FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路抑制胶质母细胞瘤侵袭性并促进替莫唑胺化疗敏感性（英文）

为了探索FOXO1在胶质母细胞瘤（GBM）进展和化疗耐药中的作用和机制,本研究采用体外细胞学实验和动物实验分析FOXO1和mi R-506对GBM细胞系U251增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬和替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的影响,并通过双荧光素酶报告实验分析FOXO1与mi R-506相互作用的靶点。结果显示：FOXO1-miR-506轴可抑制GBM细胞侵袭和迁移能力,并促进其对TMZ的化疗敏感性,且自噬参与其中;FOXO1作为转录因子可与mi R-506启动子区域相结合并上调其表达;此外,mi R-506可结合在E26转录因子-1(ETS-1)3’-UTR区并下调ETS1表达,而ETS1可促进FOXO1从细胞核向细胞浆转移进而抑制FOXO1-miR-506轴。裸鼠动物实验结果显示,过表达FOXO1可促进GBM对TMZ的化疗敏感性,但mi R-506抑制剂和过表达ETS1均可逆转该现象。综上所述,FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路参与GBM侵袭性和化疗敏感性的调节,可作为GBM治疗的潜在靶点。     

大豆降解组文库microRNAs的启动子分析(英文)

研究目的:通过分析miRNA的核心启动子和顺式作用元件为进一步解析大豆(Glycine max)miRNAs表达调控及其功能研究提供重要信息。创新要点:利用生物信息学方法全面解析了大豆降解组文库miRNA的启动子特征,并依据顺式作用元件及靶基因构建了miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控网络。研究方法:本研究利用TSSP程序和PlantCARE数据库预测了来自大豆降解组文库的440个miRNA的核心启动子以及369个miRNAs的顺式作用元件,并依据顺式作用元件及靶基因构建miRNA调控网络。重要结论:83.86%的miRNA在其上游序列中含有启动子,8.64%的miRNA在其下游序列中含有启动子,21.59%的miRNA包含增强子。核心启动子的TATA盒与转录起始位点(TSSs)的分布相似。此外,对转录起始位点5'端的顺式作用元件预测为miRNAs的可能功能和表达的时空性提供了线索。miRNAs的顺式作用元件和靶基因的分析显示,部分miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控。     

CBR1基因启动子在猪子宫内膜细胞的功能研究（英文）

目的:研究CBR1基因启动子在猪子宫内膜细胞的表达调控机制。创新点:发现CBR1基因启动子在猪子宫内膜受到炎性因子核转录因子kappa B(NF-κB)成员p65调控。p65对该启动子具有正向调节作用,但是对于CBR1基因的表达并不是必需的。方法:通过双荧光素酶报告基因载体确定CBR1基因启动子转录活性区,通过染色质免疫沉淀(Ch IP)技术确定p65能够结合CBR1基因启动子,通过超表达和干扰表达实验证实p65对CBR1基因启动子的调控作用。结论:猪CBR1基因启动子-1640/-647区对于其转录活性是必需的,在-1545/-1531区存在p65的结合位点。p65在猪子宫内膜细胞中促进了CBR1基因mRNA的表达,但是干扰p65则不会造成CBR1基因mRNA表达量下降,推断p65不是CBR1基因表达的必需因素。     

柚皮苷通过HIF1A通路抑制结肠癌的有氧糖酵解（英文）

代谢重编程是癌症中一种常见的现象,而有氧糖酵解是其重要特征之一。缺氧诱导因子1亚基（HIF1Α）被认为在有氧糖酵解中发挥重要作用。柚皮苷是一种从葡萄柚和柑橘类水果中提取的天然的黄酮糖苷。在本研究中,我们通过分析结肠癌数据库,确定了与HIF1Α相关的糖酵解基因。通过进行细胞外酸化率和细胞功能的实验,证实了过表达HIF1Α对糖酵解以及结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。此外,我们用柚皮苷作为结肠癌细胞的抑制剂来阐明其对HIF1Α功能的影响。结果显示,结肠癌组织中HIF1Α和烯醇酶-2(ENO2)水平高度相关,其高表达提示结肠癌患者预后较差。HIF1Α直接与DNA启动子区域结合,上调ENO2的转录;而ENO2的异常表达增加了结肠癌细胞的有氧糖酵解水平。最重要的是,一定浓度的柚皮苷抑制了HIF1Α的转录活性,从而降低了结肠癌细胞的有氧糖酵解水平。总之,柚皮苷通过降低HIF1Α的转录活性来减少结肠癌细胞的糖酵解以及结肠癌细胞的增殖和侵袭。本研究有助于阐明结肠癌的进展与糖代谢之间的关系,并证明柚皮苷对结肠癌的治疗效果。     

农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理研究

该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。     

人WRAP53基因启动子区的生物信息学分析

人WRAP53基因隶属于WD重复蛋白家族,被发现在端粒酶的组装、卡哈尔体的形成和DNA损伤的修复等过程中发挥着重要作用,但WRAP53基因表达调控的分子机制尚不明确.利用生物信息学软件对人WRAP53基因近端启动子-2 000 bp～-1 bp区域的结构特征、转录因子结合位点和CpG岛进行预测分析.Promotor 2.0和NNPP均预测出人WRAP53β基因有2个启动子;JASPAR和AliBaba 2.1发现有众多转录因子潜在结合位点存在该序列上;CpG Plot、CpG Finder和MethPrimer软件均预测出人WRAP53基因启动子-2 000 bp～-1 bp区域存在1个CpG岛.对人WRAP53基因启动子区开展的生物信息学分析,有助于了解该基因启动子区的结构和功能,为后续开展人WRAP53基因表达调控机制研究奠定了基础.     

山羊TTF-1基因的表达及其分子生物学特性

甲状腺转录因子-1(TTF-1)是NKx组织特异性转录因子家族中的一员.TTF-1基因可能是调节哺乳动物初情期的关键基因.采取山羊的甲状腺、下丘脑、垂体、大脑、卵巢等与青春期发育和繁殖性能有关的组织样,采用RT-PCR方法来检测TTF-1基因在以上组织中的表达特性.结果表明:TTF-1基因在甲状腺、下丘脑、垂体、大脑、卵巢中均有表达,为进一步研究山羊TTF-1基因及其对哺乳动物繁殖性能的影响提供理论基础.     

调控HIV-1转录和潜伏激活的机制及相关因子(英文)

(1)反式激活蛋白(Tat)是病毒复制的重要因子,正性转录延伸因子b(P-TEFb)是Tat反式激活HIV-1转录所必需的特异性宿主细胞因子,其活性与HIV-1的转录密切相关。(2)在细胞内,无活性7SK snRNP复合体是功能性有活性P-TEFb的贮存和来源。在特定条件下,7SK snRNP复合体发生解离并释放出P-TEFb,从而刺激转录延伸。可以说,P-TEFb的活性受到严格的调控,维持着一种动态的平衡。(3)同时,P-TEFb还存在于一个具有超高转录活性的超级延伸复合体(SEC)中。Tat能将含有两个延伸因子P-TEFb和ELL2的SEC复合体募集至HIV-1长末端结构域(LTR),然后众多因子协同作用有效地增强HIV-1的转录作用。(4)溴区包含蛋白4(Brd4)像Tat一样,将P-TEFb募集至众多细胞基因的启动子区域,促进转录。Brd4也可激活基础水平的HIV-1转录,却对依赖Tat的HIV-1转录具有抑制作用,因为Brd4和Tat竞争性地与P-TEFb结合。(5)鉴于Brd4对Tat依赖性HIV-1转录的抑制作用,寻找能够抑制Brd4的小分子药物,激活HIV-1潜伏,结合高效抗逆转录病毒治疗(HAART),使得彻底根除HIV-1变成可能。Brd4的抑制剂JQ1就是这样的一种小分子,并且已被证明可以在多种细胞模型中激活HIV-1潜伏。     

植物转录调控因子NF-Y研究进展

NF-Y是在植物、动物和酵母细胞均存在的转录调节因子,由NF-YA、NF-YB以及NY-YC组成异源三聚体,在细胞核内结合在下游基因启动子上调节基因转录活性,或通过与核内其它蛋白的互作调节细胞生命活动.NF-YA(核因子Y,亚基A)是具有多种生物功能的植物转录调控因子,其与NF-YB、NF-YC组成异源三聚体,结合下游基因的CCAAT顺式元件,从而激活或抑制一些基因的表达. NF-YA、NF-YB和NF-YC参与植物体内许多生理过程,包括胚胎发育、种子发育及萌发、花的发育、根和根瘤发育以及各种逆境反应等重要的生理过程.本文就植物中转录调控因子NF-YA、NF-YB和NF-YC的基本结构特点、生物学功能,以及它们在植物响应生物和非生物胁迫方面的作用进行了综述.     

应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达

来大志、翁少洁、于长明、齐连权、付玲、于婷、陈薇在《生物化学与生物物理进展》2004年第2期撰文指出:表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要.而表达载体中最为重要的元件是启动子,一些常用病毒来源的启动子,如巨细胞病毒即早期启动子(PCMV-IE)仅在S期激活,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实.而人延伸因子1α亚基启动子(PEF-1α)不受细胞周期限制,且启动子强度高于PCMV-IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想.首先构建了基于PEF-1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5,在增     

镉暴露上调HMOX1表达的启动子相关活化区域鉴定

目的:检测Cd2+处理的He La细胞模型中HMOX1的表达变化,初步探索调控HMOX1转录的启动子的活化区域.方法:通过RT-PCR和Western Blot检测HMOX1m RNA与蛋白水平变化;通过系列报告基因检测初步鉴定HMOX1启动子的活化区域.结果:Cd2+处理的He La细胞模型中,和对照组0h相比,各处理组HMOX1 m RNA与蛋白水平变化显著上调,差异有统计学意义(P0.05);报告基因检测HMOX1-577-+92启动子片段荧光素酶相对活性显著低于其他组,差异有统计学意义(P0.05),HMOX1-120-+92启动子片段荧光素酶相对活性也显著降低,差异有统计学意义(P0.05).结论:Cd2+处理He La细胞模型中,HMOX1 m RNA与蛋白水平显著上调;HMOX1启动子-577~-470片段内存在抑制性转录因子结合位点,-692~-577和-272~-120片段内存在激活性转录因子结合位点.     

缺氧诱导因子(HIF-1α)与肿瘤病理的关系

缺氧是实体瘤生长中存在的普遍现象,它和肿瘤的发展、浸润和转移密切相关。缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子,HIF-1是由α亚基和β亚基组成的异源二聚体,HIF-1α代表HIF-1的活性,其表达与肿瘤增殖、侵袭和转移、肿瘤新生血管生成等特征密切相关。HIF-1α对临床的诊断和对癌症治疗手段和新药物的研发有着重要的应用价值,对HIF-1α的研究有着及其广阔的前景。     

鳡肌肉生长抑制素基因内含子和部分启动子序列的克隆与分析

采用PCR和染色体步移法克隆了鳡（Elopichthys bambusa）肌肉生长抑制素长789 bp的内含子1、987 bp的内含子2及长662 bp的部分上游启动子序列.同源性比对分析表明,鳡MSTN的内含子1、2与鲤科鱼类的同源性相对较高（内含子1：60.42%～67.21%;内含子2：40.00%～51.21%）,与其他鱼类、鸟类以及哺乳类动物的同源性则较低.生物信息学方法预测鳡MSTN的部分启动子序列中含有2个近转录起始点的TBP（TATA框）、2个CTF（CAAT框）、3个Sp1、10个C/EBP、4个Oct1、2个潜在AP1的结合位点,此外还存在1个GATA、3个HNF1、1个NF-κB和1个CREB等多种转录因子结合位点以及3个E-框.     

TaMyb2-Ⅱ的亚细胞定位研究

为了探明TaMyb2-Ⅱ转录因子在细胞中定位的特异性，采用瞬时表达体系，将绿色荧光蛋白基因GFP导入洋葱表皮细胞中，在亚细胞结构水平上研究TaMyb2-Ⅱ转录因子的定位取向。激光共聚焦显微镜观察结果表明，TaMyb2-Ⅱ转录因子主要分布在细胞核中,这为进一步研究该基因的功能及作用途经提供了重要信息。     

靶向TRMT5抑制HIF-1α信号通路调控肝癌进程（英文）

越来越多研究表明转运RNA(t RNA)修饰与肿瘤进程有关。本研究首次探索了线粒体t RNA G37位甲基化修饰酶TRMT5(t RNA甲基转移酶5)在肝细胞癌发生发展中的作用。生物信息学和临床分析发现TRMT5在肝癌组织中高表达且与预后不良相关。体内外实验表明TRMT5敲低可诱导肝癌细胞代谢重编程,减弱肝癌细胞的增殖和转移能力。进一步研究发现TRMT5敲低降低了肝癌细胞内缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的稳定性,进而抑制肝癌细胞生长与转移。此外,TRMT5敲低还导致肝癌细胞对阿霉素的敏感性增加。综上所述,本研究表明靶向TRMT5可以抑制肝癌进程并提升肝癌细胞对化疗药物的敏感性。因此,TRMT5是一个新的致癌候选基因,可以作为肝癌治疗的潜在靶点。     

缺氧诱导因子-1研究进展

缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是1992年Semenza和Wang[1]首先发现的,随后确立了HIF-1的结构,并证明了其cDNA的编码顺序.HIF-1普遍存在于人和哺乳动物细胞内,常氧下(21%O2)也有表达,但合成的HIF-1蛋白很快即被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解,只有在缺氧条件下HIF-1才可稳定表达[2].HIF-1是具有转录活性的核蛋白,具有相当广泛的靶基因谱,其中包括与缺氧适应、炎症发展及肿瘤生长等相关的近100种靶基因[3,4].当其与靶基因结合后,通过转录和转录后调控使机体产生一系列反应,有些反应尽管带有适应代偿性质,但也常给机体带来病理性损害,如低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)、肿瘤加速生长等.     

LINC00152在非小细胞肺癌中的作用（英文）

非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌病例的85%,其发生发展过程涉及复杂的基因调控网络,其中除了编码基因,还包括大量不同类型的非编码RNA,如长链非编码RNA(lnc RNA)。lnc RNA在人类癌症中的作用正在被深入研究,在NSCLC中的作用也日益受到关注。最近,在不同类型的肿瘤中发现了一个新的致癌lnc RNA:LINC00152(又被称为细胞骨架调节RNA)。LINC00152在NSCLC患者的肿瘤组织和外周血中高表达,并与患者的不良预后相关。上调LINC00152表达已被证实在体外能促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,并且在体内能促进裸鼠移植瘤的生长。本文综述了LINC00152在NSCLC中的作用及其机制。     

基于TNFα处理的小鼠原代血管内皮细胞鉴定心血管疾病相关的NF-κB调控的基因和microRNA（英文）

目的:鉴定与心血管疾病相关的核因子κB(NF-κB)调控的基因和小RNA(micro RNA),探讨疾病发生发展的机制。创新点:构建心血管疾病相关的NF-κB调控网络。方法:基于NF-κB转录活性差异的小鼠原代血管内皮细胞模型,采用基因芯片(Genechip)检测NF-κB调控的基因和microRNA。再通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)和生物信息学方法进行差异基因和microRNA的筛选、验证、功能注释,从而发现与心血管疾病相关的NF-κB调控的基因和microRNA。结论:在肿瘤坏死因子α(TNFα)处理的小鼠原代血管内皮细胞中:NF-κB调控77个基因,其中45个基因上调,32个基因下调。NF-κB还在TNFα处理的He La细胞中调控其中10个基因。通过q RT-PCR验证了NF-κB上调Egr1、Tnf和Btg2的表达。基因功能注释表明,许多NF-κB调节的基因聚类到经典的NF-κB参与的生物学过程。在TNFα处理的小鼠原代血管内皮细胞中还发现:NF-κB调控26个microRNA,其中21个上调,5个下调。进一步研究发现,7个NF-κB调控的microRNA还可能调控9个NF-κB调控的基因。最后通过检索数据库发现,5个NF-κB调控的基因和12个NF-κB调控的microRNA与心血管疾病相关。因此,本研究提升了对心血管疾病进展分子机制的理解。     

松江鲈 MyoD 基因 cDNA部分片段的序列和表达特征分析

生肌决定因子 MyoD 是生肌调节因子 MRFs 家族的一个重要成员,在基因转录调控中起着重要的作用.本实验通过 RT-PCR 和3’-RACE 等方法,以松江鲈肌肉总 RNA 为模板,扩增出957 bp 的 MyoD 基因部分序列,包含部分编码区长567 bp,编码翻译188个氨基酸残基,3’-UTR 区长390 bp.系统发育分析表明,松江鲈 MyoD 与奥尼罗非鱼亲缘关系最近.不同组织半定量分析显示,松江鲈 MyoD 在各种组织中均有表达,在心脏中表达量最高,预示着在不同组织中该基因的功能广泛     

AAZ2可通过靶向PDK1介导线粒体依赖的凋亡（英文）

大部分化疗药物可以促进活性氧（ROS）产生,同时ROS可以诱导细胞凋亡。本研究构建了一种有机砷化合物N-(4-(1,3,2-dithiarsinan-2-yl)phenyl)acrylamide(AAZ2),其可通过促进ROS产生诱导胃癌线粒体依赖的细胞凋亡。具体机制为AAZ2通过靶向丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)导致葡萄糖代谢改变和氧化应激,继而抑制PI3K/AKT/m TOR通路,最终激活半胱天冬酶（caspase）依赖的细胞凋亡。此外,体内实验也证实了AAZ2可以抑制胃癌移植瘤的生长。综上,在胃癌中,AAZ2可以通过靶向PDK1影响葡萄糖代谢及随后的氧化应激反应,抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,最终诱发线粒体依赖的细胞凋亡。