克百威单克隆抗体的制备及鉴定

本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB／CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水．腹水效价达10^-6～10^-7。琼脂双扩试验表明各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白均为IgG2a亚类。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,并测定抗体蛋白含量为3～8mg／mL;用SDS—PAGE进行纯度鉴定,电泳图谱均显示了IgG抗体及其重链和轻链条带,分离的抗体纯度在90％以上。对纯化的单抗5E2进一步做交叉反应试验,与其他氨基甲酸酯类杀虫剂残杀威、速灭威、灭多威、甲奈威、异丙威、仲丁威的交叉反应率分别为7．2％、4．5％、2．8％、7．9％、9．5％、8．9％,结果表明单抗5E2有较好的特异性。     

抗CT单克隆抗体的某些特点及其应用

本文对5种分泌抗霍乱肠毒素单克隆抗体的生物学性质作了较详细的研究。研究表明,4株抗CT-McAb细胞株经鉴定3 A_(10)株为抗AB单克隆抗体,而3H_7、3C_7、1F_8为抗B亚单位单克隆抗体。4株细胞株对数增殖期的群体倍增时间为19～21h。双扩散证明,上述单抗为IgG_1型抗体。腹水抗体经-30℃贮存5年,仍保持原有的各种抗体特性。细胞通过体外连续传代30代以上,复经液氮冻存2年后,仍能恒定地分泌单克隆抗体。腹水抗体经硫酸铵纯化,IgG_1纯度经PAGE电泳分离及CS-910双波长薄层扫描技术,并以电子计算机算出IgG_1纯度为95.063％,酶标记抗体对CT的检测具有较高的特异性和敏感性。     

单克隆抗体制备技术的改进

鉴于血管内皮细胞生长因子受体(KDR)的重要生物学作用,我们采用杂交瘤技术制备能稳定分泌抗KDR单克隆抗体的杂交瘤细胞。本文就抗KDR单克隆抗体制备过程中所涉及的技术改进作一总结。     

人甲胎蛋白基因的克隆和表达

目的 构建表达人甲胎蛋白(AFP)的重组质粒，并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 用PCR方法从人胎肝组织中扩增AFP基因片断，将其转入原核载体质粒pCEMEX-1，在大肠杆菌DH5α中克隆，并在BL21DE3中表达。结果 重组质粒pCEMEX-AFP的AFP基因序列经分析与GenRank公布序列相符，各表达的蛋白经Western Blot检测有抗原性。结论 基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效的肿瘤抗原。     

美研究发现抗多种流感病毒人单克隆抗体

美国研究人员说,他们发现了能中和多种流感病毒毒株的人单克隆抗体。这些抗体由单个B淋巴细胞分泌合成,可中和的流感病毒包括HSN1型高致病性禽流感病毒和季节性流感病毒,将来在此研究基础上有望开发出高效流感疫苗。组成流感病毒的血凝素蛋白共有16种亚型,他们发现的人单克隆抗体能中和其中9种,除了目前已知的4种禽流感病毒和季节性流感病毒,还包括造成1918年西班牙大流感的H1N1型流感病毒。     

抗诺氟沙星单克隆抗体的制备及其性质的研究

为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。     

环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB／c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1：1．28×10^3,单抗腹水效价达1：1．024×10^6,IC50为68．31ng／mL,属于IgM型,轻链kappa,CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。     

基于纳米材料构建甲胎蛋白免疫传感器的研究与应用

人体血清中甲胎蛋白(AFP)含量已作为肝癌检测的一项重要指标。利用生物传感技术检测人体血清中的AFP,已受到广泛的研究和应用。根据不同纳米材料的特性,综述了几种常见纳米材料构建的甲胎蛋白免疫传感器的研究及应用进展,为科学研究以及临床检测甲胎蛋白提供了一定的参考价值。     

单克隆抗体MC3用于大肠癌和腺瘤的免疫组织化学研究及其预后意义

用单克隆抗体MC_3在福尔马林固定的48例大肠癌、31例癌变腺瘤、42例伴有不典型增生腺瘤、40例腺瘤、13例息肉以及48例正常肠粘膜组织切片上用免疫组化(PAP)法检测,结果MC_3相应抗原的表达阳性率分别为93.8％(45/48)、80.65％ (25/31)、47.62％ (20/42)、37.5％(15/40),其阳性率差异有非常显著性(P<0.001).48例正常肠粘膜均为阴性.MC_3在大肠癌组织中的反应程度与患者3年生存率有关,差异有显著意义(P<0.05).MC_3反应强度在高分化肠癌组与中～低分化肠癌组比较差异有显著意义(P<0.05).在绒毛状腺瘤、混合性腺瘤和管状腺瘤中MC_3相应抗原表达阳性率分别为71.4％(25/35)、60.0％(9/15)、41.3(26/63),差异有显著性(p<0.05).绒毛状腺瘤、混合性腺瘤和管状腺瘤其癌变率分别为45.7％(16/35)、13.3％(2/15)、20.6％(13/63),其癌变率比较差异有显著性(P<0.05).     

抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。     

人生长激素的单克隆抗体放射免疫分析法和免疫放射分析法

利用抗HGH单克隆抗体建立了HGH的RIA和IRMA。方法学鉴定表明,这两种测定方法的灵敏度高(RIA为1.2ng/ml,IRMA为2ng/ml)、特异性强(与HPL及HPRL均无交叉反应)、重复性好。同时,还将这两种方法与HGH常规抗血清RIA进行了比较。     

单克隆抗体干菌酶标法作霍乱弧菌快速分型鉴定的研究

本文报道使用三株霍乱弧菌型特异性单克隆抗体(VC-McAb),以干菌快速酶标法对1088株历年分离保存的霍乱弧菌EL-Tor生物型菌株进行了血清型和流行菌型的分型鉴定,并与原有的血清学、噬菌体和生物分型比较,证明VC-McAb对菌株的分型率分别为小川型流行株90.42％,小川型非流行株97.04％,稻叶型流行株89.34％和稻叶型非流行株93.94％。本法快速(仅需2h)、简便、敏感、特异,对霍乱弧菌血清型和流行菌型的快速分型鉴定,具有较大的实用价值。     

纳米材料的制备、功能化及其器件的性质研究（英文）

一维纳米材料（碳纳米管、纳米线、氧化物纳米带）作为研制纳电子器件理想的材料具有重要的科学意义和应用前景。本工作主要集中在氧化物纳米带、碳纳米管的功能化及其和纳米器件性质研究。     

我国科学家发现调控肝脏甲胎蛋白基因表达的重要分子

第二军医大学基础部章卫平教授研究组的最新研究结果，揭示了自主发现的锌指蛋白ZBTB20是调控甲胎蛋白基因表达的关键分子。这一重大发现刊登在近期正式出版的新一期国际著名学术期刊《美国科学院院刊》上。     

我科学家发现调控肝脏甲胎蛋白基因表达的重要分子

第二军医大学基础部章卫平教授研究组的最新研究结果，揭示了自主发现的锌指蛋白ZBTB20是调控甲胎蛋白基因表达的关键分子。这一重大发现将刊登在8月5日正式出版的新一期国际著名学术期刊《美国科学院院刊》上。     

分泌抗人B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术在血液学的理论研究和临床实践中巳得到广泛的应用。就血型单克隆抗体而言,已见有不少报道。我们在继建立分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC_9后,又建成了一侏能分泌抗人B型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMB_1。本文将对ZMB_1的建侏和初步鉴定结果作一报道。     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用淋巴细胞杂交瘤技术。继建立产生抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤ZMC_4后,又建立了一株能分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMC_9。本文将对ZMC_9的建株作一简报。材料与方法以正常人A型Rh阳性的红细胞为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NSI小鼠骨髓瘤细胞在50％PEG(分子量4,000)作用下融合,经HAT选择性培养基培养,生成淋巴细