高效疏水色谱法对还原变性核糖核酸酶的折叠研究

用高效疏水色谱(HPHIC)研究了还原变性核糖核酸酶(RNase A)在HIC上流动相中脲浓度、流动相流速及蛋白浓度对还原变性RNase A复性的影响.发现还原变性RNase A在脲浓度为2.0mol/L时,复性效率可达80%以上.在蛋白浓度为20 mg/mL时,复性效率可达86.4%,当蛋白浓度过高时,在HIC上因聚集严重导致复性效率降低.流动相的流速对复性影响不大.     

MIP融合蛋白包涵体复性的初探

对胰岛素类似物MIP(B27赖氨酸去三肽胰岛素前体)融合蛋白包涵体的复性方法进行初步的比较,探讨了不同方法对MIP融合蛋白包涵体复性效率的影响。采用大肠杆菌IMPACT-TWIN(Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag-Two Intein)表达系统表达MIP融合蛋白。通过透析法、稀释法和凝胶过滤对MIP融合蛋白包涵体进行复性研究,经几丁柱亲和纯化后获得复性的MIP蛋白前体。采用12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及Bradford法测定其浓度并计算复性效率及剪切效率。实验结果表明:凝胶过滤法复性效率较透析法和稀释法高,并且能够获得较多的具剪切活性的可溶性蛋白,其复性效率为65%,剪切效率为5.1%。通过对MIP融合蛋白包涵体3种复性方法的比较,为MIP融合蛋白包含体复性方法开辟了新的途径,并为大量制备可溶性的MIP融合蛋白提供实验依据和理论基础。     

棒叶落地生根叶片中抗坏血酸-谷胱甘肽循环对干旱与复水的响应

棒叶落地生根植株干旱20d与70d,并对干旱70d的植株进行复水处理,测定叶片中抗坏血酸过氧化物酶（APX）、谷胱甘肽还原酶（GR）与脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）的活性,以及抗坏血酸（AsA）与谷胱甘肽（GSH）含量的变化。结果表明,随着干旱进行,APX与DHAR活性均显著增加,GR活性先增加后降低;AsA、脱氢抗坏血酸（DHA）含量与AsA／DHA比值均显著增加,GSH含量增加但不显著,氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量显著增加,GSH／GSSG比值增加但不显著。复水后叶片中APX、DHAR活性显著低于干旱70d时,GR活性高于干旱70d时;AsA、DHA含量与AsA／DHA比值显著低于干旱70d时,GSH、GSSG含量与GSH／GSSG比值低于干旱70d时,但差异不显著。可见,在棒叶落地生根遭遇干旱时,AsA—GSH循环系统清除活性氧的能力提高。     

短跑运动对肝脏和骨骼肌中谷胱甘肽表达的影响

急性无氧运动促进氧化应激。然而,之前的研究指出高强度短跑训练能减弱氧化应激效应。假设还原型谷胱甘肽(GSH)的上调在防护短跑训练中的氧化应激起重要作用。33只大鼠随机分为3组:对照组;急性运动组和训练组。训练组大鼠参与高强度训练,每周2天,共12周的跑台运动。在训练期结束,训练组和急性运动组大鼠进行一次高强度短跑。对照组大鼠不运动。用分光光度计测定比目鱼肌和趾长伸肌(EDL)以及肝脏的GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度。与对照组相比,急性运动后,比目鱼肌和EDL的GSH浓度显著下降,同时,两组肌肉中的GSSG浓度明显增加。12周短跑训练后,与对照组相比,两组肌肉中的GSH没有显著差异。同时肌肉中GSSG浓度显著增加。数据显示,由于高强度短跑导致骨骼肌恢复GSH水平。但是,不能说明GSH的上调是由肝脏输入的。     

质量源于设计在白介素-2氧化复性中的应用

目的:阐述质量源于设计理念应用于药品工艺开发的具体做法。方法:将Qb D理念应用于白介素-2(IL-2)氧化复性中,使用实验设计(DOE)的方法,以天然结构复性收率为关键质量属性,研究优化了IL-2(Ser125和Cys125)氧化复性工艺的关键参数及其水平。结果:在设计空间内,复性后天然结构IL-2(Ser125和Cys125)的最优回收率分别>90%和>70%,聚合体含量不高于6%。在此基础上,对IL-2(Cys125)优化的工艺参数进行放大验证,试验结果基本与预期相符。结论:Qb D理念可应用于IL-2氧化复性的工艺开发。     

甲醛捕捉剂效率的研究

制备甲醛捕捉剂乙烯脲,并研究其在不同条件下清除甲醛的效率.实验中以乙二胺和尿素在回流条件下反应制备了乙烯脲,采用高温蒸发冷凝结晶的方法对制得的固体产物提纯.对提纯后的产物进行熔点测试,乙烯脲的理论熔点133℃,测得产物的熔程132—133℃,与理论值相仿;对产物进行红外光谱分析,谱图表明产物确系为乙烯脲.实验对该产物进行了模拟除醛效率测试,测试发现,常温下质量百分浓度为8%的乙烯脲在4h内对甲醛吸收率为86.5%,效果明显.     

植物鲜样中游离氨基酸提取方法的比较

为了对比不同提取液、温度、时间和纯化试剂对植物鲜样中各游离氨基酸提取效率的影响,以油菜鲜叶为例进行加标回收试验方法,通过氨基酸分析仪PF柱进行标准方法分析测定。结果表明:4种不同提取剂提取油菜鲜叶中游离氨基酸,水、0.1 mol/L盐酸和5%磺基水杨酸的提取效果都优于80%乙醇,以水提取后的颜色最为清亮,适于氨基酸分析仪直接分析;4℃时17种氨基酸平均回收率94.23%,高于80℃和100℃时的88.4%和87.4%,17种氨基酸平均回收率除缬氨酸外,其余氨基酸从1~24 h没有显著变化;80%乙醇优于5%磺基水杨酸,但两者整体回收率都较未纯化前有所下降。采用优化后的提取方法测定油菜幼苗的游离氨基酸含量,发现能有效筛选出抗逆品种。     

解脲脲原体感染及药物敏感性分析

目的:了解泌尿生殖道解脲脲原体感染现状及对10种抗生素耐药情况.指导临床合理用药.方法:应用支原体鉴定及药敏试剂盒检测304例泌尿系感染患者,同时测定其对常用抗生素的药物敏感性.结果:解脲脲原体感染的阳性率为136株(44.7%).男性解脲脲原体阳性10例(22.22%,10/45),女性解脲脲原体阳性126例(46.84%,126/269).药敏试验结果表现不同的敏感性.结论:泌尿生殖道支原体对所分析的各种抗生素都存在不同程度的耐药.在进行解脲脲原体感染治疗之前应进行药物敏感试验.     

微柱亲水交互作用色谱法分离分析水样中的微囊藻毒素

采用微柱亲水交互作用色谱法对微囊藻毒素MC-LR、MC-YR、MC-RR进行分析,考察流动相中乙腈含量、缓冲溶液浓度、流速等对其色谱行为的影响。结果表明:以乙腈-醋酸铵(10 mmol/L,pH 6.8)为流动相,3种微囊藻毒素可在8min内实现基线分离,加标回收率≥86.2%,RSD%≤2.3%,检出限0.10 mg/L(S/N=3),与传统的反相液相色谱相比,具有分析速度快、流动相组成简单且消耗少等优势。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的摇瓶发酵工艺研究

本文首先从几种常用的细菌培养基中筛选适合工程菌DH5α/pDH表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）的培养基,其次,对摇瓶培养条件进行了初步优化,着重研究了培养温度、诱导时机,诱导维持时间,接种量对E.coli生长和rhGM-CSF表达的影响。在优化条件下,rhGM-CSF的表达量为26.3%。