商陆扩展蛋白基因PaEXP1在逆境胁迫下的表达

利用同源克隆的方法,从商陆中克隆得到扩展蛋白基因的全长cDNA序列,命名为PaEXP1(GenBank 登录号为GQ851947).PaEXP1长1128bp,含有759bp的完整开放阅读框,编码252个氨基酸,分子量27.1kD,等电点8.55.PaEXP1氨基酸序列N端含有8个半胱氨酸残基,1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)域,C末端存在4个保守的色氨酸残基,具有扩展蛋白的典型结构.系统进化树分析表明,PaEXP1属于扩展蛋白的α-扩展蛋白家族.Real time-PCR结果表明,PaEXP1主要在根中表达,低温、盐、重金属和渗透胁迫均强烈地抑制其基因的表达.酵母转化实验表明,转PaEXP1可以提高酵母的平均直径,说明PaEXP1参与细胞壁的松弛扩展和细胞的增大过程.     

商陆寡肽转运蛋白基因PaOPT的cDNA全序列克隆及表达分析

从垂序商陆(Phytolacca americana)的重金属镉胁迫下商陆幼苗叶片的正反向抑制性消减杂交文库(SSH文库)中,获得商陆寡肽转运蛋白基因的EST序列.利用RACE的方法克隆到该基因的全序列cDNA(PaOPT,GenBank注册HQ647015).PaOPT基因在进化中的地位分析表明:它可能属于OPT3基因家族.利用实时荧光定量PCR的方法,分析PaOPT的组织表达特异性以及商陆种子成熟及萌发过程的表达模式.结果表明,该基因是一个在种子中特异性表达的基因,预测它对植物的生长发育有着重要的作用.     

商陆金属硫蛋白基因PaMT的表达分析

从商陆抑制性消减杂交文库中获得金属硫蛋白PaMT,基因全长141 bp,编码46个氨基酸,等电点和分子量分别为3.85和4.7 kD,具有12个半胱氨酸残基:具有典型的金属硫蛋白结构(CXC结构).进化树和蛋白结构分析表明它属于金属硫蛋白家族.PaMT主要在根中表达,且受重金属胁迫上调其基因表达.蛋白融合表达表明,PaMT可以提高大肠杆菌对重金属离子的耐受力.     

在逆境中崛起——读戴尔·卡耐基《积极的人生》

面对打击,遭遇挫折,却依然能够发现生活的美好,并懂得如何在逆境中崛起的人,才真正的拥有智慧!卡耐基用它的成功教育理论,教会了我如何在生活中用为人处事的法则来征服畏惧,培养自信,扬起热忱,改善人际关系,激发潜能。     

溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析

铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。     

靶向IL18-EGF融合蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性研究

人白介素-18(human interleukin 18,hIL18)基因与表皮生长因子受体干扰序列(EGFloop C sequence,EGF)构建IL18-EGF融合基因,利pET32a/E.coli BL21(DE3)表达IL18-EGF融合基因,通过纯化获得有活性的靶向的IL18-EGF融合蛋白,并进行体外细胞试验评价IL18-EGF融合蛋白的抗肿瘤活性.结果表明IL18-EGF融合蛋白能促进人PBMNC的增殖,诱导KG-1细胞分泌IFN-γ、促进肿瘤抗原诱导的B细胞、NK及其CD4+T细胞的活化.     

His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。     

质谱之路质朴人生——访中科院上海植物逆境生物学研究中心余益民教授

我坚持的原则是工作时尽心尽责,全力以赴,工作之余则尽情享受。每当回顾过往光阴,我都觉得自己的年华没有虚度,回国后的忙碌,更是让我感受到生活的充实与快乐!能为祖国的发展、为人类科技进步作出一点贡献,是我此生最大的心愿。     

信息论在高职教学表达中的策略研究

在高职教学实践与研究的基础上,结合信息论观点,运用现代教育理念修课堂教学成为一个有目的、有控制的信息传递过程,实现最佳的高职教学表达效果。     

抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。     

商陆属中五基数花起源于三基数花的新证据——非洲商陆的花器官发生

运用扫描电镜和石蜡切片方法对非洲商陆Phytolacca dodecandra L′Her.的花器官发生过程及花器官各部分的位置排列进行了观察。结果表明：非洲商陆萼片5枚，以螺旋向心方式发生；没有观察到花瓣原基的发生；雄蕊为螺旋离心方式发生，前4枚雄蕊分2对出现在对萼位置，但此后发生的雄蕊的发生顺序明显区别于其他种；心皮4-5枚，与内部雄蕊互生。本文探讨了时空因素对花器官发生的影响，基于对非洲商陆花器官发生的观察，否定了“商陆属源于二轮雄蕊样式”的假说，并为商陆属中“五基数花起源于三基数花”的观点提供了新的证据。     

Study of oxidative stress in obsessive compulsive disorder in response to treatment with Fluoxetine

Oxidative stress has been found to play important role in several neuropsychiatric diseases including Obsessive Compulsive Disorder. A longitudinal case control study was conducted to evaluate the oxidative stress in 30 newly diagnosed obsessive compulsive disorder patients and same number of control patients. Serum thiobarbituric acid reacting substances, plasma ascorbate were assessed to evaluate oxidative stress and Yale Brown obsessive compulsive scale for disease severity before and after treatment with Fluoxetine at the average dosage of 40 mg/day. Improvement in Yale Brown obsessive compulsive scale score by about 43% after 12 weeks treatment was associated with significantly decreased thiobarbituric acid reacting substances and increased plasma ascorbate values (p < 0.05). The newly diagnosed obsessive compulsive disorder patients had higher serum thiobarbituric acid reacting substances as well as a lower plasma ascorbate levels than the control population. Thus, the present study suggested a significant role of oxidative stress in obsessive compulsive disorder and showed that a successful treatment with Fluoxetine not only improves the clinical scenario but also reduces the oxidative stress that may further improve the prognosis of the disease.     

人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用

mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式。细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动。其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用，但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少。到目前为止，尚没有该基因市售的抗体出现，阻碍了对该基因机理的研究。本文目的是利用PCR方法，从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因，制备其多克隆抗体血清。实验结果显示，通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体，用于Western Blotting 试验，可以检测到该蛋白内源性的表达；用于激光共聚焦定位实验显示该内源性蛋白定位在细胞核内；此抗体同时可用于免疫沉淀实验。因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得，为进一步研究该基因的功能创造了条件。     

挑战性-阻碍性压力对员工创造力的影响研究

以压力二维结构为基础,探讨了挑战性压力和阻碍性压力对员工创造力的影响机制,重点分析创造力自我效能感的中介作用以及上下级关系的调节作用。选择企业员工及其直接上级作为研究对象,采用层级回归等方法分析336套配对数据。研究结果表明:挑战性压力正向影响员工创造力,而阻碍性压力负向影响员工创造力;创造力自我效能感在挑战性压力和阻碍性压力与员工创造力之间起到部分中介作用;上下级关系负向调节挑战性压力与员工创造力之间的关系,同时也正向调节阻碍性压力与员工创造力之间的关系。     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

Seasonal variations in markers of stress and oxidative stress in rats

High ambient temperature has been reported to increase oxidative stress by increasing lipid peroxidation and decreasing antioxidant defence in transition dairy cows. It is also known to cause an increase in plasma cortisol levels in goats, European hedgehog and human volunteers. High levels of glucocorticoids have been reported to decrease blood glutathione and erythrocyte superoxide dismutase activity in rats. Although institutional animal houses in research laboratories of developed countries maintain animals in air-conditioned rooms at constant temperature, the same is not true of animal houses in the developing countries especially those belonging to smaller institutions and this could affect the results of the experiments being conducted on these animals. The present research study was done to assess the effects of seasonal variations on the status of erythrocyte oxidative damage, antioxidant defence and plasma cortisol levels in adult female Wistar rats. Rats were kept in their home cages and were left in non-air-conditioned procedure rooms in two different seasons, Hot season (March-May) and Cool season (June to September). Erythrocyte Thiobarbituric acid reactive substances and plasma cortisol levels were significantly increased in rats exposed to high ambient temperature and humidity of the hot season as compared to the rats of the cool season. Erythrocyte reduced glutathione levels, erythrocyte glutathione peroxidase and superoxide dismutase activities were significantly decreased in the hot season group of rats. The results of our experiments showed that exposure of adult female Wistar rats to high ambient temperature and humidity of the hot season increases neuroendocrine stress, oxidative stress and decreases antioxidant defence in them.