蜘蛛主壶腹线cDNA文库构建过程的优化

通过本实验得出采用简易CTAB法提取基因组DNA,利用总RNA试剂盒提取总RNA,提取效率和纯度较为理想。并利用生物软件学方法对老狡蛛丝蛋白基因引物进行了构建,为蜘蛛主壶腹线cDNA文库构建打下了基础。     

小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

目的克隆小鼠内皮抑素(Endostatin)编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因表达载体.方法从小鼠肝细胞提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得全长Endostatin基因,测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物,A260=0.834,A280=0.407,A260A280=2.049,总RNA浓度为1.668g/L.EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的IFNY和Endostain双基因共表达质粒pEgY-IFN(Y)-Endostatin.结论成功克隆小鼠Endostatin基因,构建了pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.     

大鼠Gast和Mln mRNA荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立一种逆转录-实时定量PCR(R T-Q PCR)检测大鼠胃组织中胃泌素(Gast)和胃动素(Mln)m R N A表达的方法。方法:提取大鼠胃组织总RNA,逆转录合成c DNA,利用SYBRGreen荧光染料法实时检测Gast和Mlnm RNA的表达水平。通过溶解曲线分析检测特异性,以管家基因β-actin为内参对Gast和Mln进行定量分析。结果:建立的大鼠Gast和Mlnm RNART-QPCR检测方法具有良好的特异性和敏感性。结论:成功建立RT-QPCR检测Gast和Mlnm RNA基因表达的方法。     

小鼠Endostatin基因的分子克隆、鉴定及双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin的构建

目的克隆小鼠内皮抑素（Endostatin）编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFNγ-EndostatinA基因表达载体。方法从小鼠肝细胞提取总RNA，经逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增获得全长Endostatin基因，测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFNγ-EndostatinYT．基因共表达质粒。结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物，A260=0．834，A280=0．407，A260：A280=2．049，总RNA浓度为1．668g／L。EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致，并构建了含Egr-1启动子的IFNγ和DEndostain双基因共表达质粒pEgY-IFNγ-Endostatin。结论成功克隆小鼠Endostatin基因，构建了pEgr-IFNγ-Endostatin双基因共表达质粒。     

改进的CTAB法提取高寒植物长鞭红景天基因组DNA的研究

根据自己抽提高寒植物基因组DNA的实际经验,改进了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法,在试验过程中发现,通过在研磨材料时加入液氮、剪去端部的吸头转移含有DNA的溶液,并且将加入RNaseA消化RNA的步骤,结果证明改良的CTAB法得到的长鞭红景天基因组DNA浓度和纯度较高,且无无蛋白质和RNA等杂质影响。     

大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)包涵体蛋白mRNA的提取及电镜观察

包涵体蛋白 mRNA 是大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)感染晚期合成的主要信使 RNA.我们从染病晚期幼虫脂肪体中,用饱和苯酚法提取总核酸,用 LiCl 去除其中 DNA,经 Oligo-(dT)纤维素层析柱,mRNA 呈现二个洗脱峰,将洗脱峰组份用尿素-高甲酰胺法制样电镜观察.电镜下 mRNA 分子柔软、粗糙,呈弯曲的线状,分子长度约0.3μ(30个统计)     

三七药材提取过程对杂质的控制

目的:探索三七药材提取过程中对杂质控制的工艺研究.方法:通过控制淀粉等杂质的含量,降低后工序的处理难度,提高生产效率,提升中间体产品质量.结果:通过调整三七药材提取过程当中的提取方法、提取温度、提取时间,能确定最佳提取方法,并对鞣酸、纤维、黄酮类及氨基酸类等杂质含量的降低起重要作用,提升三七总皂苷含量.     

大花黄牡丹总DNA的提取初探

本文经过反复实验摸索,在没有液氮的情况下,改良了常用的总DNA的提取方法～SDS法和CTAB法,用这两种方法成功的提取了大花黄牡丹（Paeonia ludlowii）的总DNA。并通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计进行紫外检测发现,提取到的DNA纯度及含量均适合分子生物学操作的要求,为进一步遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究奠定基础：     

川芎提取工艺的优化

目的:对川芎中有效成分阿魏酸和总酚酸的提取工艺进行优化。方法:使用均匀设计法对川芎中有效成分阿魏酸和总酚酸的提取工艺进行分析,以提取率为参考指标,观察在提取时使用的乙醇浓度、提取时间、提取次数对参考指标的影响。结果:以总酚酸和阿魏酸的提取含量为最终价指标,经优化筛选确定:中药川芎50g,使用12倍量的90%浓度乙醇,提取两次,每次提取179分钟,回收乙醇,在60℃下进行真空干燥为最佳工艺提取方案,平均得膏率是33.13%,阿魏酸的含量是1.376mg/g,总酚酸的含量是14.41mg/g。结论:使用均匀设计法对川芎提取工艺进行优化选择,有利于提高生产质量和中药川芎的利用率。     

西洋参中总皂苷的提取工艺研究

目的:优选西洋参中总皂苷的最佳醇提工艺。方法:采用紫外分光光度法,以人参总皂苷含量为指标,采用L9(34)正交试验设计,考察提取溶媒体积,提取次数,提取溶媒用量对人参总皂苷提取率的影响,优选最佳提取工艺条件。结果:提取工艺条件:采用8倍量的70%乙醇,回流提取2次,每次3h,西洋参总皂苷含量为5.23%。结论:优选工艺可较好的提取西洋参中的人参总皂苷。     

专利信息

重楼总皂苷的制备方法专利号:03135589)本发明公开了一种重楼总皂苷的制备方法。主要包括提取、分离和纯化。适用于以重楼属所有种植物为原料提取重楼总皂苷。其优越性在于将酒精提取、膜过滤、吸附树脂、脱色树脂和活性炭组合脱色、丙酮脱脂等单元操作进行有效组合。产品颜色近白色,抗吸湿性强,有效成分含量高且稳定,提取率高,生产成本低。三七总皂苷脂质体及其制剂(专利号:03135782)本发明公开了一种三七总皂苷脂质体及其制剂。按重量百分比,该脂质体含有如下组份;三七总皂苷5%—30%,膜材50%—80%,附加剂1%—10%以及余量的其它辅料。该脂…     

植物非编码RNA与抗虫防御反应的研究及应用

非编码RNA参与了多种重要的生命进程,是当今研究的热点领域。在植物中,非编码RNA除了参与维持基因组的稳定,还在生长、发育、逆境胁迫反应等过程中发挥重要作用。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由RNA触发的相应基因的表达抑制,是非编码RNA调控基因表达的一种重要的作用方式,自发现以来已逐渐发展为遗传分析、疾病治疗以及植物保护等方面的有效的新技术。文章重点介绍了微RNA(micro RNA,mi RNA)在植物抗虫防御中的生物学功能,si RNA对植物防御记忆的影响以及RNAi对植物防御信号途径的调节作用,同时阐述了RNAi在提高农作物抗虫性上的应用并展望了未来植物非编码RNA的研究方向。     

我国三七皂苷提取分离技术专利现状

三七总皂苷是从三七提取的活性有效成份,主要用于心脑血管疾病。针对三七皂苷提取分离技术进行专利情报分析。针对全国的三七皂苷的专利信息进行分析、加工、组合,并利用统计学方法、对比分析法、图表法、文献分析法以及定性与定量相结合等方法进行分析,得出我国三七皂苷提取分离技术的发展现状,研究三七皂苷提取分离技术产业的发展趋势。     

迷迭香中抗氧化剂总酚含量的测定

通过对春、秋、冬三季迷迭香干料和春季鲜料提取得到的抗氧化剂进行总酚含量测定,得出干料提取得到的抗氧化剂总酚含量比鲜料高,且秋季迷迭香干叶制得的抗氧化剂的总酚含量最高,达到297mg/g,因此抗氧化剂的提取最好选择秋季干叶为原料。     

苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究

本文对观音草总皂苷提取工艺进行研究。观音草总皂苷最佳提取工艺为80摄氏度分别提取2次,第一次分别加入12倍量纯化水提取80分钟,第二次分别加入10倍量纯化水提取60分钟。     

闪式提取积雪草总苷及抗肿瘤作用研究综述

目前,恶性肿瘤已成为各年龄段的常见疾病,如何从天然产物中寻找到抗肿瘤药物成分并进行有效地提取,是医药学界的研究热点。积雪草总苷能促进胶原蛋白合成,有助于刺激组织生长,加快伤口愈合,从而在临床上达到治疗晒伤、擦伤、灼伤的效果,其功效在化妆品成分中也得到了广泛应用。本文以积雪草总苷提取率为指标,寻求闪式提取积雪草总苷的最佳工艺参数组合,对积雪草成分积雪草总苷抗肿瘤机制进行汇总分析,有助于药用植物积雪草在医学等方面的利用价值。     

小儿肺热咳喘颗粒工艺研究

目的：优选小儿肺热咳喘颗粒提取工艺。方法：以影响提取工艺加水量为考察因素,以提取物中总生物碱含量为指标进行工艺筛选。结果：通过考察不同加水量提取物总生物碱的含量,选择最佳提取工艺为加8倍量的水提取二次。     

芦苇床中芦苇内生菌群总DNA提取方法研究

本文对污泥干化芦苇床中芦苇内生菌总DNA的提取方法进行了研究,实验经过摸索后采用Soil DNA Kit提取基因组DNA对不同来源的芦苇内生菌群总DNA进行提取。利用PCR技术对不同来源的总DNA的提取方法进行了对比分析。以期应用分子生物学技术研究和评价芦苇共生菌群改变,从而为改善芦苇床工艺设计提供生物学证据。     

RNAi技术在园林植物遗传育种中的应用前景

RNA干扰技术（RNA interference,简称RNAi）是指将双链RNA即（dsRNA）导入生物或细胞内,引起与其同源的mRNA特异性降解,因而抑制其相应基因表达的过程。它具有高效、快捷、特异性强等特点。本文从RNAi的发现、作用机制、作用特点和RNAi技术在园林植物遗传育种中的应用前景等方面进行了综述。     

lncRNA的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是指长度大于200个核苷酸的不参与蛋白质编码过程的DNA转录产物。近年来,这类lnc RNA在表观遗传、转录及转录后水平上调控基因表达方面的研究比较广泛,已获得较为深刻的认知。最近人们认识到lnc RNA在许多的生理、病理途径中发挥着一定的作用,比如干细胞全能性、神经生长分化与肿瘤发生等。本文主要介绍lnc RNA在人及动物中的功能及相关的研究进展。