一种产自出芽短梗霉的胞外脂肪酶的分离纯化和酶学性质研究（英文）

目的:从出芽短梗霉所产的脂肪酶中筛选具有独特酶学性质的脂肪酶。创新点:发现了一种新的产自出芽短梗霉的脂肪酶,并对其酶学性质进行了研究。方法:通过超滤和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析柱方法对脂肪酶进行纯化,随后分别用对硝基酚邻酸盐(pN PP)法对纯化得到的脂肪酶进行了酶学性质研究,并用酸碱中和法检测了脂肪酶对可食用油脂的水解。结论:对分离纯化得到的脂肪酶的酶学性质研究表明,该酶的分子量为39.5 kDa,具有一个亚基,为胞外酶。最佳催化温度为40°C,最佳催化pH为7。该酶对一些有机溶剂、表面活性剂和离子具有优良的抗性。此外,它可以水解常见的食用油。这些良好的特性使该脂肪酶有可能被应用于洗涤剂生产、生物柴油合成和食品制造等一些工业领域。     

Purification and Biochemical Characterization of D-hydantoinase and D-N-carbamoylase from Burkholderia cepecia, njut01

Hydantoinase and N-carbamoylase play important roles in the production of optically pure amino acids from racemic 5-monosubstituted hydantoins. In this report, hydantoinase and the N-carbamoylase from Burkholderia cepecia, njut01 were purified to homogeneity by chromatography (Pharmacia Explorer 100 system). The substrate specificity, enantioselectivity, pH dependence of activity and temperature stability of the activity were characterized. The results show that the hydantoinase and N-carbamoylase induced from Burkholderia cepecia, njut01 are both strict D-stereo selective enzymes. They both hydrolyze substrates with side chains containing aliphatic and aromatic residues with higher activity and affinity toward aromatic than aliphatic substituted substrates. The hydantoinase is a homotetramer with subtmit molecular weight near 52,000 and is active between pH 6.5 and 10 with an optimum near pH 9.0. The enzyme is active at temperatures up to 60~C, however, it appears instable at higher temperatures. The subunit molecular weight of N-carbamoylase is about 35KD. The N-carbamoylase is active in the pH range from 6.0 to 9.5. The optira-pH is 7.2 and the optinfizing bioconversion temperature of the N-carbamyolase is 52℃.     

黄粉虫几丁质酶的纯化及性质

以黄粉虫为材料,采用盐析、亲和柱层析、Sephadex G-100分子筛及DE-52离子交换柱层析等制得纯化倍数约33倍,回收率为38%,比活力为294.7U/mg的几丁质酶制剂.在此基础上,以胶体几丁质为底物,考察黄粉虫几丁质酶的性质.结果表明：该酶催化水解几丁质的Km值为71.4mg/L;酶的最适pH值是6.0;最适温度为45℃左右;酶在pH 5.0～7.0,45℃以下酶活力稳定性较好.Na＋和K＋对酶活无影响;Ca2＋、Cu2＋对酶活起先扬后抑作用;Mn2＋、Mg2＋、Fe3＋、Al3＋对该酶活力均具有不同程度的抑制作用.     

泥蚶肌肉凝集素的分离纯化及部分性质

泥蚶肌肉提取液经硫酸铵二步分级沉淀后,再经DEAE-Sepharose（Fast Flow）离子交换和SephacrylS-200-HR分子筛层析,从中分离纯化得到泥蚶肌肉凝集素．经测定,该凝集素分子量约为238kDa,为单个亚基的蛋白质,其相对分子量为60kDa,分子中含3．27％的糖．在氨基酸组成中,谷氨酸（Glu）含量最高,其次是丝氨酸（Ser）和天门冬氨酸（Asp）．泥蚶肌肉凝集素对人和动物红细胞均有凝集作用,其中对兔的红细跑的凝集活性最高．该凝集素对兔的红细胞的凝集活性不被测试的10种浓度为200mmol·L^-1的糖所抑制．pH6．0～7．0时具有较强活性;热稳定性较高,在30-50℃的温度范围内对兔红细胞的凝集仍保持原有活性,60℃以后活力下降;凝集活性依赖于Ca^2＋．     

木瓜蛋白酶的分离纯化——关于食品生物化学综合设计性实验的构思

针对食品生物化学课的实际情况，提出了开设综合设计性实验的思路，初步给出了木瓜蛋白酶分离纯化实验的内容。旨在为今后的实验提供理论指导．     

骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的表达与纯化

骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein,BMP-2）具有多种生物活性,有潜在的药用价值.为探索利用基因工程技术重组BMP-2并在大肠杆菌表达系统表达的可行性.在大肠杆菌中重组和筛选BMp-2基因,SDS-PAGE电泳分析,显示外源蛋白带在相对分子量约12kD处,以离子交换层析DEAE和分子筛纯化蛋白,缓慢复性并在C2C12细胞内检测到其蛋白活性.     

黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究

纯化了黑曲霉Aspergillus niger FJL0801糖化酶,并对其酶学性质进行研究.粗酶液经纯化后,较粗酶液纯化了38.42倍,酶活回收率达到17.45%.酶最适作用温度为60℃;最适反应pH值为4.5;在60℃下,保温2 h后,相对酶活42%±2.8%.在pH4.5,60℃下,作用时间在60 min以内,其酶活保存89%±2.56%;其酶学性质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,该酶比较适合应用于淀粉糖化工业.     

来自链霉菌属的阿魏酸酯酶的分离纯化、理化性质

通过盐析透析、离了层析、疏水层析,对链霉菌属发酵液中的阿魏酸酯酶（FAE）进行分离纯化。并进行酶学性质研究。得出的阿魏酸酯酶的纯化倍数为2．67,回收率为55．8％,酶分子约为30kDa。其最适反应pH约为6．0,最适温度约为50℃,金属离子Cu^2＋和Zn^2＋对阿魏酸酯酶酶活力均有明显的抑制作用,而Mg^2＋、Fe^2＋、Ca^2＋、Na^＋和Mn^2＋对酶的活性均有一定的促进作用。     

人类睾丸凋亡相关基因蛋白(TSARG2)在大肠杆菌中的表达和纯化

目的获得重组TsARG2基因蛋白,为进一步研究其功能和制备特异抗体奠定基础.方法根据已报道的TsARG2基因序列,采用RT-PCR的方法获得TsARG2基因.将所得的PCR产物插入原核表达载体pQE30中,得重组质粒(pQE/TSARG2)并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有六个组氨酸的融合蛋白,采用镍固定金属亲和层析法纯化.结果序列分析表明TSARG2基因成熟肽编码区含有918bp,编码305个氨基酸;与GenBank(AY040204)中已报道的TSARG2分离物的核苷酸序列有100%同源性.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的66%,分子质量约为35kDa.经Ni2 -NTAagarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论在大肠杆菌中获得了TsARG2基因蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础.     

耐辐射异常球菌渗透诱导蛋白基因osmC的克隆表达纯化及生物信息学分析

耐辐射异常球菌(D.radiodurans R1)osmC基因(DR_1538)编码的渗透诱导胁迫蛋白是一种在氧化胁迫中起重要作用的过氧化物酶.用PCR方法从耐辐射异常球菌中扩增出osmC基因的全长序列(441bp),采用原核表达系统对其进行表达纯化,获得了分子量大小约为18.7 kDa的带有His标签的融合蛋白.利用在线网站对OsmC蛋白的生物信息学分析,结果表明:OsmC蛋白由146个氨基酸组成,理论等电点为5.81,为亲水性蛋白;二级结构主要是由α-螺旋及不规则卷曲组成.OsmC蛋白的纯化及生物信息学分析为后续深入研究其功能奠定了基础.     

虫生真菌毒素的性质与分离研究进展

虫生真菌是一类重要的生防真菌,生产中广泛应用.现对虫生真菌的界定、侵染机制以及对已发现的虫生真菌毒素的性质、结构和分离纯化方法进行了综述.