神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的:探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定.方法:分别取孕14～16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养,用光学显微镜观察NSCs的生长情况,并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达,经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测.结果:①培养出来的细胞可以扩增生长;②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性;③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后,免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性.结论:采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs.     

大鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的:探讨影响大鼠胚胎成纤维细胞(REF)分离和培养的一些因素,以建立稳定的REF培养体系.方法:取SD大鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对REF的生长形态、生长曲线进行观察,以探讨不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对REF分离及培养的影响,并对其进行免疫细胞化学鉴定.结果:13.5d 胎龄鼠胚的REF分离效果优于10.5d、18.5d 胎龄鼠胚;REF在体外为贴壁生长型细胞,第三代细胞增殖旺盛;并表达波形蛋白(vimentin)、层黏连蛋白(laminin,LN)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白.结论:13.5d 胎龄SD大鼠REF以H-DMEM做培养基,在第3代增殖旺盛,合成多种细胞外基质,最适宜作胚胎干细胞或其它悬浮培养细胞的饲养层.     

大鼠脑室下区神经干细胞的分离培养与分化

目的：从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞．观察其生长、增殖及分化．方法：采取无血清培养和单细胞克隆技术．采用原代贴壁及传代悬浮方法．培养获得细胞克隆．利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞．结果：从新生SD大鼠脑室下区分离的组织，经原代和传代培养均可形成细胞克隆．且具有增殖能力．原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase．NSE)抗原呈阳性．神经干细胞可分化为神经元．结论：用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力．属于中枢神经系统的干细胞．     

胚胎干细胞的鉴定方法研究进展

胚胎干细胞的鉴定工作对于研究和利用胚胎干细胞具有重大的意义.本文综述了利用胚胎干细胞的形态特征、生长特性、染色体结构、多能性和全能性,以及免疫学方法鉴定胚胎干细胞的研究情况,并介绍了几种常用的鉴定过程.     

用密度梯度离心法富集源于小鼠胚胎干细胞的运动神经元样细胞前体

目的:我们的目标是从源于胚胎体(EBs)的小鼠胚胎干细胞(mESCs)中分离运动神经元样细胞前体(MNLCPs),以用于发展针对运动神经元疾病的药物筛选试验和移植疗法.天然Shh蛋白(或Shh通路激动剂)和维甲酸诱导的胚胎体中,MNLCPs和未分化细胞的含量是不确定的.如果不把未分化的细胞从细胞培养中充分去除,其可能会干涉药物筛选试验或在移植后增生.我们开发了一种以密度梯度离心法为基础的富集MNLCPs的方法.方法:我们用Wichterle等人2008年改进的方法,将mESCs( HBG3:eGFP:HB9)扩大和分化.通过化学和酶学的无研磨处理,含有绿色荧光蛋白的MNLCPs和未分化细胞的胚胎体被小心轻轻地离解成单细胞.利用OptiprepTM8％～20％逐步梯度离心技术将MNLCPs回收.拥有绿色荧光蛋白的MNLCPs的含量由流式细胞仪检测.结果:我们的结果表明,在胚胎体形成前,mESCs在明胶包被的培养板上生长,其分化为MNLCPs的能力减少.比较mESCs在明胶,明胶与PMEFs,及PMEFs包被的培养板上的生长发现,mESCs在PMEFs包被的培养板上产生含绿色荧光蛋白的MNLCPs的得率为(54.1±11.0)％(x-±s;n=12),在明胶包被的培养板上的得率为(2.8±1.1)％(x-±s;n=9).用密度梯度离心法获得的含绿色荧光蛋白的MNLCPs的平均含量为(87.7±5.5)％(x-±s;n=3).结论:我们的数据表明,不使用细胞分选器,无研磨解离和密度梯度离心法也能用于富集具有高存活率的MNLCPs.有必要对MNLCPs在体外、体内和表型上进行进一步的生理学意义(如神经轴突的生长及形成神经肌肉接头的能力)上的鉴定.     

胚胎干细胞的鉴定方法研究进展

胚胎干细胞的鉴定工作对于研究和利用胚胎干细胞具有重大的意义。本文综述了利用胚胎干细胞的形态特征、生长特性、染色体结构、多能性和全能性，以及免疫学方法鉴定胚胎干细胞的研究情况，并介绍了几种常用的鉴定过程。     

神奇的干细胞

干细胞(Stem cell)是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,可在生命生长发育中起“主干”作用的原始细胞。它的神奇之处在于:可诱导分化成为全身各种类型细胞,具有自我更新能力(Self-renewing),能够产生高度分化功能的细胞,由此带来基因治疗、器官移植等革命性进展。 1.干细胞的种类 干细胞按照生存阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。 (1)胚胎干细胞(Embryonic StemCell,ES细胞) 当受精卵分裂发育成囊胚时,内层细胞团(Inner Cell Mass)的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性,可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。早在1970年ManinEvans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。     

胚胎干细胞的定向诱导分化及应用

胚胎干细胞是从早期胚胎内细胞团分离培养出来的具有发育全能性或多能性的干细胞,具有多向分化潜能和自我更新的特性。胚胎干细胞可以定向诱导分化生产组织和细胞,可为细胞移植提供无免疫原性的材料,为难以治愈的疾病的细胞移植治疗提供可能。本文介绍了胚胎干细胞的诱导分化方法和应用前景。     

"全能细胞"定向重造心脑肾

人类的大部分器官本身不是由一种细胞组成的,如果从现有的器官中分离细胞进行器官复制,那么就需要分离器官中的各种功能不同的细胞,这将是个非常困难的工作.于是,人们将眼光投向了胚胎.胚胎的生长是从一个细胞开始的,然后细胞分裂,细胞功能分化,形成有着各种功能的细胞.胚胎干细胞是一种全能细胞,有能力形成人体200多种细胞中的任何一种.     

鲟鱼胚胎细胞分离培养的初步研究

研究了鲟鱼胚胎细胞的体外分离培养方法,并比较了体外培养液及添加血清浓度等条件,初步探讨了鲟鱼胚胎培养技术.结果表明,采用机械分离法,受精后48h的胚胎可获得较多的细胞,胚胎细胞在28℃,DMEM+10%胎牛血清培养液及无CO2条件下,可进行贴壁生长.     

培养抗病毒细胞的新方法

医生已经能够用骨髓移植的方法恢复病人的免疫系统,但必须要骨髓相匹配,并且需要好几个月才能生成数量很少的细胞,这使衰弱的病人仍会有被病毒攻击的危险……最近,科学家发现一种能够大量培养抗病毒细胞的新方法,这可能会给癌症和艾滋病治疗带来新的希望。动物和人的抗病毒细胞叫做T细胞,能在体内巡逻,吞噬已经感染和发生癌变的细胞,但是化疗和放射性疗法却破坏了这种细胞。而新的方法能够培养病人恢复正常免疫力所需要的大量T细胞。实验中的T细胞是由老鼠胚胎干细胞培养的,胚胎干细胞能够形成胚胎生长的各种组织。研究人员已经能够把老鼠…     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定

目的:探讨成体大鼠的间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养,为其应用提供理论依据.方法:用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,对分离的细胞进行碱性磷酸酶的检测.结果:取得较高纯度的成体大鼠骨髓MSCs,并保持细胞的活性;成体大鼠骨髓MSCs在体外培养中为贴壁生长的单个核球形细胞,培养3～4d后开始大量增殖,并形成形态均一的细胞增殖集群,对分离后所获得的细胞进行AKP染色为强阳性.结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的MSCs,是实用、便捷和可行的方法.并且在体外培养条件下能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,可以成为进一步进行细胞扩增或其他实际应用的基础.     

生物热点测试题

干细胞 材料：一般地说，干细胞是指尚未分化发育，能生成 各种组织器官的起源细胞。它经培养可进行不定向分化 并产生特化细胞。在多种组织和器官（如上皮组织、血 液、生殖系统、神经系统、肝脏、胰腺、肌肉等）中都存在 干细胞。干细胞大致可分为胚胎（全能）干细胞、组织（多 能）干细胞和专能干细胞。多能干细胞在器官移植、组织 修复及神经性疾病的治疗等方面有巨大的应用价值和 重大的理论研究意义。 测试题 １．当由神经干细胞分化形成的神经元细胞的神经 纤维受到刺激时，接受刺激部位的电荷变化是（） A…     

胚胎干细胞与神经系统疾病的治疗

胚胎干细胞是来源于胚胎囊胚阶段的内细胞团细胞,是能分化成个体所有组织和细胞类型的全能细胞.胚胎干细胞经过诱导后,可以分化成神经细胞前体,置换中枢神经系统疾病病损和功能障碍的细胞,发挥其治疗作用.同时,胚胎干细胞也可以作为基因治疗的载体,使外源基因能在植入的胚胎干细胞表达,达到治疗的目的.胚胎干细胞在治疗中枢神经系统疾病中显示出巨大的应用前景.     

人参皂甙Rg1通过miRNA-124途径促进小鼠脂肪干细胞向神经样细胞分化（英文）

目的:研究人参皂甙Rg1对小鼠脂肪干细胞神经样分化的促进作用,并初步探讨其作用机理。创新点:证明了人参皂甙Rg1可以通过mi RNA-124途径促进脂肪干细胞的神经样分化。方法:从BALB/c小鼠腹股沟和睾丸脂肪垫处分离培养脂肪干细胞,利用流式细胞仪检测分离的脂肪干细胞纯度。试验分为以下五组:磷酸缓冲盐溶液(PBS)组、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)组、IBMX+Rg1低剂量组、IBMX+Rg1中剂量组和IBMX+Rg1高剂量组。用细胞免疫组化方法检测了脂肪干细胞向神经样细胞的分化效率,用荧光定量聚合酶链式反应(qP CR)方法检测mi RNA-124的表达变化,用免疫印迹的方法检测巢蛋白(nestin)、βIII-微管蛋白(βIII-tubulin)及羧基端小结构域磷酸酶1(SCP1)的表达水平。结论:免疫组化结果显示,IBMX可以成功诱导小鼠脂肪干细胞向神经样细胞的分化;免疫印迹结果显示,Rg1可以显著提高神经样细胞标记蛋白的表达水平;荧光定量PCR结果显示,Rg1可以促进miRNA-124的表达量,进而降解神经分化抑制因子SCP1的表达,促进脂肪干细胞的神经样分化效率。     

神经干细胞的发育分化及其对脑损伤的修复作用

成年动物能够产生新细胞的机制靠的就是干细胞(ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ)。长期以来 ,人们一直认为成年动物脑内没有这种干细胞 ,如人脑内的神经细胞是终生存活的细胞 ,偶然遇到损伤造成脑内失去神经细胞的现象是永久性的 ,只能由神经胶质细胞所充填 ,其原因主要是成熟的神经元不能再分裂。1　胚胎脑神经发育的启示对中枢神经系统内存在干细胞的认识最早是从研究胚胎发育开始的。应用体外亲代分析研究证实 ,脑组织所含的神经元和神经胶质细胞均来自多潜能的前体细胞 ,例如Ｔｅｍｐｌｅ从 13天大鼠胚胎脑的隔区可取出少量细胞进行单个培养 ,观察到…     

尼克酰胺与exendin-4诱导胰腺干细胞向β细胞定向分化研究

目的体外分离胰腺干细胞,选择最佳培养条件探索胰腺干细胞在体外环境下向β细胞的分化情况.方法取SD大鼠胰腺组织,胶原酶消化,密度梯度离心获得纯化的胰腺导管上皮细胞.采用分步诱导法诱导胰腺导管上皮细胞向胰岛β细胞分化;用胰岛素释放实验检测胰岛功能,免疫荧光法检测nestin,PDX-1,CK-19,CK-20胰岛素及胰高血糖素等的表达.结果胰腺消化培养6～12h,可看到胰腺导管上皮细胞贴壁生长,通过4步诱导培养,nestin阳性细胞快速生长,并可分泌胰岛素.结论体外分离的成人胰岛前体细胞,在诱导因子的作用下,胰腺干细胞可定向分化为β细胞,有望应用于糖尿病的治疗.     

浅谈干细胞的应用

由于干细胞具有特定的分化潜能,表现出了全能性、多能性和专能性,近几年来世界各国科学家对干细胞的临床应用展开研究,已取得很大的进展。主要成果有:1.胚胎干细胞育出心脏组织。以色列工学院最近宣布,科学家首次从胚胎干细胞中培养出人类心脏组织。他们培育出的心脏组织,可以自然跳动,并且有新生心脏组织的电特性和机械性。过去一直认为当心脏细胞受到损害后,不     

姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用

目的:观察姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞(简称MCF-7细胞)凋亡的诱导作用.方法:不同浓度姜黄素(0.048,0.056,0.064,0.072,0.080μmol/L)作用于MCF-7细胞24h,采用CCK-8法检测其对MCF-7细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡结果.结果:经上述不同浓度姜黄素诱导24h后,MCF-7细胞生长抑制率分别为17%、28%、48%、50%及55%;琼脂糖凝胶电泳显示出DNA梯形条带.结论:姜黄素对体外培养MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用并可诱导其细胞凋亡.     

大鼠睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。