金属离子对黄粉虫NAGase活力的影响

以黄粉虫为材料,以N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)为研究对象.研究各种金属离子对NAGase酶活力的影响.结果表明,正一价碱金属Li 、Na 、K 等对酶活力基本上没有效应;Ca2 、Mg2 、Ba2 等碱土金属离子对酶活力也没有显著影响;而正三价金属离子Al3 和Fe3 、过渡金属离子Zn2 和Cd2 、重金属离子Cu2 、Ag 、Hg2 和Pb2 等对该酶活力均有不同程度的抑制作用.其中,Hg2 的抑制作用最为显著,2.5 mmol/L Hg2 可使酶活力完全丧失.进一步研究了Cu2 的抑制作用动力学,结果显示:Cu2 对酶的抑制作用为非竞争性可逆抑制,抑制常数KI=KIS=5.5 mmol/L.     

巯基乙醇对黄粉虫NAGase活力的影响

以黄粉虫幼虫为材料,采用0.05 mol/L pH 7.5 Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级分离提取N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52),获得比活力1025 u/mg的酶制剂.研究NAGase催化pNP-NAG水解反应的动力学参数,测得米氏常数Km=0.384 mmol/L,探讨巯基乙醇对该酶活力的影响.结果表明,巯基乙醇对该酶活力具有显著的抑制作用,其抑制作用显示可逆过程,研究巯基乙醇对该酶的抑制类型,显示其抑制效应为混合型,KI和KIS分别为1.9%和9.6%.     

几种单糖对黄粉虫NAGase活力的影响

以素有“动物营养宝库”之称的高蛋白昆虫-黄粉虫为材料．以N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase，EC3．2．1．52）为研究对象．采用0．05mol／L pH7．5Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级分离沉淀从黄粉虫体内获得NAGase粗酶制剂．研究葡萄糖（glu）、半乳糖（gad、果糖（fru）对NAGase催化水解对硝基苯-N-乙酰氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）活力的影响，结果表明，glu、gal、fru对该酶均有抑制作用，抑制强弱次序为：gal〉glu〉fru．gal对该酶的抑制作用表现为反竞争型，其抑制常数K1s为226mmol／L；而glu对酶的作用表现为竞争型抑制，抑制常数K1为338mmol／L．     

二甲亚砜对黄粉虫NAGase活力的影响

研究二甲亚砜(DMSO)对黄粉虫(Tenebrio molitorLinnaeus)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力(NAGase)的影响.结果表明:该酶的剩余活力随着二甲亚砜浓度增大而呈指数下降,导致酶活力丧失50%的二甲亚砜的浓度(抑制半衰期,IC50)为5%,说明二甲亚砜对黄粉虫NA-Gase有明显的失活作用.该酶的失活过程属于可逆过程,抑制机理表现为混合型抑制类型,进一步测定游离酶(E)和底物络合物(ES)与二甲亚砜的结合常数(KI和KIS),分别为6.12%和26.2%,KI相似文献   

有机溶剂对黄粉虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以黄粉虫为材料,以N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)为研究对象.考察了几种有机溶剂对NAGase活力的影响.结果表明:甲醇、乙醇、正丙醇、乙二醇和丙三醇对NAGase的作用均表现为低浓度时对酶有激活作用,随着浓度的升高,激活作用减弱并速转为抑制作用;N,N—二甲基甲酰胺(DMF)和二氧六环对酶的抑制作用呈现明显的浓度效应,随浓度增大酶活力迅速下降.进一步研究二氧六环的抑制作用动力学,结果表明:二氧六环对酶的抑制作用是可逆过程,抑制类型都表现为混合型抑制.测得二氧六环对游离酶的抑制常数K I为8.1%,对酶-底物络合物的抑制常数K IS为30.0%.     

马铃薯多酚氧化酶反应动力学及抑制机理的研究

用丙酮从马铃薯中提取多酚氧化酶,用分光光度法测出酶催化反应的最佳条件是pH值为6.0,温度为23℃,反应活化能等于19.62 KJ/mol,米氏常数KM=4.46×10-3 mol/dm3,研究了6种抑制剂对酶活性的抑制作用,其中抗坏血酸的抑制机理是属于可逆竞争性抑制,求得与抑制有关的常数KI=1.13×10-2mol/dm3,对果蔬的保鲜有重要的指导意义.     

金属离子和抑制剂对野桑蚕多酚氧化酶活性的影响

为进一步研究野桑蚕多酚氧化酶的作用机理奠定基础,利用分光光度计检测了金属离子和几种抑制剂对野桑蚕（Bombyx mandarina）多酚氧化酶活性的影响,结果表明：槲皮素和硫脲对该酶的抑制浓度（IC50）分别为0.086 mmol/L和0.092μmol/L,Cu2＋对该酶有强烈的抑制作用,而Zn2＋、Ca2＋和Mg2＋有激活作用.     

黄粉虫几丁质酶的纯化及性质

以黄粉虫为材料,采用盐析、亲和柱层析、Sephadex G-100分子筛及DE-52离子交换柱层析等制得纯化倍数约33倍,回收率为38%,比活力为294.7U/mg的几丁质酶制剂.在此基础上,以胶体几丁质为底物,考察黄粉虫几丁质酶的性质.结果表明：该酶催化水解几丁质的Km值为71.4mg/L;酶的最适pH值是6.0;最适温度为45℃左右;酶在pH 5.0～7.0,45℃以下酶活力稳定性较好.Na＋和K＋对酶活无影响;Ca2＋、Cu2＋对酶活起先扬后抑作用;Mn2＋、Mg2＋、Fe3＋、Al3＋对该酶活力均具有不同程度的抑制作用.     

影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素

研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。     

尿微量蛋白联合尿酶在特发性水肿中的应用价值

目的 :探讨特发性水肿病人早期肾损害诊断指标。方法 :对 5 0例正常对照和 4 0例特发性水肿患者采用ELISA方法检测尿微量白蛋白 (mALB)、视黄醇结合蛋白 (RBP) ,尿转铁蛋白 (TRF)和α1-微球蛋白 (α1-M ) ,终点法测尿N -乙酰 - β -D -氨基葡萄糖苷酶 (NAG) ,比色法测尿肌酐。结果 :正常对照组尿mALB为 (3.6 1± 2 .4 6 )mg/L ,RBP/Cr为 (7.4 6± 5 .0 2 ) μg/mmol,TRF/Cr为 (0 .0 5± 0 .0 3)mg/mmol ,α1-M /Cr为 (0 .78± 0 .5 1)mg/mmol,NAG/Cr为 (0 .5 2± 0 .4 6 )U/mmol,特发性水肿患者尿mALB为 (12 .4 2± 11.2 5 )mg/L ,RBP/Cr为 (18.75± 17.16 ) μg/mmol,TRF/Cr为 (0 .0 8± 0 .0 1)mg/mmol ,NAG/Cr为 (1.89± 1.6 4)U/mmol,α1-M /Cr为 (0 .86± 0 .14 )mg/mmol;其检测的阳性率分别为 :mALB :30 % ,NAG :4 0 % ,RBP :2 7.5 % ,TRF :2 .5 % ,α1-M :5 % ,两项指标联合检测其阳性率分别为 :NAG+mALB :4 0 % ,NAG +RBP :4 0 % ,mALB +RBP :32 .5 %。结论 :尿NAG酶的检测是诊断特发性水肿早期肾损害的最灵敏、可靠的实验室指标。     

辛基酚暴露对凡纳滨对虾NAGase的活力影响

以凡纳滨对虾为研究对象,让其暴露在含0,5,15,45,135μg/L辛基酚（OP）的养殖水体中,暴露24,48,72,96,120 h后取样,分析测定凡纳滨对虾壳膜与内脏 NAGase 比活力的变化．结果表明,水体 OP 对对虾壳膜 NAGase比活力基本起激活作用．暴露72 h内,壳膜 NAGase比活力无显著性变化;暴露96 h时,5,15,135μg/L OP均对虾壳膜 NAGase 比活力起极显著激活作用（P＜0．01）,45μg/L OP 对虾壳膜 NAGase比活力起显著激活（P＜0．05）;暴露120 h时,15,135μg/L OP 对虾壳膜 NAGase 比活力仍表现为显著性激活作用（P＜0．05）,但5,45μg/L OP 对壳膜 NAGase 的比活力影响无显著性．而水体 OP 对虾内脏 NAGase比活力基本起抑制作用．在15μg/L OP体系下暴露24 h,内脏NAGase极显著下降（P＜0．01）,其他 OP浓度下无显著性变化;不同浓度下暴露48 h,对虾内脏 NAGase比活力均出现极显著下降（P＜0．01）;5μg/L OP体系下暴露72 h,对虾内脏 NAGase比活力无显著性下降,其他 OP 浓度下的对虾内脏 NAGase 比活力均出现极显著下降（P＜0．01）;15,135μg/L OP 体系下暴露96 h,内脏 NAGase 比活力也分别出现极显著（P＜0．01）及显著性（P＜0．05）下降．可见,OP暴露对对虾生长发育会产生影响．     

3种甘草酸苷对慢性乙肝患者血糖及肝功能病毒影响的临床研究

[目的]了解甘草酸苷对慢性乙肝患者血糖的影响.[方法]把95例确诊为慢性乙型肝炎的患者随机分为A、B、C三组,分别给予复方甘草酸苷80 m l、复方甘草酸单铵120 m l、甘草酸二铵40 m l静脉点滴,用药前、用药2周及4周观察三组患者的空腹血糖、肝功能、HBVM、HBV-DNA定量.[结果]治疗前三组患者空腹血糖的均数分别为5.28±1.75、5.32±1.66及5.65±1.82 mmol/L,在用药2周时,三组患者空腹血糖的均数即已有所下降,至用药4周其空腹血糖的均数分别为4.5 1±1.6 5、4.6 8±1.3 7及4.9 8±1.87 mmol/L,与治疗前相比三组患者空腹血糖的均数都有不同程度下降,但治疗前后的差异无显著性(P>0.05),各组之间下降的差异亦无显著性(P>0.05).[结论]甘草酸苷对慢性乙肝患者的血糖没有升高作用,反而在一定剂量下有降低的作用.     

Preparation of Glutaraldehyde Cross-Linked Chitosan Beads Under Microwave Irradiation and Properties of Urease Immobilized onto the Beads

The glutaraldehyde cross-linked chitosan beads were prepared under microwave irradiation and urease was immobilized onto the beads. The activity and the yield of enzyme activity of the immobilized urease were 10.83 U/g carrier and 47.7%, respectively. The optimum conditions of immobilization were 1% of glutaraldehyde volume fraction, 10 mg/g of urease/beads weight ratio, 24 h of the processing time and pH 6.5 of the reaction medium for immobilization. The properties of the immobilized urease were investigated and compared with those of the free enzyme. The optimum pH values were 6.5 and 7.0 for the immobilized and free urease, respectively. The optimum temperature was 60℃ for the free urease, while it shifted to 65 ℃ for the immobilized enzyme. The Michaelis constant Kr, was 9.1 mmol/L for the immobilized and 12.5 mmol/L for the free urease. The immobilized urease retained 40% of its initial enzyme activity even after 10 repeated uses. The immobilized urease stored at 4 ℃ retained 46% of its initial activity even after 35 d.     

Enhanced production of thermostable laccases from a native strain of Pycnoporus sanguineus using central composite design

研究目的：优化获得血红密孔菌（P.sanguineus）的最佳培养基组成,提高耐热漆酶的产量。创新要点：获得了目前文献报道的最高水平的漆酶活力。研究方法：通过单因素试验研究了不同培养基（番茄汁、麦麸、麦芽提取物和葡萄糖细菌蛋白胨培养基）和不同组合诱导剂（大豆油、阿魏酸、没食子酸、二甲基苯胺、酸性蓝62和活性蓝19分别与硫酸铜组合诱导剂）对P.sanguineus产耐热漆酶的影响。在此基础上采用中心组合试验设计,进一步研究了番茄汁培养基结合硫酸铜和大豆油组合诱导剂对P.sanguineus产耐热漆酶的影响。利用SAS10.0和响应面分析方法对试验结果进行了统计分析和建立回归模型。重要结论：通过中心组合设计优化得出P.sanguineus产耐热漆酶的最优培养基条件：以36.8%番茄汁为培养基,以3 mmol/L硫酸铜和1%大豆油作为组合诱导剂。该条件下在10 L搅拌槽生物反应器中漆酶活力达到了143 000 IU/L（2,2＇-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）为底物,pH值为3.0）。     

Purification and some properties of a β-glucanase from a strain,Trichoderma reesei GXC

β-glucanase was purified from a solid-state culture ofTrichoderma reesei on wheat bran in three steps which comprised ammonium sulfate precipitation, Sephadex G-100 chromatography, and DEAE-Sephadex A-50 chromatography. The molecular mass was determined to be 35.21 kilodaltons by sodium dodecyl sulfate-12.5% polyacrylamide gel electrophoresis. The β-glucanase at low pHs was more stable than that at high pHs, and optimum pH was 5.0. The optimum temperature was 60°C, and β-glucanase was relatively stable at below 40°C for 60 min. TheK _m of the enzyme on β-glucan was 10.86 mg/ml, and theV _max on β-glucan was 14286 μmol of glucose equivalents per mg of the pure enzyme per min. The β-glucanase activity was significantly inhibited by Fe³⁺ ions, and was reduced in the presence of Cu²⁺ ions, Mn²⁺ ions and Mg²⁺ ions at 5 mmol/L and 10 mmol/L, respectively. The β-glucanase activity was stimulated by Co²⁺ ions, Ca²⁺ ions, Zn²⁺ ions, and Fe²⁺ ions at 1 mmol/L and 5 mmol/L, respectively. Project supported by Foundation for University Key Teacher of the State Ministry of Education, the National Natural Science Foundation of China (No. 30000118) and Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (No. 399409).     

溴氰菊酯对大鼠小脑皮质组织中HO和ATPase活性的影响

目的:研究溴氰菊酯(DM)对SD大鼠小脑皮质组织中血红素加氧酶(HO)的活性和ATPase活性的影响。方法:(1)成年雄性SD大鼠共40只,其中20只用于血红素加氧酶(HO)的活性的测定,另20只用于ATPase活力测定,均随机分为对照组和DM染毒实验组,实验组中大鼠72小时内给溴氰菊酯(1/20LD50)三次,对照组为相同剂量的玉米油,分别检测小脑皮质组织HO活性和ATPase活性。(2)成年雄性SD大鼠30只,同样方法取出小脑皮质,制成切片,随机分为对照组(相同剂量的玉米油)和5个不同浓度的DM染毒试验组(2×10-7mmol/L、2×10-6mmol/L、2×10-5mmol/L、2×10-4mmol/L、2×10-3mmol/L),测定ATPase活性。结果:整体染毒小脑皮层组织HO活性为对照组的240.39%(p﹤0.05),Na+,K+-ATPase活性为对照组的131.47%(p﹤0.05),Ca2+-ATPase活性增加没有统计学意义,Mg2+-ATPase有显著的抑制作用(P<0.05),为对照组的79.91%。体外试验发现只有达到10-3mmol/L数量级的DM对温育小脑皮质切片组织中的Mg2+-ATPase活性才有显著的抑制作用(P<0.05);且无论何种浓度均未发现上述体内染毒时对Na+,K+-ATPase活性的增加作用。结论:DM可增加大鼠小脑皮质的HO活性,体内体外染毒DM对三种ATPase活性的影响并不一致。     

维生素C和免疫多糖对中华倒刺鲃非特异性免疫功能的影响

在中华倒刺鲃每千克基础饲料中分别添加免疫多糖2g、免疫多糖4g、维生素C（VC）700mg、VC1400nag、VC700mg＋免疫多糖2g、VC700mg＋免疫多糖4g、VC1400mg＋免疫多糖2g、VC1400mg＋免疫多糖4g,以基础饲料为对照组,连续投喂2周后,通过测定血液白细胞的数量,白细胞吞噬能力,血清、头肾和脾脏的溶菌酶活力,探讨不同浓度的免疫多糖和VC对中华倒刺鲃非特异性免疫功能的影响．结果表明：VC和免疫多糖都能提高中华倒刺鲃免疫机能,且免疫多糖和VC二者间在较低浓度组合时有协同作用,高浓度组合时反而产生拮抗作用．免疫多糖和VC的最适宜组合浓度为（VC700mg＋免疫多糖2g）／kg基础饲料．     

抗氮营养阻遏黄孢原毛平革菌pcR5305产酶条件优化

对选育的抗营养阻遏产酶黄孢原毛平革菌pc R5305菌株的产酶营养基质与环境条件进行了优化。实验结果表明pc R5305在37℃、初始p H4.5条件下,以酒石酸铵（富氮2.2g/L）,葡萄糖（20g/L）,Mn^2＋（0.2g/L）,Tween 80（1g/L）为主要成分的优质培养基中培养24h后添加5.2mmol/L苯甲醇,pc R5305的产酶活性最高。上述条件下,该菌接种后静置培养6 d,Li P活力可达到2013.59U/L,Mn P活力达到353.42U/L,分别提高了23.41%和27.97%。     

长时间有氧运动后再做力竭运动的血糖、血乳酸变化

[目的]探讨运动训练专业的学生在经过80min的有氧运动后再做力竭性运动的血乳酸水平,并以此判断长时间有氧运动后糖酵解供能能力的降低程度.[方法]使用日本京都LT-1710型血乳酸仪和GT-1640型血糖测定仪对20名运动训练专业1年级的男大学生进行80min有氧步行实验,测得实验前后相关实验数据进行分析.[结果]运动训练专业20名男大学生有氧运动持续到第30min显示,以相对耗氧量为29～31mL/min-1·kg-1的强度运动时,HR、VO2(绝对值)和血乳酸的平均值分别为147次、2.07(L)和3.03mmol/L.80min有氧运动结束再做力竭运动,测得运动后第3min的血乳酸浓度为8.25mmol/L,血糖浓度为4.67mmol/L.[结论]力竭运动后的血乳酸浓度与短时间剧烈运动后的血乳酸相比浓度减少一半左右,乳酸系统的供能能力在经历80min的有氧运动后减少一半左右.