农杆菌转化法问题探讨

对高中生物学教学中有关农杆菌转化法的原理和过程进行简要分析探讨,为学生深刻理解该实验背后的原理提供借鉴,为生物学教师提供教学参考。     

农杆菌转化法中的“Ti质粒转化载体系统”的简介——一道江苏高考题的奥秘解读和拓展

以2009年江苏高考卷34题中的农杆菌转化法与教材中农杆菌转化法的区别为起点,依次分析了农杆菌转化法中需要构建Ti质粒转化载体系统的原由和Ti质粒转化载体系统的类型,以期促进中学教师和学生对农杆菌转化法的全部了解。     

浙江省选考中“农杆菌介导的转基因植物”相关试题释疑与拓展

结合历年浙江省生物选考中“农杆菌介导的转基因植物”相关试题,综合解析试题的相关知识背景,梳理并拓展农杆菌介导的转基因植物生产的一般操作流程。     

发根农杆菌转化药用植物研究进展

利用发根农杆菌转化药用植物,并对毛状根进行离体培养,大量提取重要成分,是药用资源植物可持续发展的有效途径之一。讨论了发根农杆菌的致病机理、影响发根诱导的因素、发根培养技术。     

农杆菌介导的水稻基因转化技术的研究进展

通过植物基因工程进行水稻育种,实现在优质的基础上提高水稻产量成为重要趋势.介绍了农杆菌介导转化水稻取得的重大进展,从组织培养体系对转化频率的影响和农杆菌侵染体系对遗传转化的影响两方面探讨了影响农杆菌介导的水稻遗传转化的主要因素,并对前景进行了展望.     

与陈重阳老师探讨农杆菌转化法中外源基因的去向问题

<正>《中学生物教学》2009年第10期中,陈重阳老师在"转基因植物中外源基因的遗传是否遵循孟德尔遗传定律"一文中这样写道:外源基因都包含在农杆菌细胞内,所有的外源基因以农杆菌为单位存在于植物细胞质基因组中,故其遗传方式为细胞质遗传,不遵循孟德尔遗传定律。我觉得陈老师这种表述不对,理由如下:     

农杆菌介导的马铃薯转化的优化体系

实验采用农杆菌LBA1100介导转化马铃薯品系的春薯3号,优化了马铃薯转化的几个影响因素：①外植体采用叶片诱导比节间诱导有利于愈伤组织的形成;②农杆菌侵染时间为8-10分钟时转化率最高;③菌液浓度OD600约为0.2-0.4之间时转化率最高.     

农杆菌注射渗透法转化烟草实验研究

利用携带植物表达载体质粒pCambia2301的农杆菌菌株,通过注射渗透法对烟草叶片进行感染转化,组织化学染色检测GUS报告基因瞬时表达的结果表明,在O.D.600值为0.4～0.8范围内的菌液浓度不影响转化效果,感染时间72 h以上可使瞬时表达的阳性检出率达到100%,农杆菌菌株EHA105比LBA4404表现出更强的转化活性.     

农杆菌介导CSPs基因转化甘蓝型油菜转化体系的研究

以甘蓝型油菜下胚轴为外植体,通过农杆菌介导法,对其遗传转化条件进行了研究,建立了转冷激蛋白(CSPs)的遗传转化体系。结果表明,甘蓝型油菜下胚轴经预培养2d后,用浓度为OD600=0.4的农杆菌菌液侵染90s,再经共培养和愈伤诱导培养,外源基因转化到油菜下胚轴外植体的转化效率高。然后通过PCR检测转化后在筛选培养基上诱导成苗的油菜,初步确定CSPs基因已整合到油菜再生植株中。这为以后其他基因转化到甘蓝型油菜的研究奠定一定的基础。     

农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理研究

该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。     

根癌农杆菌介导植物遗传转化的分子机制

根癌农杆菌介导转化法是目前应用最广泛的植物转基因方法,通过植物表达载体上DNA的加工和转移将外源DNA转运到植物细胞内.主要介绍了根癌农杆菌介导植物遗传转化的分子机制.     

农杆菌介导的白菜遗传转化影响因子研究进展

白菜遗传转化技术中最常用的方法是农杆菌介导法。由于白菜的再生能力较低，因此农杆菌介导白菜遗传转化的研究报道较少。本文就近十年来的研究进展作一简要回顾，并对影响其转化及再生频率的关键性因子，如植物基因型、外植体及生理状态、农杆菌菌株、感染方法和培养基附加成分等方面进行了较详细的讨论。     

对农杆菌转化法几个疑问的解答

人教版普通高中课程标准实验教科书《现代生物科技专题》中介绍了用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞。学生在学习这一内容时提出了好几个问题,现对有些问题作如下解答：     

从双元质粒系统农杆菌中制备微型质粒

国内农杆菌微型质粒ＤＮＡ提取较成功的方法尚未见报导。本法试提供一种快速、高效的提取方法。采用此法，可以避免小量提取繁琐的步骤，操作条件温和，方法简单，易于重复，生产率高，值得推广。     

共培养条件对农杆菌介导转化平菇菌丝体的影响

目的:探讨根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的最佳转化条件。方法:以平菇ACCC52857为受体,利用潮霉素B抗性基因作为筛选标记,建立根癌农杆菌介导的平菇菌丝遗传转化体系;探讨乙酰丁香酮(AS)的浓度,根癌农杆菌的浓度,共培养的时间和共培养的温度这四个条件对转化的影响。结果:根癌农杆菌菌液浓度为OD600=0.6~0.7,诱导培养基中添加200μmol/L AS,25℃共培养3~5d,其转化效率最高。结论:对根癌农杆菌介导平菇菌丝转化体系条件的优化,为提高遗传转化效率,以及菌株选育工作奠定基础。     

土壤农杆菌在植物基因工程中的应用

利用土壤农杆菌转入外源基因是植物基因工程中的有效手段．为此，对土壤农杆菌转化系统中的载体系统、土壤农杆菌转化植物的分子机制以及土壤农杆菌在基因工程中应用的研究进展作了综合评述。     

基于真实情境的浙江选考物理试题研究

近三次浙江选考物理命题的最大亮点,就是基于真实情境设计问题。将物理问题建立在大众视野下的生活情境中,有高大上的国之重器,也有接地气的市井生活,给看似枯燥乏味的物理披上了一件浮翠流丹的外衣,而它真正的内涵是简洁的物理原理,以及基本的物理概念与规律。学生解题的关键是利用好题目中的图境,这需要一定的图像素养。学生审题的过程就是实现“转化”的过程,将题目文字转化为物理情境,把物理情境转化为物理条件,最终将物理条件转化为数学公式。这类选考物理试题能够很好地考查学生必须掌握的物理思想方法,从而考查学生构建物理模型的能力和科学思维能力。     

农杆菌介导的TaLEA1 基因对拟南芥的遗传转化

将含有TaLEA1基因的表达载体pBI121-TaLEA1经根癌农杆菌介导,利用花粉管通道法转入拟南芥,得T0代种子,抗Kan筛选得转基因植株.经PCR检测,初步证明外源TaLEA1基因已整合到拟南芥基因组中.     

苜蓿转化体系的建立方法研究

苜蓿是世界上分布最广的一种多年生豆科牧草,然而,随着草场盐碱化程度的增加及植被的严重退化,仍需要培育大量的抗逆性苜蓿新品种,以满足草地畜牧业对牧草需要的日益增加.本文就利用基因工程技术将外源基因人工整合到受体基因组中,从而获得转基因耐盐碱苜蓿的研究做一简介.     

用于农杆菌转化的雪花链外源凝集素（GNA）基因植物中间表达载？…

雪花莲外源凝集素（ＧＮＡ）是一类能特异地和甘露糖残基结合的蛋白质成分，对人畜毒性极低，但对同翅目昆虫有强烈的抗性。为利用雪花链外源集素对同翅目害虫的抗性，将雪花莲外源凝集素基因置于Ｕｂｉ启动子和Ｔｎｏｓ终止子的控制之下，插入ｐＣＡＭＢＩＡ３３００的ＳｍａＩ位点，构建了可用一农杆菌转化的植物中间表达载体－ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ．将ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ电击转入农杆菌，得到了带有ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ的农杆