抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

隐球菌抗原-胶体金免疫层析法在隐球菌病诊断中的优势分析

目的:探讨胶体金检测隐球菌荚膜多糖抗原对隐球菌病的诊断优势。方法:应用胶体金免疫层析法对1205例临床表现和影像学特征疑似隐球菌病患者进行检测,并通过跟踪调查分析,将胶体金抗原检测、组织病理检查、传统的镜检、培养法等进行比较,探讨胶体金检测隐球菌荚膜多糖抗原对隐球菌病诊断的优势。结果:胶体金免疫层析法检测阳性45例,其中44例经临床和其他检测确诊隐球菌病,诊断正确率97.7%,相比组织病理检查以及传统的镜检、培养法检出率均高,有统计学差异(P0.05)。且运用胶体金免疫层析法诊断隐球菌病患者因发现于疾病较早期,故预后相对较好。结论:胶体金免疫层析法检测隐球菌抗原可作为一种准确、快速的隐球菌病检测方法。     

人IFNγ／TNFβ杂交蛋白的初步纯化及其抗癌效应研究

采用国产的微孔玻璃珠吸附层析法分离纯化人干扰素γ／肿瘤坏死因子β重组杂交蛋白，它具有抗病毒和抗肿瘤的双重功能活性，其抗病毒活性为１．７×１０￣６ｕ／ｍｇ蛋白，细胞毒活性为１．４×１０￣６ｕ／ｍｇ蛋白。该杂交蛋白在体外对人宫颈癌细胞株（ＭＥ１８０），人胃癌细胞株（７９０１）和人肺癌细胞株（Ｇ６）均有明显的杀伤作用，并都显著地高于单一的ＩＦＮγ或ＴＮＦβ对这些肿瘤细胞的杀伤。本文还对γＴＮＦβ的抑瘤机理进行了初步探讨。     

肺癌血清标志物CK19单克隆抗体制备及初步应用

同肺癌相关的血清标志物CK19,其存在或量变不仅可以指示肿瘤性质,还可以指导肿瘤的诊断、分类、预后以及治疗。本次研究使用BALB/C小鼠进行免疫(使用CK19的重组抗原),血清滴度进入平台期后将骨髓瘤细胞与前期经过免疫的小鼠脾细胞融合,进一步将细胞克隆化,共得到6株杂交瘤细胞株(能持续稳定分泌抗CK19抗体)。对6株抗CK19的单抗株进行腹水诱导和扩大培养,并将诱导得到的腹水进行纯化,采用亲和层析法。为获得一个最灵敏的双抗体夹心单抗配对,将纯化后的单抗株做正交配对的筛选并制备酶标抗体。最终获得了最优配对:11E6+16A5-HRP。灵敏度分析的检测结果显示,该配对对CK19重组抗原的检测灵敏度为15.6ng/ml。     

论亲和层析技术的种类、应用及展望

色层分离是样品混合液中各组分在固定相和流动相之间的一类差别分离。其机理尽管多种多样,但总是与样品混合液在流经层析剂时溶质相对于溶剂前缘的阻滞现象有关。大多数生物大分子都有能与专一性很强的配基相结合的生物功能。这种利用生物大分子与各种配基的生物识别能力进行色层分离的技术便是近年来迅速发展的一门新的有效的色层分离法——亲和色层分离法[1]。介绍了有关亲和层析的种类和发展方向,为读者展现了一个崭新的亲和层析的世界。     

长效促红细胞生成素(LL-EPO)的放射性标记、分离纯化和鉴定

目的:探究长效促红细胞生成素(LL-EPO)的放射性标记和分离纯化的方法,同时对标记的LL-EPO进行鉴定。方法:分别采用氯胺-T法和改良的双相氯胺-T法对长效促红细胞生成素(LL-EPO)进行I125的标记,比较两种放射性标记的标记率。应用柱层析法和超速离心法纯化LL-EPO,并对纯化后的放化纯度以酸沉淀的方法进行鉴定,比较两种纯化方法的效果。结果:改良的双相氯胺-T法的放射性标记的标记率为89.2%,明显高于氯胺-T法的放射性标记的标记率31.0%,差异有统计学的意义(P0.05)。被放射性标记的LL-EPO在纯化后,超速离心法纯化与柱层析纯化后的放化纯度均99.0%,超速离心法纯化法的蛋白回收率为94.4%,明显高于柱层析纯化的蛋白回收率23.6%,差异有统计学的意义(P0.05)。结论:改良的双相氯胺-T法对长效促红细胞生成素(LL-EPO)进行放射性标记的标记率高,蛋白在放射性标记和分离纯化后的放化纯度较高,超速离心的纯化方法回收率更高,对长效促红细胞生成素(LL-EPO)放射性标记和分离纯化可为药代动力学的研究提供参考。     

人内脂素的原核表达和分离纯化

目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。     

超滤在蛋白质纯化中应用进展

超滤是一种非常实用的膜分离技术,在生物药研发领域,尤其是对分泌型表达的蛋白或者抗体类进行浓缩,配合亲和层析,离子交换层析或者疏水层析等纯化方法去除内毒素等方面应用非常广泛。本文仅对超滤技术在蛋白质分离纯化和去除内毒素方面的应用进行综述。     

重组NADP~+依赖甲酸脱氢酶的表达及纯化

利用甲酸脱氢酶(FDH)催化甲酸脱氢反应是酶促有机合成中重要的还原型烟酰胺辅酶再生系统。实验对E.coli BL21(DE3)/pET32/Bsp-FDH诱导表达NADP+依赖甲酸脱氢酶的表达条件进行了优化,在培养第4h加入0.4 mmol/l的IPTG、诱导时间8h、诱导温度30℃的诱导表达条件下,每升发酵液产甲酸脱氢酶170U。利用亲和层析法一步分离纯化重酶,纯化倍数为9.65、酶活回收达60.43%。实验为重组甲酸脱氢酶应用于有机合成中的NADPH再生奠定基础。     

浅谈塔原1号红花黄色素的综合提取及分离鉴定

目的提取塔原1号红花黄色素并分离鉴定其成分.方法采用溶剂提取、澄清剂除杂和柱层析法分离纯化红花黄色素,利用质谱和核磁共振谱确定分子结构.结果从塔原1号提取出的黄色素中分离得到羟基红花黄色素A.结论羟基红花黄色素A含量为95.09%,产率为0.33%.     

浅谈塔原1号红花黄色素的综合提取及分离鉴定

目的提取塔原1号红花黄色素并分离鉴定其成分。方法采用溶剂提取、澄清剂除杂和柱层析法分离纯化红花黄色素,利用质谱和核磁共振谱确定分子结构。结果从塔原1号提取出的黄色素中分离得到羟基红花黄色素A。结论羟基红花黄色素A含量为95.09%,产率为0.33%。     

靶向IL18-EGF融合蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性研究

人白介素-18(human interleukin 18,hIL18)基因与表皮生长因子受体干扰序列(EGFloop C sequence,EGF)构建IL18-EGF融合基因,利pET32a/E.coli BL21(DE3)表达IL18-EGF融合基因,通过纯化获得有活性的靶向的IL18-EGF融合蛋白,并进行体外细胞试验评价IL18-EGF融合蛋白的抗肿瘤活性.结果表明IL18-EGF融合蛋白能促进人PBMNC的增殖,诱导KG-1细胞分泌IFN-γ、促进肿瘤抗原诱导的B细胞、NK及其CD4+T细胞的活化.     

分离提取马蔺子中的化合物

目的:分离提取马蔺子中的活性化合物。方法:使用硅胶柱层析梯度洗脱分离化合物,制备型高效液相进一步纯化化合物。结果:从马蔺子中首次分离出白藜芦醇四聚体(r-2-viniferin)和白藜芦醇二聚体(trans-ε-viniferin)。马蔺子是鸢尾科植物马蔺的种子,具有清热,利湿,止血,解毒。治黄疸,泻痢,吐血,衄血,血崩,白带,喉痹,痈肿等作用[1,2]。本文使用硅胶柱层析从马蔺子中分离出了白藜芦醇四聚体和二聚体,制备型高效液相纯化这两种化合物,结合液相质谱和核磁共振解析出其化合物的结构。之前很多研究已经发现这两种化合物存在葡萄科等植物中[3],这是首次在马蔺子中提取出来。     

预印本自组织同行评议的通证激励机制研究

[目的]将通证激励机制应用于预印本自组织同行评议的框架之中,解决该同行评议模式缺乏激励机制的问题.[方法]将"通证经济"的理念与激励机制相结合,解决预印本系统中自组织同行评议的激励问题,并通过案例分析方法,以Steemit为参考模式,研究其通证激励机制的原理与特点.[结果]通证激励模式下的预印本系统是一种建立在区块链技...     

重组FLAG标签的融合表达纯化及亲和常数的测定

构建了三种融合标签FLAG1(DYKDDDDK)、FLAG2(DYKDYKYK)和FLAG3(DYKGGGYK)的原核表达质粒pGEX-2t-His-NSH2-FLAG,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达并纯化重组蛋白GST-His-NSH2-FLAG。生物信息学分析表明FLAG1的亲水性和抗原性较强,FLAG2次之,FLAG3最弱。Western blotting分析表明单抗M2能够识别此三种FLAG融合蛋白。非竞争性酶免疫法测得FLAG1、FLAG2和FLAG3结合单抗M2的亲和常数分别为0.077μM,0.102μM和0.126μM。相关工作为在多肽芯片上应用FLAG标签进行蛋白质相互作用的检测奠定了一定的基础。     

协同治理视角下农村留守老人信息共享机制研究

[目的/意义]旨在为政府建立留守老人关爱体系提供参考.[方法/过程]阐述协同治理理论,为农村留守老人信息共享机制建立提供新思路.通过分析多主体参与农村留守老人信息共享建设经验,指出制约留守老人信息共享机制建立的主要问题.[结果/结论]提出要利用移动互联网、云计算、大数据、物联网等信息技术,从数据资源层、数据共享平台的建...     

N,N‘—二羧甲基联苯胺纸色谱法萃取和分离稀土元素的研究

用反相纸层析法研究了Ｎ,Ｎ’－二羧甲基联苯胺在盐酸和高氯酸体系中对１１种稀土元素的萃取和分离性能。结果表明：固定相在高氯酸体系中的萃取能力较盐酸体系中强。由此,根据Ｒｆ值的大小不同,选择适当酸度的展开剂,可对某些混合稀土离子溶液进行分离。     

人纤维蛋白原α、β、γ基因的克隆和表达研究

纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是凝血因子I,在体内经凝血酶(thrombin)作用下转变为纤维蛋白,发挥其凝血和止血功能。本研究通过反转录的方法,从杭州人肝脏中成功克隆到人纤维蛋白原α、β、γ基因,并将其定向插入原核表达载体中,人纤维蛋白原α、β、γ基因经成功诱导获得表达,进一步纯化获得人纤维蛋白原α、β、γ蛋白。序列经比对,与Genbank上公布的序列同源性达97%～99%,这项研究为我国汉族人群纤维蛋白原基因核苷酸多态性和单倍型研究发挥一定作用,并且对纤维蛋白封闭剂的开发,提供了重要的产业化实验依据和技术基础。     

信息安全事件对信息安全行为的修正效应研究

[目的/意义]旨在从宏观的信息安全行为修正角度为防御信息安全威胁提供参考.[方法/过程]以行为修正理论为指导,应用经验模态分解与BP断点检验法,构建信息安全行为修正效应模型.根据模型中EMD分解与重组过程,得到受信息安全事件修正的信息安全行为时间序列,最后用BP断点分析行为修正的结构断点.[结果/结论]以Petya病毒...     

蔬菜色素的提取与分离

本文以新鲜蔬菜中的菠菜为实验材料,运用吸附层析法原理,以氧化铝、碳酸钙、蔗糖为吸附剂,主要研究从新鲜蔬菜中提取叶绿素并分离色素的实验。叶绿体中四种主要光合色素能溶入中性有机溶剂,根据这个特性可将它们提取出来,并对提取液进行分离,以便进行进一步分析研究。