灵芝菌生物转化大豆异黄酮及其产物对结直肠癌细胞HTL-9的体外凋亡诱导研究（英文）

目的:通过灵芝菌生物转化大豆异黄酮,得到富含苷元及灵芝活性成分的多因子转化产物,并研究了转化产物对结直肠癌细胞HTL-9的体外凋亡诱导,初步探讨转化产物的抗癌活性及机理。创新点:灵芝是一种珍贵的药用真菌,大豆异黄酮的苷元物质也具有重要的药理活性,本文首次利用灵芝菌液体发酵的匀浆液生物转化大豆异黄酮,所得到的产物中大豆苷元与染料木素转化率高,同时还富集了灵芝菌的活性成分,并对转化产物的抗癌活性及机理进行了初步探讨。方法:首先利用灵芝菌液体发酵的匀浆体系生物转化大豆异黄酮(图1)。其次,对转化产物的抗癌活性进行研究,主要包括对癌细胞存活率(图2)、细胞凋亡(图3)及细胞周期分布(图4)的影响。最后,利用蛋白质印迹(Western-blot)与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对凋亡相关的基因和蛋白进行检测(图5和表2),初步探讨转化产物的体外抗癌机理。结论:本实验结果显示,转化产物中大豆苷元及染料木素的转化率分别为96.63%和87.82%,其中染料木素的含量可达(703.21±4.35)mg/g,同时转化产物中还富含了灵芝菌的活性成分。其次,对转化产物抗癌活性研究发现,其能有效降低HTL-9细胞的存活率,可通过将细胞阻滞于G1期而诱导细胞晚期凋亡。此外,转化产物(100μg/ml)还可明显上调Bax、Caspase-3、Caspase-8、Cyto-c和p53的表达量,而Survivin和NF-κB表达量发生明显下调。结果表明,转化产物主要通过线粒体途径诱导细胞凋亡,但同时还调控多个与凋亡相关的基因。     

植物转录调控因子NF-Y研究进展

NF-Y是在植物、动物和酵母细胞均存在的转录调节因子,由NF-YA、NF-YB以及NY-YC组成异源三聚体,在细胞核内结合在下游基因启动子上调节基因转录活性,或通过与核内其它蛋白的互作调节细胞生命活动.NF-YA(核因子Y,亚基A)是具有多种生物功能的植物转录调控因子,其与NF-YB、NF-YC组成异源三聚体,结合下游基因的CCAAT顺式元件,从而激活或抑制一些基因的表达. NF-YA、NF-YB和NF-YC参与植物体内许多生理过程,包括胚胎发育、种子发育及萌发、花的发育、根和根瘤发育以及各种逆境反应等重要的生理过程.本文就植物中转录调控因子NF-YA、NF-YB和NF-YC的基本结构特点、生物学功能,以及它们在植物响应生物和非生物胁迫方面的作用进行了综述.     

Roi基因在三种植物中转化与表达的比较研究

通过改良的叶圆盘转化法,将Ti质粒上的Roi基因(细胞分裂素合成酶基因)转化入一种单子叶植物花叶芋和二种双子叶植物花椰菜和甘蓝的基因组中。在转化后组织当中以及再生植株的苗中,甚至再生植株的无性繁殖后代中均可测得Nos基因的产物胭脂碱的存在。这表明,Ti质粒上的外源基因已经在以上三种转基因植物中得到稳定的整合和表达,新的性状可以随着细胞分裂而传代。     

转基因植物口服疫苗的研究现状

自从1983年人类首次获得转基因植物以来,人们已利用植物生物反应器生产出了糖类、蛋白质、脂类及一些稀有物质。目前,随着儿童初始免疫计划的实施和世界卫生组织(WHO)在全球提倡以疫苗来抵抗感染疾病,人们越来越关注新型疫苗的生产。所以,利用转基因植物生产疫苗已成为热门的研究工作。 转基因植物口服疫苗是利用基因工程技术,将病原微生物的抗原编码基因进行克隆重组,导入植物细胞生成转基因植物,其表达产物不需要经过纯化,人们只要食用这种特殊的“食物”,就可激发黏膜免疫,使     

生物技术在农业上的应用及其前景

生物技术(即生物工程学)是近十年来崛起的一门新兴学科.它是在生物学、化学和工程学等领域中,利用经过遗传操作的生物体或生物体的机能,按既定的目的,进行物质的生物转化并加以利用的技术体系.这个技术体系由基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等新兴技术组成,其中基因工程是生物技术的带头学科. 生物工程的蓬勃发展,特别是在基因工程的基础上出现了蛋白质工程以后,解决农业上所长期面临的问题已不再是遥远的事情.首先是利用基因重组技术培育农作物新品种.过去用杂交的方法培育新品种,要受到远缘作物细胞的相互排斥作用的限制,     

植物基因工程

植物基因工程是近20年随着DNA重组技术、基因遗传技术及植物组织培养技术的发展而兴起的生物技术。其目的是通过导入外源基因对植物基因遗传进行转化，使作物具有抗病、抗虫、抗逆环境、高产优质，以及生产药物和美化环境等方面的能力，从而使人类更大限度地利用植物资源。在植物基因工程中，最为关键的是植物基因转化技术。随着植物基因工程的不断发展，目前已形成了一整套较为成熟的植物基因转     

肿瘤的基因治疗

肿瘤基因治疗是用正常或野生型基因矫正或置换致病基因或引入有治疗价植的其它来源基因的一种治疗方法.基因治疗一般是引入修饰基因于病人体内而并非该基因的产物,即是一种疗法而非新产品.但是,通过体内直接途径可将外湖DNA象传统的药物一样注射到机体内,帮、故有人称这些外源的DNA的基因药物.肿瘤基因治疗研究中,通常采用基因转移和基因灭活方法.基因转移是指将外源性目的基因导入病变细胞或其他细胞,目的基因的表达产物修饰缺陷细胞,使其恢复功能或使原有的功能得到加强,故又称为基因修饰.肿瘤基因修饰治疗研究包括免疫基因治疗、增强抑癌基因表达、靶向化疗或提高机体化疗耐受性等内容.基因灭活是应用反义技术特异性封闭某些基因的表达.反义技术是指利用针对特异性DNA和RNA片段按碱基配对的原则人工合成小分子核苷酸序列(反义寡苷酸),与其目的DNA和RNA序列互补结合,以选择性抑制目的基因翻译或转灵过程的技术和方法.在肿瘤基因灭活治疗中,订要是利用反义寡核苷酸抑制或封闭某些癌基因的表达.基因转移疗法一般分为两类:一是体细胞系基因转移,主要用于防治遗传性及非遗传性疾病;二是胚胎基因转移,用于预防遗传性疾病.临床上,基因治疗是指体细胞基因治疗.基因治疗基本上分为三步:(1)基因导入:是指把基因或合有基因的载体导入机体;(2)基因传递:是指基因从导入部位进入靶细胞核;(3)基因表达:是指细胞中治疗性基因产物的形成.     

转基因生物离我们有多远?

转基因技术通常也称为基因工程技术 ,是指利用载体系统的重组ＤＮＡ技术以及通过物理、化学和生物学等方法 ,将重组ＤＮＡ导入有机体的技术。转基因技术是首先在体外进行基因操作 ,然后转入受体细胞表达。外源基因在受体细胞中的表达可进行人为调控 ,克服了生物物种之间生殖隔离的自然屏障 ,可按照人们的意志创造出自然界中原来并不存在的新的生物功能和类型。1　转基因植物转基因作物的研究规模已达到了空前的水平。自1 983年世界上第一例转基因抗病毒植物诞生以来 ,转基因作物的研制、中间试验、田间释放和商业化种植得到了迅速的发展 ,到…     

抗菌植物基因工程进展

目前,抗菌植物基因工程采用的方法主要有：激活植物的抗病机制、导入植物防特反应相关基因、导入降解或抑制病原菌致病因子的基因、替换植物细胞中对毒素敏感的酶、导入抗菌蛋白编码基因、利用人工编制的细胞死亡等。     

磁处理对胡萝卜生物转化率的生物学效应研究

用磁处理后的胡萝卜做生物催化剂,将底物乙酰乙酸乙酯还原为具有光学活性的手性化合物(S)-3-羟基丁酸乙酯(产物).研究表明,只有25mT/20min的磁处理条件能抑制产物(S)-3-羟基丁酸乙酯的产率,而其它磁处理条件对胡萝卜生物转化反应则都有不同程度的促进作用,其中12mT/15min磁处理对(S)-3-羟基丁酸乙酯产率的促进效果最好.经过四个不同强度的磁场处理后,(S)-3-羟基丁酸乙酯的光学纯度均大幅提高,其中17mT磁处理对其光学纯度的提高效果最好.说明不同磁处理条件对胡萝卜生物转化反应的影响不同.本研究为磁处理在胡萝卜生物转化中的应用提供了理论依据.     

植物组织培养在农业上的应用

我国从1920年开始利用植物组织培养技术进行植物研究,1970年普及到科学研究部门,90年代应用于经济发展的生产部门。 植物组织培养技术是在微生物培养技术的基础上,应用植物细胞全能性及植物营养等理论而发展起来的,为深入研究植物细胞学、植物解剖学、植物生理学、植物生物化学及植物基因工程学奠定了基础。由于植物组织培养的研究、应用,大大地推动了农业、医药、化工等各方面     

拟南芥总RNA的提取及RT-PCR扩增CBF1基因

CBF1基因的扩增是研究植物抗旱基因的前期工作。本研究用Trizol试剂法提取模式植物拟南芥叶片的总RNA,经过反转录进行PCR扩增,将产物DNA回收后,连接PCR片段与T载体,电击转化入E.coli大肠杆菌感受态细胞;涂平板长出菌落,挑取半个白斑菌落电泳鉴定转化子;鉴定完成后提取质粒,用双酶切法进行鉴定,结果表明获得CBF1基因。     

植物功能基因组学及其研究技术

植物基因组的研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究.植物功能基因组学研究是利用结构基因组学积累的数据,从中得到有价值的信息,阐述DNA序列的功能,从而对所有基因如何行使其职能并控制各种生命现象的问题作出回答.近年来植物功能基因组学的研究技术主要包括表达序列标签、基因表达的系列分析、DNA微阵列和反向遗传学等.对植物功能基因组学的研究将有利于我们对基因功能的理解和对植物形状的定性改造和利用.     

植物染色体原位杂交研究进展

染色体原位杂交技术是基因定位研究中最为直接和简便的方法之一 .随着分子生物学技术的进步 ,不断涌现的原位杂交新技术在植物基因定位中逐步得到推广 .综述了原位杂交的发展及在植物基因定位中的应用情况     

植物原生质体技术的发展

<正> 自本世纪七十年代以来植物原生质体的培养和原生质体的融合技术不断完善,取得了一些重要进展。利用原生质体培养和原生质体融合进行遗传育种、改良植物、创造新颖品种的研究方面也显示了巨大的潜力。一、原生质体分离、培养和细胞融合技术的发展早在1892年,克拉斯科就采用机械的方法分离植物的原生质体。他把发生质壁分离的细胞切掉其细胞壁而不损伤其内部的结构从而得到植物原生质体。用这种方法先后得到洋葱鳞     

基因工程专题训练

专项材料 基因工程:对不同生物的遗传物质--基因,在体外进行剪切、组合和拼接,使遗传物质重新组合,然后通过载体(质粒、噬菌体或病毒等)转入微生物、植物或动物细胞内,进行无性繁殖,并使所需要的基因在细胞中表达,产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型的过程.     

植物细胞中的异三聚体G蛋白

植物生长于复杂多变的环境中,环境因子作用于细胞表面后,经过信号转导,引起细胞的生理生化反应或基因的启闭。近年来的研究表明,和动物细胞一样,异三聚体G蛋白广泛存在于植物细胞中。它作为一种信号转导组分,将细胞表面的受体与下游的效应器耦联起来,实现外界信号的跨膜转换,继而调控多种细胞反应。笔者主要就异三聚体G蛋白在植物细胞中的存在、结构及其所介导的胞外信号转导进行综述。     

EST技术在植物基因克隆和基因表达谱研究中的应用

表达序列标签是cDNA的部分序列，是通过对cDNA库进行大规模上次性测序而获得．对于植物研究而言，该技术已成为一种高效、经济的克隆重要植物基因的工具．而且，通过分析来自特定组织的EST库可以定量地估计该组织中各类基因的表达丰度．这种组织基因表达谱可用于阐明植物的代谢调控网络或植物对生物、非生物胁迫反应的信号转导途径．章以几个典型的实例阐释如何利用EST技术来克隆重要的植物经济性状基因及以此技术进行表达谱研究．     

甜樱桃S等位基因与育种

樱桃为蔷薇科李属植物,属配子体自交不亲和系统.该属植物其S基因在雌蕊中特异表达的蛋白产物S-RNase,能够降解同一品种花粉管中的RNA,抑制自体花粉的受精作用.S等位基因的结构在基因水平上都具有3个外显子和2个内含子,在蛋白水平上有5个高度保守区.S等位基因在雌蕊和花粉中的表达具有时间和组织特异性,并且受植物生长发育时期的调控,这种特异性的自交不亲和反应由多态的S位点单模型决定.分子系统发育树显示甜樱桃S等位基因聚为三类.S等位基因在樱桃各品种间配置授粉树和亲本育种的选配方面起重要作用.     

可治病的转基因食品——果蔬疫苗

早在现代医学产生之前，人们便自觉或不自觉地利用植物或植物中的某些天然成分来医治人类疾病。随着生物技术的发展，过去只能从稀有植物乃至其他生物体才能获得，或者收获量甚微的一些具有商业价值的物质，现在已有可能利用栽培作物来进行生产了。近10年来，将外源基因转移到植物细胞中，并由此产生一种经过基因改造的新植物的技术已经形成。科学家们正在将先进的植物生物学技术与现代医学研究的新进展结合起来，以开拓植物造福于人类的新局面。