PHD类转录因子GmPHD2和Bar基因的植物表达载体的构建

利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。     

Lea14基因原核表达载体的构建

Lea基因编码的LEA蛋白作为一种晚期胚胎丰富脱水保护蛋白,当植物处于逆境状态下时,其能够高水平的表达,通过降低其脱水的程度采达到抵御逆境的功能.为了进一步研究Lea14基因在逆境反应中的功能,本研究以拟南芥cDNA为模板,扩增出Lea14基因,再将Lea14基因克隆到原核表达载体pET-28a中,获得了Lea14基因的原核表达载体pET-28a-Lea14,测序结果表明:pET-28a-Lea载体构建成功,可用于后续蛋白表达研究工作.     

医药卫生

注射用葫芦素B聚乳酸-羟基乙酸纳米球的制备；有机磷类杀虫剂存在其他作用靶分子；基于径向基函数神经网络的多电极阵列信号脉冲电位的分类；温郁金茎叶与块根中挥发油成分的比较研究；新基因PCIA1真核表达载体的构建及HeLa细胞稳定转染株的建立与鉴定；……[编者按]     

弓形虫SAG2表面抗原的克隆与原核表达

目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达。方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒。将重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果:扩增出约561bp的SAG2基因序列,成功构建pGEX-4T-1-SAG2质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%。SDS-PAGE电泳显示pGEX-4T-1-SAG2的融合蛋白的分子量约为45kd。Western-blot显示融合蛋白有良好的抗原性。结论表达质粒在大肠杆菌中得到高效表达,为进一步研究弓形虫病的诊断做好准备。     

水稻低Cd累积相关基因RNA干扰载体及根特异性表达载体的构建

Cd极易被水稻等作物吸收并伴随食物链在人体内累积,严重威胁人类健康.基于水稻Cd累积机制的现有研究,克隆与水稻Cd累积相关的基因Os LCD和Os HMA3,并克隆一个维管组织特异性表达的启动子Os MTP11P,利用Gateway技术及传统酶切、连接方法,成功构建适用于水稻等单子叶植物农杆菌转化的RNA干扰载体pRI-M-LCD和根特异性表达载体p CB2022-H.期望通过这2个载体共转化水稻,使大量的Cd扣留在根细胞的液泡中,限制Cd向地上部分及籽粒中的转运,从而实现Cd在水稻籽粒中的低累积.     

幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的　构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法　采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果　PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论　成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

深海王祖农菌酯酶基因克隆及表达

酯酶被应用在很多方面,但是能够满足工业需要的天然酯酶却很少。利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因estA。基因estA含有一段1272 bp的ORF,序列分析发现与Anaerophaga thermohalophila的酯酶家族基因同源性为60%。利用表达菌株E.coli BL21(DE3),pGEX-6p-1质粒构建表达载体,并对其进行蛋白表达并纯化回收得到EstA,以便后续酶学性质及应用价值探究。     

试论如何构建以大学生社团为载体的德育模式

高校对大学生进行德育的模式有很多,其中以大学生社团为载体的德育模式近年来受到了更为密切的关注。本文主要针对如何构建以大学生社团为载体的德育新模式展开论述。首先,对大学生社团的概念作出界定;其次,提出构建以大学生社团为载体的德育模式的重要意义;最后,提出构建以大学生社团为载体的德育模式的主要方法。     

瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果

RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性（pathogen-derived resistance, PDR）被认为是通过RNA沉默起作用的,转化的核酸片段在基因组中的位置,长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率,用全长马铃薯X病毒（PVX）CP基因构建非翻译的正义,反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,     

基因治疗中基因导入的病毒载体

DNA或 RNA瘤病毒能将其遗传物质转入宿主细胞而引起细胞转化 ,这种能力使有关研究者们想到以它们作为基因治疗的基因载体。虽然确定其安全性难度很大 ,但重组病毒法在实验室里行之有效。转基因效能较高 ,只要解决了其安全性问题 ,将在基因治疗中起到重要作用。本文概述了几种主要病毒载体及其特点。1　逆转录病毒载体逆转录病毒包括一大类基因组 ,长约 1 0 Kb的单链 RNA的有被病毒 ,病毒生活史中 ,其 RNA逆转录成双链 DNA整合到宿主细胞基因组内长期表达。病毒基因组有 gag,pol,env三个结构基因和长末端重复序列 ( LTR) ,包装信号 (…     

SHIP—1对SR3Y1细胞的MMP2分泌和侵润能力的影响

SHIP-1是一个含有SH2结构域的肌醇5磷酸酶．在造血过程中起负调节作用．为了调查SHIP-1对癌细胞的迁移能力和MMP2分泌是否有影响,我们制作了鼠SHIP-1的3种突变体,△SH2-SHIP-1、△Ptase—SHIP-1、△Cter—SHIP-1．并与其野生型全长cDNA一起分别插入到真核表达载体pcDNA3中．分别转染src转化的3Y1细 胞系（SR3Y1）,     

基因工程研究的重大成果——人γ-型干扰素

人γ-型干扰素(IFN-γ)基因工程研究是中国科学院上海生物化学研究所203课题组与复旦大学、第二军医大学等单位合作完成的.IFN-γ是一具有免疫活性的蛋白质,可能对某些肿瘤有治疗作用.本工作用人工合成的IFN-γ基因与表达载体重组构成表达质粒,转化大肠杆菌后,细菌产生的蛋白质中有60—80%为IFN-γ,这是国际上罕     

战略性新兴产业载体配置研究

针对当前关于战略性新兴产业载体配置研究的薄弱,提出依据新兴技术向产业演进的规律为其配置载体。采用理论分析结合案例研究的方法,将战略性新兴产业演进分为孕育、成长和发展三个阶段,根据不同阶段对载体的需求构建载体配置模型,从软载体和硬载体之间的协同出发分析了战略性新兴产业载体的配置规律。结合生物制药产业具有的"接力创新"、"科学商业"等特性,运用论文的模型实证分析了生物制药产业的载体配置策略。     

新形势下思想政治教育载体初探

思想政治教育载体作为联系教育主客体的中介,对推动思想政治教育工作起到重要作用.当前的思想政治教育载体是传统与现代并存,以传统载体为基础,以现代载体中的文化载体、活动载体、管理载体为主形式,以大众传媒载体为发展方向.新形势下,应立足并创新传统思想政治教育载体;积极创造思想政治教育活动载体:有效利用网络,大力发展思想政治教育大众传媒载体.     

病毒基因转移载体——真核细胞基因工程的有力工具

从四方面评述病毒基因转移载体是真核细胞基因工程的有力工具:(1)逆转录病毒载体——基因治疗传统载体,(2)人类腺病毒载体——基因治疗新载体,(3)禽痘病毒载体和非复制性载体用于基因治疗及动物模型的潜力,(4)植物病毒基因转移载体。     

浅论计算机作为知识载体的作用

计算机作为新型知识载体可以减轻人类理解复杂思想的脑力负担,可以表达更复杂的思维过程,本文探讨计算机作为新型知识载体所能起到的作用,以及实现的方法。     

组织工程载体支架材料研究进展

在利用组织工程方法构建组织或器官替代物的研究中,载体支架材料是进行组织工程构建各因素中的关键环节.用于构建组织工程化组织或器官的载体支架材料,应具有必要的理化性质和生物学特性.组织工程常用载体支架材料主要包括天然材料、合成材料和复合材料.就常用组织工程载体支架材料优缺点进行综述,旨在为组织工程化组织或器官的构建提供参考.     

His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。     

五种重组人源IL-18突变子表达质粒的构建及其在BxPC-3细胞中的表达

目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功;(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体;(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.