抗胃癌单链抗体3H11的构建与表达

鼠单克隆抗体3H11（McAb3H11）能特异地结合于胃癌细胞，并已成功地应用于临床肿瘤显象，但由于McAb3H11对人体的异源性及作为大分子不易进入肿瘤组织内部等缺点，限制了其临床应用，近年来发展起来的基因工程抗体，以其分子小、免疫源性低等优点成为国内外抗体领域研究的热点。本文应用分子生物学方法，构建3H11的单链抗体（SCFV3H11并在大肠杆菌合成表达，为SCFV在临床的广泛应用奠定了基础。     

毕赤酵母表达系统及其在基因工程抗体中的应用

毕赤酵母具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高密度发酵等特性,同时又具有真核生物中蛋白正确折叠所需的细胞内环境和糖链加工系统,还能将外源蛋白分泌到培养液中,利于纯化,因此,毕赤巴斯德酵母成为近年来发展最为迅速,应用也最为广泛的外源基因表达系统。本文主要介绍了毕赤酵母常见表达载体,提高表达量的对策,以及该表达系统在基因工程抗体方面的一些应用现状。     

His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。     

Lea14基因原核表达载体的构建

Lea基因编码的LEA蛋白作为一种晚期胚胎丰富脱水保护蛋白,当植物处于逆境状态下时,其能够高水平的表达,通过降低其脱水的程度采达到抵御逆境的功能.为了进一步研究Lea14基因在逆境反应中的功能,本研究以拟南芥cDNA为模板,扩增出Lea14基因,再将Lea14基因克隆到原核表达载体pET-28a中,获得了Lea14基因的原核表达载体pET-28a-Lea14,测序结果表明:pET-28a-Lea载体构建成功,可用于后续蛋白表达研究工作.     

B7-H1在头颈部肿瘤中的表达进展

B7-H1是免疫调节分子B7家族的一个成员,主要分布在T细胞、B细胞、单核细胞、(角质细胞)、心脏、胎盘、肺、脾、淋巴结、胸腺、肾、骨骼肌和胎肝组织中。B7-H1在多种肿瘤细胞上广泛高表达,它与免疫细胞上的程序性死亡分子1(PD-1)结合后,启动caspase级联反应诱导免疫细胞的凋亡,导致肿瘤免疫逃逸的发生。近年来,有关B7-H1在某一恶性肿瘤中的表达以及它与临床病理、预后和免疫学因素的相关性报道诸多,本文通过总结分析近年来的相关文献,对B7-H1在头颈部肿瘤中的表达进展进行综述。     

人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用

mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式。细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动。其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用，但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少。到目前为止，尚没有该基因市售的抗体出现，阻碍了对该基因机理的研究。本文目的是利用PCR方法，从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因，制备其多克隆抗体血清。实验结果显示，通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体，用于Western Blotting 试验，可以检测到该蛋白内源性的表达；用于激光共聚焦定位实验显示该内源性蛋白定位在细胞核内；此抗体同时可用于免疫沉淀实验。因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得，为进一步研究该基因的功能创造了条件。     

马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Westem blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白.以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1:13,000.     

斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达

为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律,根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV）pif-2的同源物,读码框含1278bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋）,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。     

抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

Asia Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因C末端在大肠杆菌中的表达与纯化

本试验用VP1基因C末端与表达载体连接,转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达,收集不同时间段的菌液进行SDS-PAGE,结果表明重组的VP1基因C末端蛋白在大肠杆菌中能高效表达,表达的目的蛋白分子量约为16kd,而且重组菌诱导裂解物可在16kd处看到一条特异的蛋白条带,与预期大小一致,阴性对照未出现表达条带,而且重组菌在IPTG终浓度为1mmoL/L诱导6 h时表达量最大。表达产物主要以包涵体的形式存在,提取和裂解包涵体后,进一步纯化表达的目的蛋白,可获得纯度达70%以上的目的蛋白。     

S7—200可编程序控制器在抢答器中的应用

用模拟电路、数字电路或模数混合电路制作的抢答器相当普遍,但其存在运行可靠性差、功能单一的缺点.若采用可编程序控制器制作抢答器,不仅克服了上述缺点,且比前者具有更大的优越性,即抗干扰能力强、运用稳定可靠、定时精确、功能扩展方便等优点.本文介绍一种利用西门子S7-200PLC作为控制器的四路抢答器系统,并且给出了系统输入输出端子的分配方案以及系统软件设计.     

西门子S7-300 PLC在清洗液自动化配料系统中的应用

西门子S7-300 PLC自动化配料系统在国内已经处于领先水平,它解决了以前人工配料精度差、质量不稳定、统计管理差等缺点,自动化监控程度高。在管理水平上,这套系统已经实现数据库化管理和网络化管理,能和工厂的管理网络连接起来,把生产数据实时的传入工厂管理网络,能实现数据的备份、查询、统计、打印等功能,大大提高了工厂的管理水平。     

S7-300在红外热风回流焊机温控系统中的应用

本文介绍了红外热风回流焊机的应用情况及系统结构,以及用西门子S7-300PLC作主控制器、TP270触摸屏作人机界面系统的温度控制的软硬件设计方法。     

负热膨胀材料ZrV_2O_7研究进展及应用

本文总结了近年来国内外文献ZrV2O7研究进展,讨论了常用的合成方法以及负热膨胀的机理。并介绍了ZrV2O7复合陶瓷的研制与应用,指出了负热膨胀材料ZrV2O7潜在的应用领域,并对其发展趋势和应用前景进行了预测。     

Impact of Covishield Vaccination in Terms of SARS CoV-2 Neutralizing Antibody Expression

The vaccination efficacy can indirectly be assessed through the quantification of neutralizing antibodies. Very few data are available on Covishield efficacy in terms of neutralizing antibody expression upon vaccination. This study is focused on profiling of neutralizing antibody expression during and after the Covishield two shot vaccination and observing COVID-19 infection in vaccinated participants during the period. SARS CoV-2 neutralizing antibody concentrations in samples were estimated using electrochemiluminescence immunoassay kit for Lifotronics eCL8000. The sampling had been done sequentially at 45th, 85th day after 1st dose and 15th day after 2nd dose Covishield vaccination. Parallelly, in order to confirm the total SARS CoV-2 IgG response in COVID-19 infection, measured the IgG using SARS CoV-2 IgG lateral flow immunoassay test kit. The subjects previously infected with COVID-19 before 1st dose vaccination demonstrated high neutralizing antibody (> 10AU/ml). In COVID-19 uninfected subjects, there was a sudden incline in neutralizing antibody after the 2nd dose. Infection with SARS CoV-2 between 1st and 2nd dose of Covishield vaccination implicate that the level of neutralizing antibody in serum after 1st dose was not adequate to combat the virus and prevent infection. We observed COVID-19 infection in participants even after 2nd dose of vaccination. Interestingly, there was no protection against SARS CoV-2 even with a high neutralizing antibody expression of 188.5 AU/mL after the 2nd dose. Findings of Covishield efficacy in different cohort samples before and after 2 doses of Covishield vaccination provide impetus for improvement or development of next generation vaccines.     

Vif基因体外表达载体构建及其在无细胞系统中的表达

随着-omics（组学）时代的到来,无细胞蛋白质合成系统以具有快速、方便、易于高通量等优点,正在被广泛地研究和应用。本文选取HIV病毒感染因子Vif作为目标蛋白,构建了适宜体外表达的Vif表达载体pIVEX2.4c-Vif,并将其在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中进行表达,为下一步进行高通量药物筛选奠定了一定的基础。     

基于B2B、B2C、C2C的第三方网上支付研究

研究第三方网上支付理论的基础上,对三种典型的电子商务B2B、B2C、C2C的第三方网上支付进行了比较分析,总结了基于B2B、B2C、C2C的第三方网上支付系统模式及其存在的问题,最后规划了第三方协同网上支付的构建模式及其特性。     

CO_2、NH_3对YBa_2Cu_3O_(7-x)的结构及超导电性的影响

以热重分析(TGA)、电阻测量和X射线衍射分析等方法,研究了CO_2与NH_3对YBa_2Cu_3O_(7-x)超导体结构稳定性及超导,电性的影响。当温度低于373K时,CO_2对YBa_2Cu_3O(7-x)的结构和超导电性无影响;当温度为523K时,CO_2使YBa_2Cu_3O_(7-x)的Tc下降;温度高于703K时,CO_2将很快破坏YBa_2Cu_3O_(7-x)的结构,并产生化学反应,生成新的化合物,在CO_2中存在的O_2与N_2对YBa_2Cu_3O(7-x)与CO_2的反应及反应产物的影响有较大差异。NH_3对YBa_2Cu_3O(7-x)结构稳定性的影响不大。     

金融危机对我国B2B电子商务平台的影响及策略研究

从宏观经济及市场需求的角度,分析了金融危机对B2B电子商务整体发展的影响,比较了几个主要的第三方电子商务平台运营商的营销策略及手段,提出了B2B电子商务行业面临的主要问题及应对策略.