斑节对虾白斑综合症杆状病毒检测方法及其应用

对白斑和红体带白斑斑节对虾光镜和电镜观察，对虾白斑综合症杆状病毒（WSBV）感染外胚层和中胚层组织器官．应用WSBVPCR检测技术证实一种WSBV感染鳃、甲壳表皮、神经和肌肉，在肝胰腺、消化管（含胃）、心脏和血液中未检测到，其结果与组织学观察有出入．PCR检测WSBV最佳取材部位是对虾甲壳表皮和肌肉．PCR方法可应用于WSBV的提纯，实验用健康虾的筛选，实验感染WSBV的跟踪，以及流行病学研究．通过PCR方法和电镜观察结合证实红体病斑节对虾（不带白斑者）不是WSBV所致，修正了前人的观点．     

斑节对虾杆状病毒传播媒介的研究

应用石蜡切片及电镜技术检测了斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）饲养塘中的桡足类（Ｃｏｐｅｐｏｄａ）及作为斑节对虾活饵料的蓝蛤（Ａｌｏｉｄｉｓ）和河蚬（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａｆｌｕｍｉｎｅａ）,探讨了斑节对虾杆状病毒的可能传播途径及传播媒介     

斑节对虾杆状病毒感染与水体理化因子

通过二造虾塘水体理化因子的检测和斑节对虾杆状病毒感染的调查，发现水体理化因子可影响斑节对虾杆状病毒的感染度，其中影响最大的是氨氮，其次是盐度和亚硝酸氮．氨氟和pH值有协同作用，硫化物可诱发斑节对虾杆状病毒病，亚硝酸氮可明显地抑制对虾的生长．     

斑节对虾杆状病毒病的组织病理观察

斑节对虾杆状病毒感染斑节对虾肝胰腺和前中肠上皮细胞。组织病理变化表现为肝胰腺上皮细胞核肥大,为正常细胞核直径的2～6倍,细胞坏死,脱落。     

斑节对虾和日本对虾肝胰腺脂肪成份和含量及其与斑节对虾杆状病毒的关系

体长10～12cm养殖健康斑节对虾肝胰腺含水量71．06％，干重样品脂肪含量34．28％，湿重样品脂肪含量9．60％；班节对虾杆状病毒（MBV）感染严重的班节对虾肝胰腺含水量较健康班节对虾少，干重样品脂肪含量和湿重样品脂肪含量明显高，二者比较，3项指标均具显著位差异；MBV轻度感染斑书对虾肝胰腺含水量和脂肪含量与健康斑节对虾相近，无显著性差异，养殖健康斑节对虾肝胰腺饱和脂肪酸以棕榈酸为主，不饱和脂肪酸以十八碳和二十二碳脂肪酸为主；必需脂肪酸亚油酸达21．72％，体长16～18cm日本对虾肝胰腺饱和脂肪酸以棕榈酸为主，不饱和脂肪酸中油酸、花生烯酸和二十二碳烯酸（C22：1）含量较高，亚油酸和亚麻酸含量较少，二十二碳六烯酸含量达9．91％．     

养殖斑节对虾红体病病原及组织病理研究

养殖班节对虾红体病病原经组织病理、电镜观察和白斑杆状病毒PCR检测，初步证实是一种枝原体．枝原体高度多态性，主要以球状体和分枝丝状体形式存在．球状体直径60～108um，分枝丝状体膨大部直径达150um，丝状部为25um．枝原体主要寄生在斑节对虾肝胰腺上皮细胞、造血组织细胞、鳃上皮细胞、甲壳表皮细胞等，致肝胰腺萎缩糜烂．受感染细胞细胞质空泡变性，细胞核固缩解体，内质网、高尔基体和溶酶体消失．对红体带白斑斑节对虾、白斑（无红体特征）斑节对虾和红体（无白斑特征）斑节对虾组织病理、电镜和白斑杆状病毒PCR检测，证实斑节对虾红体病不是由白斑杆状病毒引起，红体斑节对虾具有白斑杆状病毒是病毒继发感染所致．     

斑节对虾杆状病毒(MBV)PCR和核酸探针检测方法的建立与应用

从感染斑节对虾杆状病毒（MBV）的斑节对虾仔虾肝胰腺中纯化MBV，经抽提后以之为模板进行聚合酶链反应（PCR），引物根据苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcNPV）多角体蛋白基因序列的高度保守区设计并合成．PCR扩增得到650b单一核苷酸片段．PCR产物部分序列分析表明此PCR产物与AcNPV多角体蛋白基因序列有约60％的同源性．以此650pDNA片段为探针作打点杂交，探针能与受MBV感染的斑节对虾肝胰腺和消化道中抽提的总DNA杂交，不能与其它组织中抽提的总DNA杂交．应用PCR方法检测MBV的组织特异性，得出与打点杂交相同的结果；检测斑节对虾各生长阶段及卤虫感染MBV情况，认为MBV可能为水平传播；PCR检测方法与组织学方法比较，认为前者更加敏感．     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白Vp28基因的克隆、表达及蛋白纯化

以对虾白斑病毒DNA为模板扩增出Vp28基因,经限制性内切酶（SmaI,Not I）酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了Vp28基因原核表达载体．转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有与预期大小约52kD相吻合的融合蛋白带,18℃诱导24h后获得了可溶性表达的目的蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了纯度很高的目的蛋白．     

示踪法研究斑节对虾对磷酸盐的直接吸收

应用同位素示踪法研究了斑节对虾对水中磷酸盐的直接吸收，结果显示斑节对虾能从水环境中直接吸收磷酸盐，但其浓集能力较弱，各器官对水中32P的波集能力为：鳃＞头胸甲＞肝胰腺＞肌肉；48h鳃对32P的浓集系数为6．38，为肌肉的14倍，对浓集系数的合理计算也进行了初步的讨论．     

日本对虾爆发性流行病病原体的调查

采用石蜡切片和电镜技术检测了发病塘的养成期日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）２０尾,发现２尾感染了斑节对虾杆状病毒,１１尾感染了日本对虾中肠腺坏死杆状病毒（ＢＭＮＶ）．结果表明,日本对虾的发病主要由ＢＭＮＶ感染所致     

PCR法分析WSSV在日本对虾体内的感染增殖

注射白斑症病毒（WSSV）感染日本对虾，隔一定时间取样。PCR检测病毒在对虾体内的分布情况．结果表明：感染后12h首先在血液和鳃中出现病毒，而后是消化道和心脏，最后是肌肉和附肢，但在肝胰腺中没有观察到病毒．