAB法提取高寒植物长鞭红景天基因组DNA的研究

根据自己抽提高寒植物基因组DNA的实际经验,改进了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法,在试验过程中发现,通过在研磨材料时加入液氮、剪去端部的吸头转移含有DNA的溶液,并且将加入RNaseA消化RNA的步骤,结果证明改良的CTAB法得到的长鞭红景天基因组DNA浓度和纯度较高,且无无蛋白质和RNA等杂质影响。     

芦苇床中芦苇内生菌群总DNA提取方法研究

本文对污泥干化芦苇床中芦苇内生菌总DNA的提取方法进行了研究,实验经过摸索后采用Soil DNA Kit提取基因组DNA对不同来源的芦苇内生菌群总DNA进行提取。利用PCR技术对不同来源的总DNA的提取方法进行了对比分析。以期应用分子生物学技术研究和评价芦苇共生菌群改变,从而为改善芦苇床工艺设计提供生物学证据。     

西洋参中总皂苷的提取工艺研究

目的:优选西洋参中总皂苷的最佳醇提工艺。方法:采用紫外分光光度法,以人参总皂苷含量为指标,采用L9(34)正交试验设计,考察提取溶媒体积,提取次数,提取溶媒用量对人参总皂苷提取率的影响,优选最佳提取工艺条件。结果:提取工艺条件:采用8倍量的70%乙醇,回流提取2次,每次3h,西洋参总皂苷含量为5.23%。结论:优选工艺可较好的提取西洋参中的人参总皂苷。     

苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究

本文对观音草总皂苷提取工艺进行研究。观音草总皂苷最佳提取工艺为80摄氏度分别提取2次,第一次分别加入12倍量纯化水提取80分钟,第二次分别加入10倍量纯化水提取60分钟。     

瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果

RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性（pathogen-derived resistance, PDR）被认为是通过RNA沉默起作用的,转化的核酸片段在基因组中的位置,长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率,用全长马铃薯X病毒（PVX）CP基因构建非翻译的正义,反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,     

川芎提取工艺的优化

目的:对川芎中有效成分阿魏酸和总酚酸的提取工艺进行优化。方法:使用均匀设计法对川芎中有效成分阿魏酸和总酚酸的提取工艺进行分析,以提取率为参考指标,观察在提取时使用的乙醇浓度、提取时间、提取次数对参考指标的影响。结果:以总酚酸和阿魏酸的提取含量为最终价指标,经优化筛选确定:中药川芎50g,使用12倍量的90%浓度乙醇,提取两次,每次提取179分钟,回收乙醇,在60℃下进行真空干燥为最佳工艺提取方案,平均得膏率是33.13%,阿魏酸的含量是1.376mg/g,总酚酸的含量是14.41mg/g。结论:使用均匀设计法对川芎提取工艺进行优化选择,有利于提高生产质量和中药川芎的利用率。     

小儿肺热咳喘颗粒工艺研究

目的：优选小儿肺热咳喘颗粒提取工艺。方法：以影响提取工艺加水量为考察因素,以提取物中总生物碱含量为指标进行工艺筛选。结果：通过考察不同加水量提取物总生物碱的含量,选择最佳提取工艺为加8倍量的水提取二次。     

迷迭香中抗氧化剂总酚含量的测定

通过对春、秋、冬三季迷迭香干料和春季鲜料提取得到的抗氧化剂进行总酚含量测定,得出干料提取得到的抗氧化剂总酚含量比鲜料高,且秋季迷迭香干叶制得的抗氧化剂的总酚含量最高,达到297mg/g,因此抗氧化剂的提取最好选择秋季干叶为原料。     

一种基于EXCEL工作表的网络管理数据的提取方法

根据EXCEL工作表函数与数组公式的特点,提出了一种数据提取的方法。基于网络流量统计数据为例进行分析,构建了具有一定的通用性的数据提取公式,可提高网络管理的效率。     

专利信息

重楼总皂苷的制备方法专利号:03135589)本发明公开了一种重楼总皂苷的制备方法。主要包括提取、分离和纯化。适用于以重楼属所有种植物为原料提取重楼总皂苷。其优越性在于将酒精提取、膜过滤、吸附树脂、脱色树脂和活性炭组合脱色、丙酮脱脂等单元操作进行有效组合。产品颜色近白色,抗吸湿性强,有效成分含量高且稳定,提取率高,生产成本低。三七总皂苷脂质体及其制剂(专利号:03135782)本发明公开了一种三七总皂苷脂质体及其制剂。按重量百分比,该脂质体含有如下组份;三七总皂苷5%—30%,膜材50%—80%,附加剂1%—10%以及余量的其它辅料。该脂…     

三种常用柑橘黄龙病DNA检测提取试剂盒的筛选比较

本文主要采用了三种不同试剂盒同时提取黄龙病DNA(提取方法参照试剂盒说明书),然后通过对其OD值测定与PCK扩增,评价了各个试剂盒的优缺点,筛选出了Axygen试剂盒是可用来提取黄龙病总DNA,并进行实验检测,效果较好.     

植物非编码RNA与抗虫防御反应的研究及应用

非编码RNA参与了多种重要的生命进程,是当今研究的热点领域。在植物中,非编码RNA除了参与维持基因组的稳定,还在生长、发育、逆境胁迫反应等过程中发挥重要作用。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由RNA触发的相应基因的表达抑制,是非编码RNA调控基因表达的一种重要的作用方式,自发现以来已逐渐发展为遗传分析、疾病治疗以及植物保护等方面的有效的新技术。文章重点介绍了微RNA(micro RNA,mi RNA)在植物抗虫防御中的生物学功能,si RNA对植物防御记忆的影响以及RNAi对植物防御信号途径的调节作用,同时阐述了RNAi在提高农作物抗虫性上的应用并展望了未来植物非编码RNA的研究方向。