应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查

应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.     

2型糖尿病的相关基因多态性的研究进展

非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）即2型糖尿病是一种多基因遗传性疾病,其遗传表型具有很大的异质性,是以胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷两方面为主要特征。2型糖尿病的病因和发病机理复杂,至今尚未完全阐明,一般认为该病具有遗传倾向,所引起的代谢紊乱是遗传因素和环境因素共同参与或相互作用的结果。在诸多危险因素中遗传因素的作用最为突出,目前已经发现有不同种族的多个基因与2型糖尿病关联。     

KCNJ11基因多态性与2型糖尿病的关联研究

目的：探讨β-细胞腺苷三磷酸一敏感性钾通道（potassium inwardly—rectifying channel,subfamilyl,member 11,KCNJ11）基因E23K多态性与湖北汉族人群2型糖尿病的相关性。方法：采用同胞对（家系内对照）和随机病例一对照两种实验设计,利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术分析湖北地区443例样本KCNJ11基因E23K多态性。并测定身高、体重、腰围、臀围、血压和空腹血糖等生理生化指标。结果：随机病例一对照实验设计中,病例组与对照组的基因型频率与等位基因频率有显著性差异（P〈0．05或P〈0.01）。结论：在湖北汉族人群中,2型糖尿病的发生发展与KCNJ11基因E23K多态性相关联,KCNJ11基因是湖北汉族人的一个2型糖尿病易感基因。     

胰岛素抵抗相关基因与2型糖尿病相关性的初步研究

目的:研究与胰岛素抵抗有关的三个基因的多态性GPR10(G-protein-coupled re-ceptor 10)(-62 G/A)、FOXC2(Forkhead box C2)(-512 C/T)、PGC1(Peroxisome proliferatoractivated receptorγcoactivator-1)(Thr394Thr)与2型糖尿病相关性.方法:利用等位基因专一性PCR的方法,对来自上海地区的正常人和肥胖的2型糖尿病患者进行基因分型,并通过X2比较基因型频率及等位基因频率在两组人群中是否存在显著性差异.结果:GPR10基因-62G/A多态性基因型频率在糖尿病人群和正常人群中的分布分别为:糖尿病人AA 14、AG 39、GG 34;正常人AA 2、AG 44、GG 42,具有显著性差异,等位基因频率分布为:糖尿病人A 67 G107、正常人A48、G 128,也有显著性差异.结论:GPR10基因-62G/A多态性可能与2型糖尿病相关,但该结果仍有待于进一步扩大样本量进行验证.     

鹅CYP2C45基因核心启动子的鉴定及其多态性与产肝性能的关系

鉴定鹅CYP2C45基因核心启动子序列,并筛选其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,比较等位基因的转录活性差异及其与肝重性状的相关性,进而为肝重性状的选育筛选新的分子标记。通过双荧光素酶报告基因载体系统鉴定鹅CYP2C45基因启动子转录活性区域;通过PCR-SSCP、测序和序列比对方法分析朗德鹅的CYP2C45基因SNP,并分析不同基因型的转录活性;使用SPSS软件分析不同基因型与产肝性能的关系。结果表明通过双荧光素酶报告基因载体系统分析,发现鹅CYP2C45基因启动子活性区域为-165~+38bp;对朗德鹅群体进行了该区域SNP筛查,在5′上游-93bp处发现1个T/C突变,造成了屠体重的显著差异,对该突变造成的不同突变型进行转录活性分析,发现转录活性存在差异但未达到显著水平,推断CYP2C45基因的转录水平与鹅产肝性能呈正相关。本研究发现鹅CYP2C45基因核心启动子区域为-165~+38bp,该区域存在1个SNP,且与屠体重显著相关。     

一种一氧化氮比率型时间分辨荧光探针的合成与应用

为了研制可用于一氧化氮(NO)比率型测定的时间分辨荧光探针,基于铽(III)配合物-罗丹明衍生物间的荧光共振能量传递(FRET)原理,设计、合成了1种对NO具有特异性识别的新型比率型时间分辨荧光分子探针TR-NO。在330nm光的激发下,该探针只发出铽(III)配合物的特征长寿命荧光,但当其与NO反应后,识别基团离去,导致从铽(III)配合物到罗丹明基团发生FRET过程,表现为铽(III)配合物在540nm处的荧光强度逐渐减弱,而罗丹明在580nm处荧光强度逐渐增强,反应前、后罗丹明与铽(III)配合物荧光强度的比值IRh/ITb增加了27.8倍,基于此建立了以TR-NO为探针的高灵敏度、高特异性NO比率型时间分辨荧光测定新方法。     

应用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌与癌旁组织中microRNA-93的差异表达状况

为分析microRNA-93在人子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中的表达差异状况,初步探讨其在子宫内膜癌中的作用,应用实时荧光定量PCR方法检测32例子宫内膜癌及对照癌旁组织中microRNA-93的表达状况。结果表明,子宫内膜癌组织中microRNA-93的表达量高于癌旁组织（P<0.01）,可见microRNA-93可能作为癌基因参与子宫内膜癌的发生发展过程。