抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

我国科学家发现调控肝脏甲胎蛋白基因表达的重要分子

第二军医大学基础部章卫平教授研究组的最新研究结果，揭示了自主发现的锌指蛋白ZBTB20是调控甲胎蛋白基因表达的关键分子。这一重大发现刊登在近期正式出版的新一期国际著名学术期刊《美国科学院院刊》上。     

我科学家发现调控肝脏甲胎蛋白基因表达的重要分子

第二军医大学基础部章卫平教授研究组的最新研究结果，揭示了自主发现的锌指蛋白ZBTB20是调控甲胎蛋白基因表达的关键分子。这一重大发现将刊登在8月5日正式出版的新一期国际著名学术期刊《美国科学院院刊》上。     

中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆及其表达

应用RT-PCR技术从小麦病叶中扩增得到中国小麦花叶病毒(CWMV)的运动蛋白(MP)基因,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中得到大量表达,并以含表达产物的凝胶为抗原,免疫小鼠制备特异性抗血清,同时将MP基因重组到质粒pGBKT7中,电击转化酵母Y187菌株。Westernblot分析表明MP基因在酵母体内能以融合蛋白的形式正确表达,并具有免疫活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。     

基于纳米材料构建甲胎蛋白免疫传感器的研究与应用

人体血清中甲胎蛋白(AFP)含量已作为肝癌检测的一项重要指标。利用生物传感技术检测人体血清中的AFP,已受到广泛的研究和应用。根据不同纳米材料的特性,综述了几种常见纳米材料构建的甲胎蛋白免疫传感器的研究及应用进展,为科学研究以及临床检测甲胎蛋白提供了一定的参考价值。     

人纤维蛋白原α、β、γ基因的克隆和表达研究

纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是凝血因子I,在体内经凝血酶(thrombin)作用下转变为纤维蛋白,发挥其凝血和止血功能。本研究通过反转录的方法,从杭州人肝脏中成功克隆到人纤维蛋白原α、β、γ基因,并将其定向插入原核表达载体中,人纤维蛋白原α、β、γ基因经成功诱导获得表达,进一步纯化获得人纤维蛋白原α、β、γ蛋白。序列经比对,与Genbank上公布的序列同源性达97%～99%,这项研究为我国汉族人群纤维蛋白原基因核苷酸多态性和单倍型研究发挥一定作用,并且对纤维蛋白封闭剂的开发,提供了重要的产业化实验依据和技术基础。     

鱼类干扰素系统基因的克隆鉴定及其特征分析

干扰素 (IFN)系统是脊椎动物抵抗病毒入侵的第一道防御系统 .除了哺乳类 ,有关低等脊椎动物的IFN系统基因知之甚少 .在鱼类 ,近 40年来能证明IFN系统存在的证据主要有两个 :一是检测经病毒诱导后的多种鱼类机体和细胞 ,证明能产生类似哺乳类IFN的抗病毒活性物质 ;二是近年来 ,已经证明在少数几种鱼类中存在与哺乳类IFN系统基因Mx同源的基因 .以前的研究结果表明 ,紫外线灭活的草鱼出血病病毒 (GCHV)能够诱导鲤科鱼类培养细胞 ,如鲫鱼囊胚细胞 (CAB)产生类IFN活性物质 ,并建立宿主细胞的抗病毒状态 .为了揭示鱼类培养细胞抗病毒免疫的分子机制 ,首先建立了一个研究鱼类抗病毒免疫相关基因的细胞模型系统 ,通过用灭活GCHV诱导CABIFN并进行理化、生物学特性鉴定的基础上 ,成功建立了一个囊括鱼类细胞抗病毒基因在内的差减cDNA文库 .其次 ,筛选文库揭示了一批与哺乳类IFN系统基因同源以及找不到同源性的EST ,表达分析证实它们也是IFN刺激基因 .再次 ,根据哺乳类IFN系统研究的最新进展 ,从该细胞模型系统中克隆、鉴定了 1 9个IFN系统基因的全长cDNA序列 ,包括鲫鱼IFN基因 ,IFN信号传导通路基因STAT1 ,IFN诱导表达调控基因IRF7,IFN行使抗病毒作用的效应基因Mx1、Mx2、PKR、Viperin、IFI5 6,以及一些功能未知的     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊与蒙古绵羊BMP2部分基因片段的克隆及分析

从阿尔巴斯绒山羊及蒙古绵羊血中提取基因组DNA,根据已报道的BMP2基因的保守序列设计上下游引物,扩增山羊及蒙古绵羊的BMP2基因部分序列,将此片段克隆到pMD18-T载体中,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,并进行序列测定,并将两者序列进行比对.结果山羊该核苷酸片段与蒙古绵羊的同源性达99%,另与GenBank中人、小鼠、牛、绵羊的同源性分别为87%,85%,98%和99%.说明该基因在不同物种间具有较高的保守性,尤其是山羊与绵羊之间具有更高的保守性.     

印度芥菜重金属ATP酶基因的分离与表达

利用同源序列克隆技术在印度芥菜幼苗中分离出2个重金属ATP酶cDNA片段BjHMA3和BjHMA4;实时荧-光定量PCR表明BjHMA3和BjHMA4在所有的组织器官中均有表达,其中在根中表达量最高,叶片中表达量最少;重金属Zn或Cd胁迫均能增强二者在叶片中的表达,表明BjHMA不仅参与植物的生长发育过程,而且在重金属稳态和耐性中具有重要作用.     

溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析

铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达

为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律,根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV）pif-2的同源物,读码框含1278bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋）,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。     

幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的　构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法　采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果　PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论　成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.     

鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析

根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession,AY628648）。扩增片段全长591bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达,获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。     

对虾白斑综合征病毒VP19基因的克隆和序列分析

以东海宁波海区收集的甲壳内侧出现白斑为特征的发病中国对虾为材料，从中分离出一株病毒(ZJ2001)，经电镜和动物试验鉴定为对虾白斑综合征病毒；用煮沸法一步获得病毒基因组DNA，以此基因组为模板，利用PCR技术，扩增病毒囊膜蛋白VPl9的基因，将扩增得到的基因克隆并测序．用DNATools软件对测得的序列分析表明：VPl9基因序列与GeneBank中的比较(AF309029)，其核苷酸同源性为99％，氨基酸同源性为98％．     

2型糖尿病大鼠基因表达变化的研究

研究2型糖尿病大鼠和正常大鼠肾脏组织差异表达基因,筛选与糖尿病相关的基因。应用基因芯片技术对糖尿病和正常大鼠的肾脏组织的mRNA进行检测。在4096条目的基因中共发现差异基因41条（其中5个基因上调,36个基因下调）,全部在GeneBank中登录。2型糖尿病的发生、发展涉及多基因改变,用基因芯片在寻找新的2型糖尿病相关基因方面有极大的应用前景,对于糖尿病的诊断,治疗和预防具有一定的临床应用前景。     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

萤火虫荧光素酶基困的反义RNA及其缺失片段阻抑基因表达的研究

利用离体转录载体ｐＳＰ１８、ｐＧＥＭ－３Ｚ和萤火虫荧光素酶基因（Ｌｕｃ）及其缺失片段构建了一组融合质粒。以这些质粒为模板，通过离体转录产生荧光素酶基因的ｍＲＮＡ，反义ＲＮＡ及大小和结构不同的反义ＲＮＡ缺失片段，再通过显微注射分别将其引入爪赡卵母细胞的细胞质。注射后的卵母细胞经一定时间培育，然后检测其翻译产物一荧光素酶的相对活性。结果表明，荧光素酶基因的表达受反义ＲＮＡ及其缺失片段的严重阻抑，表达抑制和反义ＲＮＡ之间存在明显的剂量效应。而且，基因表达的抑制程度主要的和反义ＲＮＡ片段的结构有关。     

Effect of Resveratrol and Nicotine on PON1 Gene Expression: In Vitro Study

Dietary and lifestyle factors have been shown to have a profound effect on paraoxonase-1 (PON1) activity. Cigarette smoke has been shown to inhibit its mass and activity where as resveratrol has been shown to enhance it. We exposed hepatoma derived cell line (HepG2) to resveratrol and nicotine in varying doses and measured PON1 enzymatic activity and PON1 gene expression. In addition, total protein content of HepG2 cells was also measured. Resveratrol in a dose of 15 μmol/l or above significantly increased the PON1 enzyme activity (p > 0.001) where as nicotine in a dose of 1 μmol/l or higher significantly reduced it (p < 0.05). The resveratrol in this dose also enhanced the PON1 gene expression whereas nicotine decreased it as compared to controls. However, the protein conent of cells was not changed suggesting that they were not cytotoxic in the doses used. Till date the antioxidant vitamins have shown disappointing results against LDL oxidation and cardiovascular protection. However, the effect of resveratrol on PON1 gene expression and activity was significant, suggesting increase in PON1 activity and enhanced gene expression may be its alternative mechanism for offering protection against cardiovascular disease and may be an potential pharmacological agent which can be used for this.