Lea14基因原核表达载体的构建

Lea基因编码的LEA蛋白作为一种晚期胚胎丰富脱水保护蛋白,当植物处于逆境状态下时,其能够高水平的表达,通过降低其脱水的程度采达到抵御逆境的功能.为了进一步研究Lea14基因在逆境反应中的功能,本研究以拟南芥cDNA为模板,扩增出Lea14基因,再将Lea14基因克隆到原核表达载体pET-28a中,获得了Lea14基因的原核表达载体pET-28a-Lea14,测序结果表明:pET-28a-Lea载体构建成功,可用于后续蛋白表达研究工作.     

幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的　构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法　采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果　PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论　成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.     

瞬时表达比较马铃薯X病毒CP基因3种结构对RNA沉默的诱导效果

RNA沉默是植物抵御病毒侵染的一种防卫机制,病原来源的抗性（pathogen-derived resistance, PDR）被认为是通过RNA沉默起作用的,转化的核酸片段在基因组中的位置,长短和不同排列结构等均影响RNA沉默的效率,用全长马铃薯X病毒（PVX）CP基因构建非翻译的正义,反义和反向重复结构转基因的植物表达载体,     

Cre基因拼接及转基因细胞的构建

由于具有时间、组织和位点特异性,Cre重组酶介导的DNA重组己成为基因靶位操作的一个重要工具。本实验人工合成Cre基因片段,并将其准确拼接．然后在动物（猪）的成纤维细胞中表达,为接下来构建含Cre基因的转基因猪奠定基础。