人甲胎蛋白基因的克隆和表达

目的 构建表达人甲胎蛋白(AFP)的重组质粒，并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 用PCR方法从人胎肝组织中扩增AFP基因片断，将其转入原核载体质粒pCEMEX-1，在大肠杆菌DH5α中克隆，并在BL21DE3中表达。结果 重组质粒pCEMEX-AFP的AFP基因序列经分析与GenRank公布序列相符，各表达的蛋白经Western Blot检测有抗原性。结论 基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效的肿瘤抗原。     

青霉素类抗生素人工抗原制备与鉴定

选用青霉素类抗生素中的两种药物——青霉素G和氨苄青霉素,作为半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)通过不同的化学方法偶联合成了三种人工免疫抗原。三种抗原分别为BP-BSA(生理学法)、AP-BSA(生理学法)和AP-BSA(戊二醛法)。通过紫外、红外扫描和SDS-聚丙烯酰胺电泳法对三种合成抗原进行鉴定,发现半抗原与载体蛋白的偶联率为11∶1~12∶1。将合成的这三种抗原分别免疫9只新西兰大白兔,并用ELISA检验免疫后的兔子,发现其血清中分别产生了相应抗体,表明三种人工抗原合成成功。这为下一步获得针对青霉素类核特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。     

马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Westem blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白.以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1:13,000.     

基于荧光免疫分析的血清标志物抗原快速检测实验研究

针对传统血清标志物抗原快速检测实验,一直处在检测实验过程复杂,结果不明确的问题,提出并设计了基于荧光免疫分析方法进行血清标志物抗原快速检测实验,为乙型肝炎病毒的预防提供依据。选择某大型医院门诊与住院的乙型肝炎患者血清633份,另取50例健康血清作为对照,通过荧光免疫分析方法对血清标志物抗原进行检测。结果发现,血清标志物表面模式共有12种,男性是女性的2倍左右,大三阳在青少年中感染比率很高,城镇和农村受试者HBsAg、抗-Hbc阳性相差较大,父母是否携带HBV受试者血清不同模式阳性检出率相差很大,大三阳和小三阳抗原阳性率有统计学差异。采用荧光免疫分析得到的LLD、BLD值更低,FS值更高,ARM范围更广,与真实检测值之间的一致性程度更强,说明荧光免疫分析方法敏感度、可靠性范围以及检测准确性均很高。     

阿莫西林人工抗原的制备及鉴定

目的:建立阿莫西林人工抗原的制备及鉴定方法。方法:将阿莫西林半抗原通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法分别与大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和牛甲状腺球蛋白(BTG)相偶联,合成完全的免疫抗原AMO-BSA和检测抗原AMO-BTG。利用紫外-可见分光光度法和动物免疫实验对合成的阿莫西林人工抗原进行鉴定。结果:紫外分光光度法扫描出AMO-BSA和AMO-BTG的紫外吸收峰分别为276nm和275nm;动物免疫法的血清效价均高于阴性和空白对照。结论:该制备方法通过鉴定是有效可行的。     

免疫PCR技术及进展

随着聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)技术的发展,对于核酸的超灵敏检测已成为常规手段,检测能力已经达到单分子水平;但是蛋白质的常规检测,例如酶联免疫吸附实验(ELISA)技术,检测限也仅仅达到1×10-18mol,与超灵敏检测存在相当差距。免疫PCR方法(immunopolymerasechainreaction,immuno-PCR)是SanoT,SmithCL和CantorCR等于1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术,同时具有抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增技术的高效性。它运用P C R强大的扩增能力来放大抗原-抗体特异性反应的信号,使实验中只…     

重金属汞人工抗原的合成与鉴定

选用还原谷胱甘肽作为双功能螯合剂,与牛血清白蛋白偶联,成功螯合了Hg2+,制备汞完全抗原.通过等离子电感耦合法检测抗原与包被原中Hg2+的含量,采用考马斯亮蓝法及SDS-PAGE对抗原进行定性鉴定,并且用TNBS法测定氨基替换率.鉴定完成后用该抗原免疫动物,采用Hg-青霉素-O-VA、青霉素-OVA作包被原检测血清效价,效价大于1:160000.为制备重金属汞螫合物抗原特异性单克隆抗体提供新途径,为重金属免疫检测技术提供技术依托.     

乙型肝炎病毒子宫内传播的研究

对15例HBsAg阳性(RPHA法)母亲的16例流产死胎开胸后心脏穿刺采血,并采集胎肝组织。应用ELISA检测胎儿血清HBsAg及IgM抗HBc,并检测胎儿血清HBV DNA多聚酶活力;免疫电镜法检测胎儿血清及肝匀浆中HBV抗原颗粒;将10％中性福尔马林固定、石蜡包埋的胎肝组织应用未标记的PAP法(DAKO PAP kit)检测肝细胞的HBsAg及HBcAg。结果以免疫电镜从其中7例胎儿血清及肝匀浆中查到HBsAg抗原颗粒,其中5例血     

血清CA199、CA724、CEA联合检测在结直肠癌患者TNM分期中的应用

目的:探讨血清糖类抗原CA199糖类抗原CA724癌胚抗原CEA在结直肠癌的TNM分期中的临床应用价值。方法:观察组结直肠癌患者100例与对照组同期非消化道肿瘤的住院病人100例,空腹抽取静脉血,采用罗氏公司E601电化学发光全自动免疫分析仪和罗氏原装试剂盒检测血清中CEA、CA199、CA724值。应用SPSS 17.0软件进行统计学处理,计量资料以均数±标准差f±s)表示,采用单因素方差分析进行统计,计数资料采用X-2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果:在单项检测中,CEA的敏感率最高,达37%,且CEACA199CA724.在两项联合检测中CA199+CEA的敏感度最高达53%,三项联合检测敏感度达64%,在各种联合检测中最高。三项肿瘤标志物的阳性率和升高水平随肿瘤的TNM分期的增加而递增。结论:三项肿瘤标志物的单一检测敏感度较低,肿瘤标志的联合检测结直肠癌可以提高敏感性,以CEA+CA199+CA724的效果最好,CA199+CEA次之。CA199、CA724、CEA三项肿瘤标志物的阳性率及升高水平依肿瘤的TNM分期的增加呈递增趋势。     

肺癌血清标志物CK19单克隆抗体制备及初步应用

同肺癌相关的血清标志物CK19,其存在或量变不仅可以指示肿瘤性质,还可以指导肿瘤的诊断、分类、预后以及治疗。本次研究使用BALB/C小鼠进行免疫(使用CK19的重组抗原),血清滴度进入平台期后将骨髓瘤细胞与前期经过免疫的小鼠脾细胞融合,进一步将细胞克隆化,共得到6株杂交瘤细胞株(能持续稳定分泌抗CK19抗体)。对6株抗CK19的单抗株进行腹水诱导和扩大培养,并将诱导得到的腹水进行纯化,采用亲和层析法。为获得一个最灵敏的双抗体夹心单抗配对,将纯化后的单抗株做正交配对的筛选并制备酶标抗体。最终获得了最优配对:11E6+16A5-HRP。灵敏度分析的检测结果显示,该配对对CK19重组抗原的检测灵敏度为15.6ng/ml。     

影响食品安全的食源性致病菌快速检测技术研究进展

食源性致病菌是影响食品安全的主要因素之一。传统的以培养为基础的检测方法操作复杂、特异性不强、所需时间长,而近年来发展起来的免疫学方法及分子生物学方法广泛应用于食源性致病菌的检测,克服了传统检测方法的不足。目前常用的免疫学方法主要包括ELISA、免疫磁性分离技术和免疫胶体金技术等;分子生物学方法则主要有依赖PCR的DNA指纹图谱技术、多重PCR、基因芯片、定量PCR和NASBA等技术。     

中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆及其表达

应用RT-PCR技术从小麦病叶中扩增得到中国小麦花叶病毒(CWMV)的运动蛋白(MP)基因,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中得到大量表达,并以含表达产物的凝胶为抗原,免疫小鼠制备特异性抗血清,同时将MP基因重组到质粒pGBKT7中,电击转化酵母Y187菌株。Westernblot分析表明MP基因在酵母体内能以融合蛋白的形式正确表达,并具有免疫活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。     

肺炎衣原体膜表面蛋白重组质粒的构建

目的 构建表达肺炎衣原体膜表面蛋白(OMP)的重组质粒，并在火肠杆菌中表达获得基因重组蛋白．方法用高保真PCR方法从肺炎衣原体扩增OMP片段．双酶切后插入原核表达质粒pQE-30，在大肠杆菌M15中表达，结果重组质粒经双酶切鉴定与目的基因长度相符；各表达蛋白经SDS-PAGE分析，相对分子量与文献相符．结论该重组质粒可用于核酸疫苗的备选质粒，基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于肺炎衣原体检测试剂盒的制备。     

科技杂志要览

用亲和层析法纯化人精浆蛋白Purificationofhumanγseminoproteinwithaffinitychromatography摘要:[目的]用亲和层析法从增生的前列腺组织中纯化人精浆蛋白(γ-seminoprotein,γ-sm).[方法]采用超声波粉碎、NP-40提取与两种免疫亲和层析相结合[抗人精浆蛋白单抗(E4B7mAb)亲和层析和蛋白A亲和层析]的新提纯方案,获得了高纯度γ-sm抗原.[结果]所纯化的γ-sm蛋白经ELISA双抗夹心法和免疫印迹分析检测证明,用此法从增生的前列腺组织中分离到γ-sm抗原,而且纯化的γ-sm具有生物活性.[结论]这种方法的建立将为分离γ-sm抗原提供一种有效途径,…     

PCR技术在食品检验中的应用

近年来,由微生物及其产生的各类毒素引发的食品污染层出不穷,PCR技术以其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,广泛地应用在食品微生物检测的各个领域,尤其对培养困难的细茵检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面。简要介绍了几种PCR方法的原理,以及其在食品微生物检测中的应用情况。     

拟除虫菊酯类农药免疫分析人工抗原研究进展

拟除虫菊酯农药免疫分析方法是近年来发展的农药残留测定新技术,人工抗原的合成是该分析技术的关键。本文综述了拟除虫菊酯农药人工半抗原的合成进展、半抗原与载体蛋白的结合方法,并对半抗原合成及此类农药通用抗体的研究作了展望。     

靶向IL18-EGF融合蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性研究

人白介素-18(human interleukin 18,hIL18)基因与表皮生长因子受体干扰序列(EGFloop C sequence,EGF)构建IL18-EGF融合基因,利pET32a/E.coli BL21(DE3)表达IL18-EGF融合基因,通过纯化获得有活性的靶向的IL18-EGF融合蛋白,并进行体外细胞试验评价IL18-EGF融合蛋白的抗肿瘤活性.结果表明IL18-EGF融合蛋白能促进人PBMNC的增殖,诱导KG-1细胞分泌IFN-γ、促进肿瘤抗原诱导的B细胞、NK及其CD4+T细胞的活化.     

PCR技术在食品微生物检测中的应用探究

食品的微生物检测工作一直以来都备受关注,其检测技术的应用就成为重点。一般来说,PCR技术是比较常见的检测方式,主要是由于这一技术本身具有较高的灵敏度,而且其特异性也比较突出。因此,在食品微生物检测工作中得到了高效地应用。另外,PCR技术还可以对细菌的抗原结构进行鉴定,根据检测的相关的原理,可以俩接到食品中微生物的基本情况。本文中,主要对这一技术的应用请款进行介绍和分析,希望能够给食品检验的工作人员提供帮助。     

蜡状芽孢杆菌毒株的致病机理及检测方法

蜡状芽孢杆菌系无荚膜的革兰氏阳性菌,是最常见的食源性病原菌之一。致病性菌株能产生呕吐毒素和肠毒素,临床上可分为致呕吐型和腹泻型。研究病原性蜡状芽孢杆菌的致病机理,有助于了解其致病途径,从而改进和完善检测方法和诊治途径。通过综述蜡状芽孢杆菌几种毒素的致病机理,整理了一套蜡状芽孢杆菌致病毒株的鉴定检测技术方法:用鉴定平板等传统的鉴定方法将蜡状芽孢杆菌检出,应用先进的PCR和免疫方法检测毒素基因及毒蛋白,通过荧光多重PCR提高灵敏度和准确性等,以期加强食品安全。     

环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB／c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1：1．28×10^3,单抗腹水效价达1：1．024×10^6,IC50为68．31ng／mL,属于IgM型,轻链kappa,CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。