人参皂苷Rg1对糖尿病大鼠心肌氧化应激及细胞凋亡的影响（英文）

目的:探讨人参皂苷Rg1对高血糖所致心肌损害的保护作用及其机制。创新点:使用糖尿病大鼠为实验对象,探讨三种浓度的人参皂苷Rg1对糖尿病心肌损伤的保护作用及其机制,检测其是否具有浓度依赖性。方法:将60只Wistar大鼠随机分组,其中空白对照组10只,另50只给予高脂高糖饲养,4周后腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)。成功制备糖尿病大鼠模型40只,再随机分为糖尿病模型组,糖尿病大鼠+低剂量人参皂苷Rg1(10 mg/(kg·d)),糖尿病大鼠+中剂量人参皂苷Rg1(15 mg/(kg·d)),糖尿病大鼠+高剂量人参皂苷Rg1(20 mg/(kg·d))。12周后处死大鼠,取血测定空腹血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、心肌酶及氧化应激水平,留取心肌组织使用透射电镜观察心肌细胞超微结构改变,应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)和Bcl-x L的表达。结论:人参皂苷Rg1对糖尿病大鼠糖脂代谢无明显影响,人参皂苷Rg1可降低糖尿病大鼠血清肌钙蛋白(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,改善心肌细胞超微结构,减少心肌细胞凋亡,降低大鼠血清和心肌组织中丙二醛(MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平,降低凋亡蛋白CASP3的表达,同时提高Bcl-x L蛋白表达。总之,人参皂苷Rg1能显著保护糖尿病大鼠心肌损伤,其机制可能与其抗氧化及抗细胞凋亡作用有关。     

小鼠pOct4-EGFP胚胎干细胞株的构建

以建立p Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为研究ESC分化提供有力的示踪工具为目的,通过电穿孔法转染小鼠ESC,G418和荧光显微镜下挑选和观察所得阳性克隆,检测所得细胞胚胎干细胞特异性标志物AKP、Oct4及SSEA-1的表达,通过拟胚体(EB)诱导体外分化,RT-PCR检测三胚层的分化,通过Oct4免疫荧光观察p Oct4-EGFP ESC的Oct4与GFP的一致性表达,进一步通过诱导p Oct4-EGFP ESC分化观察GFP的表达情况,并用RT-PCR检测Oct4的表达.结果表明,形态学观察可见所得GFP阳性细胞呈克隆样鸟巢状生长,AKP染色呈强阳性,ESC特异性标志Oct4、SSEA-1表达阳性,RT-PCR结果显示p Oct4-EGFP ESC具有三胚层的分化能力.p Oct4-EGFP ESC免疫荧光及细胞分化结果均表明Oct4与GFP的表达一致.本研究成功建立了小鼠p Oct4-EGFP胚胎干细胞株,并可用于体外直观监测ESC分化的阶段性变化.     

雷帕霉素对小鼠百草枯中毒导致肺纤维化的治疗作用(英文)

目的:评估雷帕霉素(RAPA)对小鼠百草枯(PQ)中毒导致肺纤维化的治疗作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次在小鼠PQ中毒的模型中证明RAPA可明显抑制肺纤维化,且此作用与转化生长因子-β1(TGF-β1)的抑制相关。方法:将C57BL/6J雄鼠分为对照组(腹腔注射生理盐水)和实验组(腹腔注射10 mg/kg PQ)。实验组根据采用的治疗不同,可分为以下四组:PQ组、PQ+RAPA组、PQ+MP(甲强龙)组和PQ+MP+RAPA组。用苏木精-伊红染色法(H&E)和马松(Masson)三色染色法观察肺组织病理结构变化,用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测肺组织中的羟脯氨酸(HYP)含量,用免疫组化和免疫印迹的方法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结论:本实验中小鼠的肺组织病理染色结果显示,RAPA治疗能缓解肺纤维化导致的病理改变(图3)。ELISA实验结果显示,RAPA治疗28天后可显著降低肺组织中HYP的含量(图4)。免疫组化和免疫印迹实验结果显示,RAPA治疗能明显下调肺组织中TGF-β1和α-SMA的高表达(图5和6)。综上所述,RAPA在治疗PQ中毒导致的肺纤维化中有重要价值。     

HPLC监测的人参皂甙在温和酸性条件下的降解变化Ⅱ

本文对人参皂甙20(s)-原人参三醇组中的几种主要单体皂甙在近似胃液条件下的酸水解产物,以HPLC法进行了分析检测,结果表明:人参皂甙Rg_1降解产生次级Rh_1;Re产生Rg_2;和预料相符,水解时这些次级甙均伴生少量C_(20)异构体。     

体外诱导实现猪的ips细胞向神经干细胞分化

项目的主要目标是实现猪的诱导多能干细胞(i PSCs)向神经干细胞(NSCs)体外诱导。在整个实验探索的过程中,我们使用了传统的诱导分化形成神经干细胞(NSCs)的方法,即通过拟胚体(EB)的形成并添加维甲酸(RA)进行诱导。猪的诱导多能干细胞(i PSCs)经历了传代培养、拟胚体(EB)时期、诱导分化时期三个重要阶段,生成一类新的细胞。最后我们使用免疫荧光法检测到新的细胞中存在神经干细胞的特异性标志物Nestin、神经元标志物β-tubulin III以及神经胶质细胞标志物GFAP表达,从而确定这类新的细胞为神经干细胞。可见,猪的诱导多能干细胞(i PSCs)经过这种传统诱导分化方法培养可分化为具备基础特征的神经干细胞(NSCs),能够表达出神经干细胞(NSCs)特异的标志分子nestin。     

人参皂苷Rg1的抗抑郁作用及其作用机制

目的：观察人参皂苷Rg1的抗抑郁作用,探讨其抗抑郁机制。方法：采用小鼠悬尾实验（tail suspension test,TST）和强迫游泳实验（forced swim test,FST）建立急性应激模型,选择大鼠慢性温和不可预见性应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）的方法建立长期抑郁模型。同时给予人参皂苷Rg1（5,10,20 mg·kg-1·d-1）和度洛西汀（10 mg·kg-1·d-1）,观察Rg1的抗抑郁作用。结果：在急性应激实验中,Rg1三个剂量组（5,10,20 mg·kg-1）均能够显著减少动物的不动时间。慢性应激后,采用强迫游泳和糖水消耗实验进行行为学检测,与模型组相比,Rg1三个剂量均能够显著减少大鼠在强迫游泳实验中的不动时间,增加糖水偏好实验的糖水消耗百分比,延长动物的睡眠时间。机制研究证明,Rg1可抑制PDE4引起环腺苷酸（cyclic adenosine monophsphate,cAMP）的累积,进而激活cAMP介导的抗抑郁信号转导途径,还可增加雄激素水平,而雄激素又能拮抗糖皮质激素的释放和增加基础突触传递。此外,增加突触新生也是抗抑郁的重要机制。结论：人参皂苷Rg1对小鼠急性应激和CUMS诱导的大鼠抑郁行为有显著的改善作用,并可能通过调节神经递质和激素的释放、减少糖皮质激素含量、增加神经营养因子的表达以及增强突触可塑性来发挥抗抑郁作用。     

HPLC监测的人参皂甙在温和酸性条件下的降解变化

对人参皂甙20(s)-原人参二醇组中的两种主要单体皂甙Rd与Rb_1在近似胃液条件下的酸水解情况以HPLC法进行了分析检测,结果表明:人参皂甙Rd降解产生次级甙20(s)一Rg_3和F_2;Rb_1降解产生次级甙20(s)-Rg_3、F_2和Rd.综合这些研究,文中对该条件下皂甙甙键的裂解顺序、次级甙的衍生规律以及水解相关因素的影响亦做了初步探讨与归纳。     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的:探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定.方法:分别取孕14～16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养,用光学显微镜观察NSCs的生长情况,并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达,经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测.结果:①培养出来的细胞可以扩增生长;②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性;③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后,免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性.结论:采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs.     

α-硫辛酸对热应激小鼠睾酮分泌失调的保护作用

目的:研究α-硫辛酸对热应激引起小鼠睾酮分泌失调的保护作用.方法:将性成熟雄性SPF昆明小鼠60只,随机分为3组,即对照组、热应激组和α-硫辛酸+热应激处理组.分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清睾酮含量,石蜡切片免疫组化染色法(IHC)分析各组小鼠非折叠蛋白反应信号通路的关键信号转导调节分子肌醇需求酶1(IRE1)在睾丸中的表达定位,以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠IRE1和促凋亡基因半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达量变化.结果:与对照组相比,热应激组的血清睾酮含量显著下降(P<0.01),睾丸组织中IRE1和Caspase-3蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.01);与热应激组相比,α-硫辛酸+热应激处理组的血清睾酮含量显著升高(P<0.05),在睾丸生精小管和间质细胞中均可观察到IRE1蛋白的阳性免疫染色,但IRE1蛋白阳性细胞数量显著减少(P<0.05),IRE1和Caspase-3的蛋白表达量均显著降低(P<0.05,P<0.05).结论:热应激能够抑制小鼠睾丸睾酮的分泌,降低血清睾酮的含量;在本试验条件下,添加60 mg/(kg·d)的α-硫辛酸能够有效增加热应激状态下小鼠的血清睾酮含量,其发挥保护作用的机制可能与α-硫辛酸抑制IRE1介导的非折叠蛋白反应信号通路激活、降低凋亡促进基因Caspase-3的蛋白表达量有关.     

益母散通过增加催产素水平和子宫平滑肌缝隙连接蛋白43的表达提高孕鼠分娩能力（英文）

目的:评价益母散对孕鼠分娩能力的促进作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次在临近分娩小鼠中证明新中兽医药处方益母散可明显促进孕鼠分娩能力,且此作用与催产素和子宫平滑肌缝隙连接蛋白43(Cx43)的高表达相关。方法:将妊娠小鼠分为对照组和益母散低、中、高剂量组,产前3天持续灌胃,统计孕鼠分娩产程和死胎率。采用离体平滑肌张力试验测定子宫平滑肌张力,用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清中催产素和前列腺素E2(PGE2)含量,用蛋白免疫印迹(Western blotting)及免疫组织化学等方法检测小鼠子宫平滑肌中Cx43含量。结论:益母散灌服处理能够使小鼠分娩产程缩短和死胎率降低(图1),并增强分娩小鼠子宫平滑肌张力(图2)。ELISA实验结果显示,益母散灌服处理使分娩小鼠血清催产素水平显著提高(图3)。免疫组化和免疫印迹实验结果显示,益母散灌服处理使分娩小鼠子宫平滑肌Cx43含量显著提高(图4和5)。综上所述,益母散具有提高孕鼠分娩能力的作用,该作用与催产素水平和子宫平滑肌Cx43的高表达相关。     

神经干细胞与神经药理学

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是具有高度自我更新能力,能分化为神经元及胶质细胞的前体细胞.NSCs增殖及分化调控机制的研究对于其治疗神经系统退行性疾病及功能修复具有重大意义.研究表明:神经干细胞的治疗作用包括干细胞的归巢,定植和激活自体神经干细胞,但更重要的是神经干细胞所分泌的神经细胞调控因子群(neurocyte growth regulatory factors,NGRFs)的药理学作用.深入研究这些因子不但对神经细胞再生及功能重建有重要意义,而且对研究这些因子的药理作用机理及开发大分子新药具有指导意义.     

巨噬细胞参与反复潜水引起的肺损伤（英文）

目的:探索反复潜水引起肺损伤的炎症机制以及吸入高浓度氢气(HCH)对这种损伤的治疗作用。创新点:本研究首次在小鼠体内建立并评估减压诱导肺损伤(DILI)模型;首次探索巨噬细胞在DILI中的作用;首次探索呼吸HCH对于DILI的治疗作用。方法:将雄性C57小鼠随机分为对照组、DILI组和HCH组。DILI组于600 k Pa压力下暴露60 min,连续3d。HCH组在减压处理后吸入HCH(66.7%H2+33.3%O_2)干预。减压操作6 h后检测小鼠肺功能和小鼠肺干湿比,取小鼠肺组织固定进行苏木精-伊红染色,并取小鼠全血进行血细胞计数实验。取小鼠肺组织提取蛋白并提取血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测炎症因子与趋化因子,并使用蛋白质免疫印迹(western blotting)试验测定小鼠肺内小鼠含生长因子样模体粘液样激素样受体(F4/80)、巨噬细胞甘露糖受体(CD206)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达量。使用免疫组化检测小鼠肺组织切片内F4/80、CD206和i NOS的阳性细胞的比例。提取小鼠肺组织内总信使核糖核酸(m RNA),使用荧光实时定量聚合酶链反应测定极化标记蛋白CD206和i NOS以及炎症因子TNF-α和IL-10的基因表达量。结论:多次减压可导致肺水肿、组织结构破坏和肺功能下降,病变程度和减压次数有关,证明模型建立成功。DILI可以诱导肺内和循环炎症反应的激活,巨噬细胞可能向肺内迁移趋化并向不同亚型极化,极化后的巨噬细胞M1与M2分别参与炎症激活与炎症抑制的过程。吸入HCH可以显著改善小鼠肺损伤,降低肺内炎症反应,抑制巨噬细胞向M1亚型极化并促进其向M2亚型极化,从而证明吸入HCH对于DILI具有治疗作用。     

血浆输注通过抑制肝细胞凋亡对脂多糖/D-半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用（英文）

目的:评估血浆输注对脂多糖半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。创新点:在小鼠急性肝损伤模型中证明血浆输注对肝损伤的保护作用,且此作用与p53介导的肝细胞凋亡相关。方法:将40只清洁型ICR雄性小鼠随机分为4组(n=10每组):(1)对照组;(2)血浆(plamsa)组。收集血清和肝组织样本,用天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒检测血清中AST和ALT水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化;肝组织进行苏木精-伊红染色法(HE)和网状纤维染色,显微镜下观察肝组织病理学变化;用免疫印迹法(WB)检测凋亡相关蛋白的变化。在腹腔注射后32小时内对小鼠进行存活分结论:能够显著诱导小鼠的急性肝损伤,包括增加血清中AST和ALT水平;中心小叶坏死和炎性细胞的组织病理学变化和炎症上(TNF-α和IL-6)。当血浆输注后,这些变化被缓解。结果显示,血浆输注显著降低小鼠死亡率,降低AST、ALT和炎症因子如TNF-α和IL-6的水平。Cleaved Caspase-3、BAX和p53的表达下调,Bcl-2上调,表明血浆可以减少诱导的细胞凋亡。血浆输注对诱导的急性肝损伤的保护机制与通过p53诱导的凋亡途径和炎症因子减少相关。     

HPLC法测定西洋参类保健食品中人参皂苷成分的含量

目的建立HPLC法测定以西洋参为主要原料的保健食品中人参皂苷成分含量的方法。方法采用高效液相色谱法测定。色谱柱:岛津C18柱,流动相:乙腈-水(梯度),流速:1.0mL/min,检测波长:203nm。结果人参皂苷Rg1在36.18～361.8ng(r=0.999),人参皂苷Re在0.2254～2.254μg(r=0.9999),人参皂苷Rb1在0.67498～6.7498μg(r=0.9999)之间线性关系良好;人参皂苷Rg1的平均回收率为99.3%,RSD=4.62%;人参皂苷Re的平均回收率101.7%,RSD=1.63%;人参皂苷Rb1的平均回收率100.3%,RSD=1.49%。结论试验表明,该方法操作简单,分离效果好,灵敏度高,可以用于以西洋参为主要原料的保健食品的质量控制。     

人参皂苷和三七皂苷五种成分神经保护作用的均匀设计-高通量筛选研究

目的:通过对人参皂苷和三七皂苷多成分多水平均匀设计配伍的神经保护作用筛选研究,评价中药有效成分的均匀设计-高通量筛选技术。方法:选取人参皂苷Re,Rb1,Rg1,Rg3和三七皂苷R1等五种皂苷单体6个水平(1×10-4~1×10-9mol.L-1)进行均匀设计配伍组合,通过神经细胞血清剥夺损伤模型进行药效高通量筛选;得到的最佳组合样品,再通过小鼠脑缺血再灌注损伤模型(避暗法、断头耐缺氧实验)及血清和脑、心肌组织老化相关酶测定,进行药效学评价。结果:在细胞实验中筛选得到的最佳3个组合样品(A11,A12,P5),药效(细胞存活率>90%)高于1×10-4mol.L-1浓度的五种皂苷单体及维生素E(细胞存活率最高78%);可明显改善小鼠脑缺血再灌注损伤所致的记忆障碍,增强耐缺氧能力,提高组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,降低一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,维持谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量稳定(P<0.01~0.05)。结论:均匀设计配伍与...     

水飞蓟宾对丁酸钠引起的老龄鼠抑郁和焦虑样行为的影响

目的:研究丁酸钠对老龄鼠抑郁和焦虑样行为的影响及水飞蓟宾对其行为的干预作用.方法:8月龄昆明种小鼠随机分为对照组、丁酸钠组、丁酸钠+水飞蓟宾(0.1 g·kg-1)组、丁酸钠+水飞蓟宾(0.2 g·kg-1)组.通过悬尾实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和明暗箱实验观察丁酸钠和水飞蓟宾对老龄鼠的行为学影响.结果:在悬尾实验中,丁酸钠组小鼠较对照组小鼠不动时间明显延长(P<0.05);水飞蓟宾组小鼠较丁酸钠组小鼠不动时间明显缩短(P<0.05,P<0.01).在旷场实验中,丁酸钠组小鼠较对照组小鼠跨格次数显著减少(P<0.05);水飞蓟宾组(0.2 g·kg-1)小鼠较丁酸钠组小鼠跨格次数显著增加(P<0.05).在高架十字迷宫实验中,丁酸钠组小鼠较对照组小鼠在闭臂停留时间显著延长(P<0.05);水飞蓟宾组小鼠较丁酸钠组小鼠在闭臂停留时间有缩短趋势,但差异无显著性(P>0.05).在明暗箱实验中,丁酸钠组小鼠较对照组小鼠在明箱停留时间明显减少(P<0.05);水飞蓟宾组(0.2 g·kg-1)小鼠较丁酸钠组小鼠在明箱停留时间明显增加(P<0.05).结论:丁酸钠可引起老龄鼠出现抑郁和焦虑样行为;水飞蓟宾能够明显改善丁酸钠引起的抑郁和焦虑样行为.     

七龙天胶囊质量标准实验研究

采用薄层色谱法(TLC)对七龙天胶囊中的地龙进行定性鉴别,结果表明,地龙对照药材在与供试品的薄层色谱相应位置上,有相同颜色斑点,阴性对照无干扰.另采用高效液相色谱法(HPLC)测定处方中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1及红景天苷的质量分数,结果显示,三七皂苷R1在0.178~3.560μg、人参皂苷Rb1在0.430~8.600μg、人参皂苷Rg1在0.539~10.780μg、红景天苷在0.206~4.120μg范围内与峰面积值呈良好线性关系(r分别为0.999 7,0.999 8,0.999 7,1.000 0,n=6).平均加样回收分别为97.82%(RSD=1.28%),97.92%(RSD=1.62%),97.07%(RSD=0.82%),96.58%(RSD=1.45%).TLC法及HPLC法操作简便、准确、重复性好,可对七龙天胶囊进行质量控制.     

次乌头碱配伍甘草次酸对缺氧缺糖损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其分子机制（英文）

目的:探讨次乌头碱(HA)配伍甘草次酸(GA)对缺氧缺糖(OGD)损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其作用机制。创新点:首次在OGD模型中证明HA+GA对H9c2心肌细胞有明显的保护作用。此作用与减少细胞坏死和凋亡有关系,且其作用机制与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白质丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路有关。方法:采用H9c2心肌细胞为研究对象,将其分为七组:正常组、OGD模型组、OGD+HA组、OGD+GA组、OGD+HA+GA组、OGD+LY294002组、OGD+HA+GA+LY294002组。采用Hoechst 33342染色荧光显微镜及透射电镜观察前五组的H9c2心肌细胞的形态学改变;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前五组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量的改变;采用异硫氰酸荧光素-磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(FITC-AV/PI)双染色法检测前五组细胞凋亡率的情况;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测加入抑制剂LY294002前后丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)等细胞作用信号通路PI3K/Akt相关蛋白的情况。结论:(1)Hoechst 33342染色荧光显微镜显示OGD+HA+GA组抗凋亡作用最明显;(2)透射电镜观察OGD+HA+GA组凋亡现象改善最多;(3)LDH、CK-MB及AST的含量变化显示OGD+HA+GA组心肌细胞损伤指标降低最多(P0.05);(4)Western blot法检测结果显示HA+GA可以减少OGD对H9c2心肌细胞的损伤,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

用密度梯度离心法富集源于小鼠胚胎干细胞的运动神经元样细胞前体

目的:我们的目标是从源于胚胎体(EBs)的小鼠胚胎干细胞(mESCs)中分离运动神经元样细胞前体(MNLCPs),以用于发展针对运动神经元疾病的药物筛选试验和移植疗法.天然Shh蛋白(或Shh通路激动剂)和维甲酸诱导的胚胎体中,MNLCPs和未分化细胞的含量是不确定的.如果不把未分化的细胞从细胞培养中充分去除,其可能会干涉药物筛选试验或在移植后增生.我们开发了一种以密度梯度离心法为基础的富集MNLCPs的方法.方法:我们用Wichterle等人2008年改进的方法,将mESCs( HBG3:eGFP:HB9)扩大和分化.通过化学和酶学的无研磨处理,含有绿色荧光蛋白的MNLCPs和未分化细胞的胚胎体被小心轻轻地离解成单细胞.利用OptiprepTM8％～20％逐步梯度离心技术将MNLCPs回收.拥有绿色荧光蛋白的MNLCPs的含量由流式细胞仪检测.结果:我们的结果表明,在胚胎体形成前,mESCs在明胶包被的培养板上生长,其分化为MNLCPs的能力减少.比较mESCs在明胶,明胶与PMEFs,及PMEFs包被的培养板上的生长发现,mESCs在PMEFs包被的培养板上产生含绿色荧光蛋白的MNLCPs的得率为(54.1±11.0)％(x-±s;n=12),在明胶包被的培养板上的得率为(2.8±1.1)％(x-±s;n=9).用密度梯度离心法获得的含绿色荧光蛋白的MNLCPs的平均含量为(87.7±5.5)％(x-±s;n=3).结论:我们的数据表明,不使用细胞分选器,无研磨解离和密度梯度离心法也能用于富集具有高存活率的MNLCPs.有必要对MNLCPs在体外、体内和表型上进行进一步的生理学意义(如神经轴突的生长及形成神经肌肉接头的能力)上的鉴定.     

神奇的干细胞

干细胞(Stem cell)是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,可在生命生长发育中起“主干”作用的原始细胞。它的神奇之处在于:可诱导分化成为全身各种类型细胞,具有自我更新能力(Self-renewing),能够产生高度分化功能的细胞,由此带来基因治疗、器官移植等革命性进展。 1.干细胞的种类 干细胞按照生存阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。 (1)胚胎干细胞(Embryonic StemCell,ES细胞) 当受精卵分裂发育成囊胚时,内层细胞团(Inner Cell Mass)的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性,可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。早在1970年ManinEvans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。