细胞死亡的几点释疑

结合教材和相关文献,对细胞死亡、细胞凋亡和细胞自噬中的疑难知识进行了释疑,阐明细胞程序性死亡不仅仅有细胞凋亡,还包括细胞自噬;细胞凋亡、细胞自噬都与环境无关;细胞自噬不一定会促进细胞凋亡等疑难问题。     

姜黄素抑制Wnt信号通路对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究姜黄素对经典Wnt信号通路活性的调控作用,探讨姜黄素在体外对人胰腺癌细胞SW1990增殖凋亡、β-catenin蛋白表达以及下游相关靶基因表达的影响.方法:应用MTT法检测不同浓度姜黄素(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)对人胰腺癌细胞SW1990增殖的抑制作用,用流式细胞仪分析细胞的凋亡率,用Western Blot方法检测姜黄素对β-catenin蛋白表达的影响,用半定量PCR法检测靶基因c-myc、VEGF和cyclinD1在不同浓度姜黄素作用后表达情况的变化.结果:姜黄素作用于人胰腺癌细胞SW1990后,细胞增殖的水平明显下降,凋亡率升高,且呈剂量依赖性.Western Blot结果显示姜黄素能降低胞质蛋白β-catenin的水平.姜黄素抑制SW1990细胞内Wnt信号通路下游靶基因c-myc、VEGF以及cyclinD1的表达水平.结论:姜黄素能抑制胰腺癌细胞的增殖并促进凋亡(apoptosis),其机制与姜黄素下调经典Wnt信号通路中核心蛋白β-catenin的水平有关.     

基于网络药理学的威灵仙抗结直肠癌分子机制研究

目的:基于网络药理学方法探讨威灵仙抗结直肠癌可能的分子机制。方法:通过TCMSP数据库挖掘获取威灵仙活性成分,限定口服利用度(OB)和类药性(DL)数值对威灵仙活性成分进行筛选。利用TCMSP搜索威灵仙相关靶基因,GeneCards数据库收集与结直肠癌相关的基因,采用Cytoscape Version 3.7.1软件,构建威灵仙活性成分-抗结直肠癌靶点网络。使用String数据库构建蛋白质相互作用网络。使用Bioconductor数据库对威灵仙抗结直肠癌作用靶点进行基因本体(GO)富集分析与KEGG通路分析,以探究威灵仙抗结直肠癌的作用机制。结果:收集到57种化合物,经筛选和分析获得威灵仙活性成分7个,涉及抗结直肠癌作用靶点30个,关键靶点包括CASP3、JUN、ADRA1B、MAOA等。GO功能富集分析得到GO条目55个,KEGG通路富集筛选得到61条信号通路,包括凋亡通路、p53信号通路、结直肠癌信号通路等。结论:威灵仙治疗结直肠癌具有多通路、多靶点作用的特点,其具体的调控机制及关键的靶标尚待通过进一步的实验研究加以探索及验证。     

猪圆环病毒3型衣壳蛋白通过抑制雷帕霉素靶蛋白的磷酸化诱导HEK293T细胞自噬（英文）

目的:探明猪圆环病毒3型衣壳(Cap)蛋白如何诱导细胞自噬。创新点:首次证明猪圆环病毒3型Cap蛋白诱导细胞自噬,泛素-蛋白酶体途径也参与其中。方法:构建过表达猪圆环病毒3型Cap蛋白的真核表达载体,转染HEK293T细胞,采用免疫印迹检测LC3、p62和m TOR等自噬通路的关键分子。利用激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜,观察表达Cap蛋白的细胞是否有EGFP-LC3B点状聚集和自噬泡生成。利用氯喹抑制溶酶体酸化,探究衣壳蛋白是否诱导完整的自噬流。利用MG132抑制蛋白酶体途径,探究泛素-蛋白酶体途径是否参与自噬过程。结论:猪圆环病毒3型Cap蛋白通过抑制雷帕霉素靶蛋白的磷酸化诱导HEK293T细胞自噬,泛素-蛋白酶体途径也参与这一过程。     

新城疫病毒感染对小鼠肉瘤S180细胞p53蛋白的表达及细胞周期的影响

目的:研究新城疫病毒(NDV)感染对小鼠肉瘤S180细胞p53蛋白的表达及细胞周期的影响。方法:通过NDV体外感染小鼠肉瘤S180细胞,经倒置显微镜观察细胞形态变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠肉瘤S180细胞的增殖状况;经流式细胞仪分析检测NDV体内感染后荷瘤鼠腹水中S180细胞分裂周期各时相的变化、细胞凋亡情况及细胞表面p53蛋白的表达情况。结果:NDV体内、外感染对小鼠肉瘤S180细胞的杀伤作用明显,NDV体内感染后荷瘤鼠腹水中S180细胞高表达p53蛋白,细胞凋亡率增加,G2/S期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:NDV感染可增强小鼠肉瘤S180细胞p53蛋白的表达,影响其细胞周期,诱导其凋亡且有较强的杀瘤作用。     

浙江省科学技术奖获奖项目展示

<正>【浙江省自然科学奖一等奖获奖项目展示】缺血性脑损伤的药物治疗新靶点及意义主要完成人:陈忠、胡薇薇、张翔南、戴海斌、张世红主要完成单位:浙江大学课题组针对缺血性脑损伤的早期药物治疗新靶点和新策略展开系列的研究:1.发现组胺的多靶点、多环节抗缺血性脑损伤的作用,并发现组胺H3受体发挥生物学作用的新模式,其拮抗剂可以通过非组胺依赖的途径诱导细胞自噬、减少神经元凋亡。2.以炎症为靶点的早期治疗慢性缺血性脑损伤的     

地塞米松对胎鼠腭突中嵴上皮融合的影响

目的:研究地塞米松对胎鼠腭突中嵴上皮(Medial Edge Epithelium,MEE)细胞凋亡、增殖和分化的影响,以探讨地塞米松引起腭裂畸形的发病机制.方法:以醋酸地塞米松诱导胎鼠腭裂畸形,应用免疫组化法和图像分析研究MEE细胞中 bcl-2和p53基因在不同时期中实验组与对照组的表达情况.结果:实验组在GD13.5～16.5(GD,gestation day)MEE细胞的bcl-2 与p53表达总体维持增高趋势;GD13.5 MEE细胞的bcl-2 与p53表达实验组与对照组均无明显差别;GD14.5 MEE细胞的bcl-2与p5表达实验组明显多于对照组(P<0.01).结论:地塞米松诱发腭裂出现MEE细胞凋亡减少,通过改变MEE细胞中bcl-2和p53基因的表达而实现对MEE细胞增殖与凋亡的调控是地塞米松引起腭裂可能机制之一.     

陈皮心血管药理作用的网络解析

基于网络药理学探究陈皮治疗心血管疾病的作用机制.依托TCMSP数据库、DTPS靶点预测系统筛选陈皮活性成分及其潜在作用靶点,从GeneCards、DisGeNET、OpenTargets等数据库收集心血管疾病治疗靶点,将2类靶点进行交互处理得到陈皮治疗心血管疾病的靶点;借助Cytoscape 3.7.2软件构建活性成分-靶点网络;应用String平台构建靶蛋白互作网络;利用ClueGO插件富集靶基因GO生物学类型;运用DAVID (Version 6.8)平台分析靶基因KEGG通路,结合Omicshare数据库绘制KEGG通路气泡图.陈皮11个药效成分作用于PPARG、IL1B、ICAM1、VCAM1、PLG、APOB、F2、SOD1等32个心血管疾病治疗靶点;参与活性氧生物合成、脂质代谢正调控、血液凝固、平滑肌细胞增殖调控、活性氮代谢、氧化还原酶活性调控、血压调节等,涉及血脂代谢、心血管调节、血凝调控、炎症、内分泌相关的16条通路.陈皮通过抗炎、抗氧化、抗凝、保护心肌以及调节血脂等药理作用治疗心血管疾病.     

应用网络药理学预测白芍抗血吸虫病及肝纤维化的作用机制

运用网络药理学方法预测白芍抗血吸虫病及肝纤维化的作用机制。通过TCMSP数据库对白芍主要活性成分及靶点进行筛选,通过GeneCards数据库检索血吸虫病及肝纤维化相关靶点,利用Cytoscape 3.8.2软件构建药物-成分-靶点-疾病网络图,利用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,采用R语言对药物-疾病共同靶点进行GO和KEGG富集分析。筛选得到白芍中的活性成分有13个,白芍抗血吸虫病及肝纤维化的靶点有16个,PPI网络包含15个蛋白质,涉及JUN、PTGS2和CAT等。白芍抗血吸虫病及肝纤维化的通路主要有脂质和动脉粥样硬化,糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路,肿瘤坏死因子信号通路和NF-kappa B信号通路等。初步预测白芍抗血吸虫病及肝纤维化的作用机制,为其深入研究提供新思路及理论依据。     

细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术

目前普遍认为细胞的死亡途径有细胞凋亡、细胞坏死及自噬3种,其中细胞凋亡一直是医学界为治疗癌症而不懈努力研究的方向,而自噬是近几年研究的热点.现对这3种死亡方式及其各自的检测方法作一简要概述.     

FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路抑制胶质母细胞瘤侵袭性并促进替莫唑胺化疗敏感性（英文）

为了探索FOXO1在胶质母细胞瘤（GBM）进展和化疗耐药中的作用和机制,本研究采用体外细胞学实验和动物实验分析FOXO1和mi R-506对GBM细胞系U251增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬和替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的影响,并通过双荧光素酶报告实验分析FOXO1与mi R-506相互作用的靶点。结果显示：FOXO1-miR-506轴可抑制GBM细胞侵袭和迁移能力,并促进其对TMZ的化疗敏感性,且自噬参与其中;FOXO1作为转录因子可与mi R-506启动子区域相结合并上调其表达;此外,mi R-506可结合在E26转录因子-1(ETS-1)3’-UTR区并下调ETS1表达,而ETS1可促进FOXO1从细胞核向细胞浆转移进而抑制FOXO1-miR-506轴。裸鼠动物实验结果显示,过表达FOXO1可促进GBM对TMZ的化疗敏感性,但mi R-506抑制剂和过表达ETS1均可逆转该现象。综上所述,FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路参与GBM侵袭性和化疗敏感性的调节,可作为GBM治疗的潜在靶点。     

比较转录组学分析揭示阿霉素经p53信号通路诱导视网膜色素上皮细胞凋亡（英文）

目的:通过比较阿霉素(ADR)作用的视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)和正常ARPE-19间的差异表达基因和信号通路,探究ADR治疗玻璃体视网膜增殖性疾病的潜在机制。创新点:首次运用基因芯片技术通过比较转录组学分析探究ADR促进ARPE-19细胞凋亡的机制。方法:采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法和碘化丙啶(PI)单染结合流式细胞术检测ADR对ARPE-19细胞的增殖抑制作用;通过基因芯片技术筛选ADR作用的ARPE-19细胞(实验组)和正常ARPE-19细胞(对照组)间的差异表达基因和相关信号通路;用JC-1染色结合流式细胞术和Bcl2/Bax蛋白表达比率检测线粒体功能;通过检测γ-H2AX、p-CHK1、 p-CHK2等蛋白表达量分析DNA的损伤和修复。结论:ADR通过启动DNA损伤反应,引起p53信号通路依赖的线粒体功能失调并激活caspase依赖的凋亡,最终导致ARPE-19细胞死亡。     

组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂西达本胺联合维奈托克通过下调MYC、BCL2和TP53的表达协同抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤的生长（英文）

目的：探讨表观遗传学组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂西达本胺与BCL2抑制剂维奈托克的联合对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生长的影响及相关机制。创新点：本研究首次探索了将西达本胺和维奈托克联合作用于MYC⁺/BCL2⁺DLBCL,使用二代测序(NGS)开创性地从表观遗传学和基因蛋白层面探讨这种联合用药的效果及作用机制。方法：利用生物信息学技术分析表观遗传学HDAC基因与BCL2基因之间的相关性;体外应用DHL细胞株DB(MYC/BCL2重排)和DEL细胞株SUDHL-4(MYC、BCL2表达)分别进行单药和联合用药处理,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,RNA测序和蛋白质印迹(westernblot)检测MYC、BCL2、TP53等相关基因的m RNA水平及蛋白的表达;体内建立DLBCL异种移植小鼠模型进行单药和联合用药治疗,分析并评价药物治疗后皮下瘤的大小和病理切片。结论：西达本胺与维奈托克协同抑制DLBCL的生长,通过调控表观遗传的改变,沉默MYC、TP53的表达,降低抗凋亡蛋白BCL2表达以及增加促凋亡蛋...     

对2016年诺贝尔生理学或医学奖的解读与讨论

<正>由于诺贝尔生理学或医学奖代表着生物学某些方面最新的进展,其获奖成果历来都是人们关注的焦点,也是高考生物试题取材的一个重点和热点,备受青睐。2016年诺贝尔生理学或医学奖授予了日本科学家大隅良典(Yoshinori Oh8umni),以表彰他发现了细胞自噬的机制。在中学生物学知识中,细胞凋亡是否属于细胞自噬呢?细胞自噬与溶酶体有什么关系呢?……针对这些问题,本刊互动平台(http://     

细胞凋亡的研究

本文介绍了细胞凋亡的概念及生物学特征,讨论了bcl-2、c-myc、P_(53)、Fas等相关基因在细胞凋亡中的作用,细胞凋亡在医学生物学中的意义,及细胞凋亡的研究方法。     

Gga-miR-29b-3p抑制MDV转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达

目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响.方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析.以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MM P2和MM P9以及MDV原癌基因Meq的表达情况.结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达.信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程.转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05).结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRN A可能参与M D肿瘤转化过程.     

肿瘤发生过程中自噬与凋亡关系的研究

自噬是一种在进化上保守的真核细胞内的转运泡的运输机制,它可将细胞本身的亚细胞成分如蛋白、胞质或细胞器,通过溶酶体中的水解酶进行消化降解和循环。近期研究发现,自噬与凋亡相互作用可以从多种途径参与和调控肿瘤的发生及发展。本文对肿瘤发生过程中自噬与凋亡的关系作一综述。     

miR-431-5p通过MAPK/ERK通路促进食管鳞癌细胞增殖和迁移

为了检测miR-431-5p在食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的表达,探讨其功能,利用TCGA公共数据库分析miR-431-5p在食管癌中的表达,通过RT-qPCR检测miR-431-5p在组织和细胞中表达;再利用miR-431-5p模拟物和抑制剂,通过CCK-8实验、细胞划痕和Transwell实验以及蛋白免疫印迹实验,检测miR-431-5p对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及分子作用机制。结果显示：miR-431-5p在食管癌中高表达;转染miR-431-5p模拟物后,KYSE30细胞增殖率、迁移率和侵袭率分别增加了24.19%,30.86%和50.29%(P<0.05);而转染miR-431-5p抑制剂后,TE-11细胞数量、迁移率分别降低了21.43%和9.52%(P<0.05);miR-431-5p模拟物增加KYSE30细胞p-ERK表达量11.68%;miR-431-5p抑制剂降低TE-11细胞p-ERK表达量45.73%。研究结果表明：miR-431-5p通过MAPK/ERK通路促进ESCC细胞...     

淀粉样前体蛋白通过抑制线粒体凋亡通路调节人肝癌细胞对5-氟尿嘧啶的抗性（英文）

目的:探讨淀粉样前体蛋白(APP)是否与肝癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的过程相关,并探索其发挥作用的分子机制。创新点:首次探索并初步证实APP通过影响线粒体凋亡通路信号的传递可以促进肝癌5-FU耐药。方法:为探究肝癌中APP与5-FU耐药性之间的关系,我们构建了APP沉默和过表达的Bel7402细胞系,并进行了细胞活性检测、细胞凋亡和细胞周期、蛋白质印迹和荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)等实验,验证过表达或沉默APP时,肝癌细胞的状态变化,以及APP发挥作用的分子机制。结论:与Bel7402细胞相比,耐药细胞Bel7402-5-FU中APP的表达明显上调。在Bel7402细胞中过表达APP降低了细胞的5-FU敏感性,而沉默Bel7402细胞的APP表达提升了细胞对5-FU的敏感性。从机制上讲,APP的过表达和沉默可以调节线粒体的凋亡途径和凋亡抑制基因(BAX、BID、Bcl-2和Bcl-xl)的表达,并进一步影响细胞凋亡的进程。综上所述,我们的结果初步表明APP在肝癌耐药过程中显著上调,APP能够通过影响线粒体凋亡通路调节肝癌细胞的5-FU敏感性,这为研究肝癌耐药机制提供了新的视角。     

温州医科大学发现结构改造后的姜黄素或能治疗糖尿病并发症

据2014年11月7日《科技日报》报道,温州医科大学药学院研究团队首次揭示小分子化合物单羰基姜黄素类似物(MACs)(C66)对糖尿病心肌病防治作用和药理机制,提出C66直接作用的靶点是JNK2(氨基末端激酶2)。C66通过抑制JNK2,一方面降低高糖引起的炎症反应;另一方面有效缓解炎症因子引起的心肌细胞凋亡,从而达到保护糖尿病患