草甘膦降解菌C-17的分离鉴定及生物学特性

从福建三农集团污水处理池分离到一株降解草甘膦的菌株C—17,经形态与生理生化实验,C-17初步鉴定为胶红酵母属真菌。在草甘膦基础培养基上,C-17菌株对草甘膦的最高耐受浓度为6000mg/L,草甘膦浓度为3000mg／L时生长量最高。C-17菌株能以草甘膦为唯一氮、磷源,培养7d对草甘膦的降解率为83．6％,培养基中缺乏别的磷源,有利于促进C-17菌株对草甘膦的降解。     

豫北地区猪源致病性大肠杆菌分离与鉴定

从豫北地区发病猪场采得144份仔猪黄、白痢检样，共分离出大肠杆菌63株，经血清学试验鉴定为O2 8株、O139 8株、O101 7株、O138 7株、O20 6株、O60 6株、O95株、O45 3株、O63 3株、O141 2株、O149 2株、O147 1株、O8 1株，另有4株未能定型，以O2，O139，O101，O138，O20，O60，O9等株血清型占优势。对不同分离株进行了药敏试验。本研究结果为豫北地区致病性猪大肠杆菌药物敏感性试验和多价灭活苗的制作提供了基础，对指导规模化养猪场大肠杆菌病综合防治模式的制定，对预防猪大肠杆菌病具有重要意义。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏分析

采用常规细菌分离鉴定方法和分子生物学技术对四川某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)感染的病猪关节液、心包液、肺脏等病料进行了致病菌的分离与鉴定.经细菌分离培养特性、生化试验以及16S rDNA序列PCR扩增,确定分离菌株为HPS.动物致病性试验结果表明,分离菌株具有较强致病性.药敏试验表明,该HPS菌株对青霉素、链霉素、磺胺甲唑、林可霉素、苄唑西林等多数抗生素耐受,而对新霉素、头孢噻肟等较敏感.     

鸡产酸克雷伯菌的生物学特性研究

鸡产酸克雷伯菌培养在各种培养基上均可生长,单个散在或两两相连.本菌为无芽胞、无鞭毛、有荚膜的革兰氏阴性杆菌,大小约0.55～1.0um×0.9～1.9um;能利用各种糖类(除蔗糖外)产酸或同时产气,能利用尿素,不利用枸橼酸盐;M.R阴性,V-P阳性,不产生H2S,不液化明胶,靛基质试验阳性,硝酸盐还原反应阳性,触酶反应阳性;对硫酸卡那霉素和氯霉素敏感;小白鼠、鸡、家兔对本菌均易感.     

一株纤维素酶高产菌的分离及鉴定

为了对筛选得到的1株纤维素分解菌进行鉴定,并研究其对废弃秸秆资源的降解效果.本文通过羧甲基纤维素钠(CMC)固体培养初筛和复筛,从土壤中获得了1株酶活力较高的菌株,并对其进行不同碳源酶活力的初步研究.利用PCR法,结合18S rDNA的序列分析鉴定该菌株为产黄青霉菌,将该菌株接种到不同碳源的发酵培养基中,30℃培养48 h后测定酶活,发现该菌株不到12 h对滤纸完全崩解;15 d内对小麦秸秆分解迅速.同时测得羧甲基纤维素酶活力、滤纸糖化力和小麦秸秆纤维素分解能力分别为:4.653 U/m L、5.445 U/m L和6.876 U/m L.     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的联合用药的文献计量分析

目的从文献计量学角度分析国内外联合用药治疗碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)感染的相关文献。方法检索Pub Med、EMbase、Web of Science、中国知网、万方数据库中联合用药治疗CRKP的相关文献,截至2015年8月。用Endnote 2.0软件对纳入文献的时间、语种、国家、文献类型、所用药物等进行分析。结果共纳入文献194篇,其中英文181篇,中文13篇。第1篇发表于2008年,随后总体呈现逐年上升的趋势。发表量国家最多的是美国(60篇,占33.1%)。文献类型以综述为主(共78篇,占40.21%)。联合用药组合以多黏菌素、替加环素和碳青霉烯类抗菌药物为基础的研究报道居多。结论目前CRKP感染性疾病的治疗方案报道以多黏菌素、替加环素和碳青霉烯类为基础联合其他抗菌药物的体外抗菌活性研究为主,但动物体内协同抗菌活性研究和临床研究证据不足。     

超广谱β-内酰胺酶阳性肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌筛查及药敏分析

目的:在常规药敏试验中筛查产超广谱β—内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌,了解其耐药性,为临床提供参考.方法:采用双纸片协同试验,检测587株肺炎克雷伯菌和大肠埃希氏菌的产超广谱β—内酰酶阳性率,并对其体抗生素耐药性作了初步研究.结果:超广谱β—内酰胺酶(ESBLS)总阳性率24.7%.219株肺炎克雷伯菌中ESBLS菌株66株,阳性率30.1%,368株大肠埃希氏菌中ESBLS菌株79株,阳性率21.5%.ESBLS产酶株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶的耐药性高达86.4%—100%.较不产ESBLS菌株高74.6%—83.1%.所有受试菌对亚胺培南均敏感.结论:治疗ESBLS细菌引起的感染,应用碳西霉类、头霉烯类,或加酶抑制剂的抗生素.     

豫北致病性猪大肠杆菌分离鉴定

从豫北56个发病场采得92份仔猪黄、白痢检样,通过鉴别培养基培养和生化试验,共分离出致病性大肠杆菌61株,经大肠杆菌O抗原鉴定,其血清型为O10115株、O6013株、O1418株、O1397株、O1385株、O93株,另有10株未能定型,优势血清型为O101,O60,O141,O139,占定型菌株的84.3%。本实验结果为豫北地区致病性猪大肠杆菌药物敏感性试验和多价灭活苗的制作提供了基础,对指导规模化养猪场大肠杆菌病综合防止模式的制定及预防猪大肠杆菌病具有重要意义。     

大理学院附属医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的：对大理学院附属医院2011年至2012年临床分离的大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌的耐药性进行分析,指导临床合理应用抗生素。方法：菌株分离及培养按常规方法进行,细菌鉴定采用VITET-2 Compact 60全自动微生物分析仪,药敏试验采用K-B法。结果：共收集标本183株,其中大肠埃希菌146株：口痰92株（63%）、分泌物17株（11.6%）、尿液16株（10.9%）,脓液9株（6.1%）,其他12株（8.2%）;肺炎克雷伯杆菌37株：口痰27株（73%）、分泌物5株（13.5%）、脓液3株（8%）其他2株（5.4%）。药敏试验结果显示：大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药率较低,分别为10.3%、6.2%、2.7%和10.8%、13.5%、2.7%。结论：大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌两年痰液中检出率呈上升趋势,对左氧氟沙星、头孢唑啉,氨曲南,头孢他啶等耐药率超过50%,特别是头孢他啶的耐药率相对于2008年显著升高,而对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药性较低,临床应根据药敏实验合理选择抗生素。     

周口地区鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

从周口地区鸡场无菌采集临床上疑似大肠杆菌病的116只病死鸡的心、肝、脾、肾,进行病原菌的分离、生化鉴定、动物试验和药敏试验,共分离出76株大肠杆菌,其中有44株能使小白鼠和雏鸡发病死亡,但各菌株之间毒力存在明显差异.经O因子血清型试验,确定56株大肠杆菌分属6个血清型,分别为O1,O2,O20,O45,O78,O1138,其中O1,O2,O45,O78为主要血清型,占定型菌株的73.7%,另有11株未能定型.药敏试验结果表明,所分离的76株大肠杆菌对头孢曲松、庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星较敏感,高敏菌株达78.9%-86.8%.因此在使用药物治疗大肠杆菌病时,应根据药敏试验结果,选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药.     

纤维素降解菌ZN-206的分离鉴定

采用连续稀释分离法和平板划线分离法的方法,利用以羧甲基纤维素钠为碳源的筛选培养基,从堆肥土壤中共分离获得具有纤维素酶降解能力的菌株15株,其中,菌株ZN-206对纤维素降解能力最强.根据ZN-206菌株的形态特征、培养性状,生理生化指标、细胞壁组成成分及16SrDNA序列进行系统的研究,将菌株鉴定为禾粟链霉菌(Streptomyces graminearus).     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定

目的:探讨成体大鼠的间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养,为其应用提供理论依据.方法:用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,对分离的细胞进行碱性磷酸酶的检测.结果:取得较高纯度的成体大鼠骨髓MSCs,并保持细胞的活性;成体大鼠骨髓MSCs在体外培养中为贴壁生长的单个核球形细胞,培养3～4d后开始大量增殖,并形成形态均一的细胞增殖集群,对分离后所获得的细胞进行AKP染色为强阳性.结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的MSCs,是实用、便捷和可行的方法.并且在体外培养条件下能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,可以成为进一步进行细胞扩增或其他实际应用的基础.     

牛蛙源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定和药敏分析

为了分离和鉴定牛蛙（Rana catesbeiana）养殖环境的致病微生物,并筛选相关的抗菌药物,采用稀释涂布法从牛蛙养殖场的废水中分离获得1株优势菌株W6,并通过革兰氏染色和菌落形态观察、生理生化特性分析、16SrRNA基因序列分析等进行菌株鉴定,随后对该菌进行药敏性分析以及致病性试验．结果显示：该菌株为革兰氏阴性短杆菌,培养特性、生理生化反应与弗氏柠檬酸杆菌基本一致;16SrRNA基因同源性及系统进行分析显示,W6菌株与弗氏柠檬酸杆菌参考菌株同源性大于99%,且为同一进化分支．同时,药敏实验结果表明,该菌株对大多数抗生素具有较强耐药性,仅对呋喃唑酮（痢特灵）、头孢他定高度敏感．中草药水提取物抑菌实验表明,乌梅、五味子、艾叶、黄芩等中草药水提取物对该菌株具有较好的体外抑菌活性．致病性分析表明,该菌对牛蛙具有一定的致病性．     

肺炎克雷伯菌毒力因子的分布特征及其对小鼠的致死性

为分析肺炎克雷伯菌各种毒力因子的致病性,本文用PCR的方法检测高黏性厚荚膜形成相关因子-染色体和质粒介导的c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2,铁载体基因(iucA、iroN、ybtS,enterobactin),III型黏附因子(MrkD)及溶血毒素;用动物实验检测LD50值。结果表明:57株肺炎克雷伯菌临床分离菌株分为高黏性菌(22.81%,13/57)和非黏性菌(77.19%,44/57)。不同于非黏性菌,100%的高黏性菌携带c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2,普遍携带iucA(100%,13/13),iroN(84.61%,11/13)及ybtS(76.92%,10/13)。动物感染实验结果显示,高黏性肺炎克雷伯菌的LD50值中位数值(9.10×105 cfu/mouse)明显低于非黏性菌值(3.24×108 cfu/mouse)。可见携带c-rmpA和p-rmpA/p-rmpA2并伴随携带铁载体基因是高黏性肺炎克雷伯菌共有的特征,其高黏性特性在一定程度上可作为筛选高致病性肺炎克雷伯菌的预测性指标。     

豫北七猪场大肠埃希氏菌的分离及鉴定

从豫北地区7家规模化猪场采得疑似仔猪黄痢、白痢、水肿病病料64份,实验室共分离到大肠埃希氏菌28株,经血清学试验鉴定为O_2的4株、O_(149)的3株、O_9的3株、O_(O07)的3株、O_(20)的3株、O_(138)的2株、O_(60)的2株、O_(45)的1株、O_(141)的1株、O_(63)的1株、O_(147)的1株、O_(149)的1株、O_8的1株,另有2株未能定型,以O_2、O_(149)、O_(107)、O_(138)、O_(20)、O_(60)、O_9等株血清型占优势.对不同分离菌株做了药物敏感性试验,为该地区猪致病性大肠埃希氏菌病治疗中药物的选择提供了依据.     

肠膜明串珠菌的分离与鉴定

用厌氧培养的方法从酸泡菜中分离出一菌株。经细菌形态学和生理生化特性鉴定为肠膜明串珠菌。再经进一步生理生化特性鉴定为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种     

高效液相色谱法检测肺炎克雷伯氏菌发酵液中的3-羟基丙酸

3-羟基丙酸(3-hydroxypropionic acid, 3-HP)是一种重要的平台化合物。肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)利用甘油生产3-HP的过程中,常伴有乳酸等副产物的产生。在利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)检测3-HP产量时,两者色谱峰重叠、难以有效检测3-HP产量。因此,通过选择与优化HPLC的检测条件,建立了一种简单、快速、准确检测3-HP含量的检测方法。结果表明：利用色谱柱HPX-87H(300 mm×7.8 mm, 5μm),流动相5 mmol·L^-1 H₂SO₄,流速0.6 mL·min^-1,柱温65℃,进样量20μL,采用紫外检测器(210 nm),完成了3-HP产量的检测。该方法不仅提高了3-HP的检测效率和检测精度,还可以准确检测发酵过程中产物的变化。     

植物外植体内生菌的分离与鉴定

本试验以月季、白网纹草、一品红为材料，对其内生菌分离并进行一系列的生化特征鉴定试验及生长曲线测定试验、不同温度下菌株的生长情况试验等，经查阅《常见细菌鉴定手册》，可初步确定月季的内生菌属欧文氏菌属（Erwinia winsloetal，1920），白网纹草的内生菌属类芽孢杆菌属（Paenibacillus Ash，Priest＆collin，1994），一品红的内生菌属短芽孢杆菌属（Brevibacillus Shida,1996）。     

急性腹泻患者奇异变形杆菌分离鉴定及其生物学特性

目的:对某市医院腹泻门诊收集的一起急性腹泻患者肛拭子样本进行奇异变形杆菌分离鉴定、耐药性与致病作用分析。方法:增菌培养、划线分离,革兰氏染色,镜检观察细菌形态,16S rRNA基因扩增、测序鉴定细菌种类;纸片法进行药物敏感性检测,PCR法筛检毒力基因,结晶紫染色法检测细菌生物被膜形成,小鼠感染试验分析分离株致病力;荧光PCR法分析奇异变形杆菌感染小鼠致不同脏器炎症因子表达水平。结果:成功从腹泻样本中分离获得3株细菌(NB1711、NB1335和NB1336),经菌种鉴定均为奇异变形杆菌。3株细菌对米诺环素、红霉素、多粘菌素等9种药物表现为多重耐药,对头孢唑林、哌拉西林、环丙沙星等敏感。NB1711分离株完整编码8种毒力因子,生物被膜形成能力强,对小鼠致病最高,感染该菌株可显著上调小鼠不同脏器IL-1β、IL-6、TNFα、IFN-γ等炎症因子的表达。结论:奇异变形杆菌感染是引发此次急性腹泻的主要病因,细菌分离株NB1711耐药谱广、毒力强、可形成致密生物被膜,感染小鼠介导形成炎症反应。本研究为进一步探究奇异变形杆菌感染机制及临床用药提供科学依据。