磁场处理在诺卡氏菌诱变选育中作用的研究

诺卡氏菌HD9611经紫外线诱变处理后在磁场条件下进行培养，其诱变致死率和营养缺陷的诱发率均比诱变后在自然条件下培养的要高，并且经UV＋磁场复合诱变所筛选出的菌株酶活也单纯紫外线处理的时照菌株平均酶活相对提高了17．2％。     

浅谈影响穿刺培养实验成功的两个关键因素

1前言穿刺培养是微生物教学中重要实验内容,也是常规菌种鉴定中重要手段。通过穿刺培养,不仅可以判断菌株的好氧性与厌氧性,运动情况以及菌株是否发酵产酸等。还可以从运动情况推测菌株是否长有鞭毛。但仅参考书上已有实验操作内容,实验很难成功。关键在于能否掌握其核心技术。笔者在进行一组混合菌种分离、鉴定时,发现营养培养基的选择和加入琼脂量的多少是影响穿刺培养实验成功与否的两个关键因素。2两个关键因素2.1关键因素一———营养培养基的选择培养基选择不当即使菌株长有鞭毛也看不到根须状扩散生长。笔者先后采用三种培养基做穿刺…     

采用常压室温等离子体诱变技术获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮的突变菌株Mycobacterium neoaurum ZADF-4（英文）

目的:获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)的Mycobacterium neoaurum突变株。创新点:获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)酶活缺陷型的高产AD的诱变菌株Mycobacterium neoaurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选KSDD酶活缺陷型M.neoaurum突变株。方法:(1)诱变方法:采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术来处理出发菌株M.neoaurum ZAD。ARTP诱变条件如下:功率40 W,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。(2)筛选方法:将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚(DCPIP)溶液(0.1 mmol/L磷酸缓冲液p H 7.0),30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液(2%甲醇和50 mmol/L Tris p H 7.0缓冲液),室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物AD存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色(图3)。(3)对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。结论:获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%(图4),活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显(图5)。薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)实验证明突变株ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高(图6和图7),提高到了(6.28±0.11)g/L,AD/ADD提高到8:1,AD的摩尔产率达到60.3%(表1)。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5’端缺失9个核苷酸(atgttctac),导致3个氨基酸(MFY)的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变(g.15a>6t),另一个是有义突变(g.413c>404t),并引起了相应位置上的氨基酸变化(p.138S>135L)。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M.neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。     

与微生物营养缺陷型有关的试题例析

有关微生物营养缺陷型的试题在高中生物学习中经常遇到,并且都有一定的难度．因此本文对此作归纳例析．     

蛹虫草菌株的交配型鉴定及其部分栽培特征研究

目的:通过对23株不同蛹虫草菌株的交配型鉴定以及出菇性状、产量和栽培周期等指标的比较,选择出早期识别交配型的简洁方法及优良的菌株。方法:利用PCR和溴百里酚蓝脱色法鉴定不同蛹虫草菌株的交配型;通过序列比对及对溴百里酚蓝的脱色率比较,同时统计分析各菌株产量、子实体形态和栽培周期等农艺性状差异。结果:双交配型菌株对溴百里酚蓝的脱色率远高于单交配型菌株;单交配型CM-15、CM-16、CM-19的子实体产量最高,分别为17.52 g/瓶、17.80 g/瓶和18.96 g/瓶,生物学效率为58.4~63.2%,栽培周期66~69 d,但与双交配型CM-3没有显著差异。结论:利用溴百里酚蓝可以对蛹虫草交配型进行早期鉴定,但脱色率与产量等农艺性状间不存在显著相关性;CM-19为优良菌株。     

耐镉根瘤菌的筛选

采用液体培养基摇床培养根瘤菌,研究了Cd处理对根瘤菌生长的影响.依时间进程测定培养液在600nm吸光度并绘制根瘤菌生长曲线.筛选到一株耐Cd根瘤菌菌株X.5和10 μmol/L Cd处理48h对苜蓿根瘤菌标准菌株USDA生长抑制率分别为38%和58%,而此浓度Cd处理对X菌株生长具有一定的促进作用.BTB反应鉴定结果表明,菌株USDA和X均为快生型根瘤菌.     

不同培养基对纳塔形成影响的研究探讨

以椰子水发酵产生纳塔的生产菌株作为试验菌株，在果汁、果皮汁、黄豆浸汁等及其与椰子水的混合液等培养基中进行替代椰子水生产纳塔试验，并对收获的纳塔做物理性状的比较和成分分析．结果表明：在不同的替代椰子水培养液中均有纳塔形成，其中以西瓜皮汁、椰子水 黄豆浸汁(4：1)和椰子水 菠萝皮汁(4：1)为佳，所生产的纳塔外观和品质均符合纳塔食品的加工要求．     

球衣细菌的分离和保藏

利用改进后的菌种分离方法．从印染厂废水中分离得到球衣细菌菌株．初步研究了该菌株的菌落及形态特征、生理生化特性、生长条件，生长曲线，以及菌种的保藏方法等．     

培养基组成对光合细菌B.9菌株产生类胡萝卜素的影响

文章讨论了不同的碳源、氮源、无机盐组成的培养基对沼泽红假单胞菌B.9菌株色素组成、相对含量、存在状态的影响。结果表明,碳源、氮源、无机盐均能引起光合细菌B.9菌株类胡萝卜素的合成、积累及其组成的变化,其中,碳源和氮源的影响更大。     

采用常压室温等离子体诱变技术获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮的突变菌株 Mycobacterium neoaurum ZADF-4

目的：获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮（ AD ）的Mycobacterium neoaurum突变株。
　　创新点：获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶（KSDD）酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
　　方法：（1）诱变方法：采用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下：功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。（2）筛选方法：将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚（DCPIP）溶液（0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0）,30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液（2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液）,室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（ADD）和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色（图3）。（3）对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
　　结论：获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%（图4）,活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显（图5）。薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高（图6和图7）,提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8：1,AD的摩尔产率达到60.3%（表1）。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸（atgttctac）,导致3个氨基酸（MFY）的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变（g.15a>6t）,另一个是有义突变（g.413c>404t）,并引起了相应位置上的氨基酸变化（p.138S>135L）。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。     

455菌种诱变后的发酵力实验研究

在发酵期，培养基两个不同时期向菌株７中加入各种不同浓度，不同组合类型的高能量物质ＡＴＰ，ＣｏＡ和酵母粉，以克服菌株７缺乏能量的缺点，实验得了，在发酵期时加入各种不同浓度的ＡＴＰ最为合适。     

农杆菌介导的白菜遗传转化影响因子研究进展

白菜遗传转化技术中最常用的方法是农杆菌介导法。由于白菜的再生能力较低，因此农杆菌介导白菜遗传转化的研究报道较少。本文就近十年来的研究进展作一简要回顾，并对影响其转化及再生频率的关键性因子，如植物基因型、外植体及生理状态、农杆菌菌株、感染方法和培养基附加成分等方面进行了较详细的讨论。     

南韩灵芝母种培养基的筛选研究

通过对南韩灵芝菌株在不同碳源、氮源及不同配方的母种培养基的生长实验,筛选出适合其生长的碳源、氮源和最佳培养基配方．试验结果表明：南韩灵芝菌丝体在麸皮、酵母膏,蛋白胨3种氮源中,以麸皮为最适氮源;在葡萄糖、蔗糖和玉米粉3种碳源中,以玉米粉为最适碳源．在5种不同的培养基试验中,加富PDA培养基是最适合南韩灵芝生长的培养基配方．     

“发酵工程的培养基”教学设计

在“发酵工程的培养基”一节教学中,以如何配制微生物的培养基为主线,采用层层递进的思维引导学生思考培养基的成分需要满足微生物生长代谢的哪些需求、分析如何为目的菌株设计配制选择培养基、亲手操作配制培养基,实现学生科学思维及科学探究能力的提升。     

被孢霉菌株产壳聚糖酶的诱变育种初探

本研究以被孢霉菌株（Mortierella alpina）为出发菌株,分别采用紫外线诱变、亚硝酸钠诱变及紫外线与亚硝酸钠的复合诱变方式对孢子悬浮液进行诱变处理.结果表明,在紫外线处理6min后,酶活性高达8.657U/mL,比出发菌株提高2.354倍;在亚硝酸钠处理8min后,酶活性为6.081U/mL,较之出发菌株提高1.658倍;在复合诱变的紫外照射6min和亚硝酸钠处理8min的情况下,酶活性高达9.141U/mL,比出发菌株提高了2.493倍.     

紫外线诱变庆大霉素产生菌育种与发酵条件的研究

以紫外线为诱变剂，用庆大霉素产生菌JY1－12为出发菌株，选育出性能优良的菌株JY3－5。经正交试验确定其最佳发酵培养基，研究了最佳酵温度和初始pH值，使其摇瓶效价提高35．1％；30m^3灌放大试验，比出发菌株效价提高19．2％。     

大豆根瘤菌AWCS 13－4菌株培养条件的筛选与优化

研究了大豆根瘤菌AWCS13-4菌株在YMA、TY、PA、BSE 4种培养基中的生长情况,并通过单因素和正交试验确定最佳培养条件。结果表明,AWCS13-4菌株在YMA培养基中生长较好,蔗糖为最佳碳源,酵母粉为最佳氮源,最佳p H为7.0,最佳接种量为3%,最佳培养温度为30℃。在单因素的基础上,采用正交试验,对4个因素进行优化,其最佳培养组合为:每升培养基中添加蔗糖10 g,酵母粉3 g,Mg SO4·7H_2O 0.2 g,K2HPO40.5 g,NaCl 0.1 g,CaCl_2·5H_2O 0.05 g,Rh微量元素液4 m L;p H为7.0,接种量为3%,培养温度为30℃。     

大豆疫霉拮抗细菌B048液体发酵培养基的筛选与发酵条件的优化

通过单因子实验,筛选得到了适合大豆疫霉拮抗细菌B048液体发酵的最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为豆粕,最佳无机盐离子为氯化钠。通过正交实验确定了该培养基的最佳配比为：玉米粉5g／L、豆粕15g／L、氯化钠10g／L。在确定适合该菌株的培养基组分基础上,对其培养条件进行优化,结果表明：初始pH值为6．0,培养时间为48h,转速为180r／min时为该菌株的最佳培养条件。     

近年来国内学习障碍儿童认知特征研究综述

学习障碍已成为当今学龄儿童常见的问题,并引起国内外各界研究者的高度重视。本文从视觉-空间认知缺陷、言语理解表达不足、注意集中困难、汉字再认困难、抽象信息的感知、加工处理能力受损几个方面对近年言语型学习障碍儿童认知特征的研究进行了分析,并从视觉-运动和空间认知障碍、神经心理缺陷、精神运动能力及性格、行为缺陷、社会认知缺陷几个方面对非言语型学习障碍儿童认知特征的研究进行述评。     

几种栽培灵芝菌丝体生长营养条件之初探

通过三种栽培灵芝品种菌株在不同碳源、氮源及不同种配方的母种培养基上的生长实验，筛选出适合其生长的最适碳源、氮源和最佳培养基配方，试验结果表明：三种栽培灵芝菌株菌丝体在玉米粉、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、乳糖和走牙糖这几种碳源中，以玉米粉为最适碳源；在花生饼粉、酵母膏、蛋白胨等几种氮源中，以花生饼粉为最适氮源，并表明在PDA培养基中添加蛋白胨和大量元素对菌丝体生长均有促进作用，且其影响效果可以累加。