农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥的研究

耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参与了植物的抗旱过程.我们利用基因工程手段首先构建了植物DR1372-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法成功将目的基因DR1372转入拟南芥中,最后对阳性植株进行盐胁迫,证实了DR1372基因在拟南芥中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性.初步建立了农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥体系,为后续DR1372基因的功能研究工作提供了理论基础.     

PEG模拟干旱胁迫下非转基因和转csp2基因油菜种子萌发期抗旱性评价

冷激蛋白(cold shock proteins Csps)作为细菌中RNA的分子伴侣,含有原始型的冷休克结构域,具有与核酸结合功能,可以防止RNase对mRNA的降解,也能纠正mRNA的折叠错误,为了寻找作物改良的潜在基因资源,从耐辐射奇球菌(Deinnoccus radiodurans DR1)基因组中克隆出csp2基因,利用农杆菌侵染法转化甘蓝型油菜,通过两代纯化得到T2代转基因油菜种子,以15%聚乙二醇溶液(PEG6000)为渗透介质模拟干旱胁迫条件,对非转基因油菜和转csp2基因油菜种子萌发期抗旱性进行评价.结果显示:PEG胁迫下,转csp2基因油菜的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数,以及胚芽和培根的生长发育程度均高于非转基因油菜.从而表明,csp2基因能够促进植物细胞从逆境伤害中快速恢复.     

耐辐射异常球菌渗透诱导蛋白基因osmC的克隆表达纯化及生物信息学分析

耐辐射异常球菌(D.radiodurans R1)osmC基因(DR_1538)编码的渗透诱导胁迫蛋白是一种在氧化胁迫中起重要作用的过氧化物酶.用PCR方法从耐辐射异常球菌中扩增出osmC基因的全长序列(441bp),采用原核表达系统对其进行表达纯化,获得了分子量大小约为18.7 kDa的带有His标签的融合蛋白.利用在线网站对OsmC蛋白的生物信息学分析,结果表明:OsmC蛋白由146个氨基酸组成,理论等电点为5.81,为亲水性蛋白;二级结构主要是由α-螺旋及不规则卷曲组成.OsmC蛋白的纯化及生物信息学分析为后续深入研究其功能奠定了基础.     

核盘菌多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆及hpRNAi载体的构建

多聚半乳糖醛酸酶是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。本研究用PCR的方法从核盘菌基因组DNA中扩增出多聚半乳糖醛酸酶（PG5）基因片段,再以扩增出的PG5基因片段作为模板设计引物扩增出一个相应较小的片段。将两个PG5基因片段反向插入到植物表达载体2300 sn的35S启动子和nos终止子之间,构建出可转录表达出发夹RNA结构的组成型油菜RNA干扰载体,为今后油菜利用RNA干扰抗菌核病的基因工程研究奠定了基础。     

豆球蛋白基因转化花叶芋的研究

利用重组DNA技术,构建具有Ap~rCm~r的遗传标记并带有豆球蛋白的基因重组质粒,通过“三亲支配”,将豆球蛋白基因插入到植物基因工程载体pGV3850:1103neo DNA中。用改良的共培养法进行单子叶植物花叶芋的叶盘(叶柄)转化,在Km的选择压力下得到转化的再生植株。利用Southern吸印杂交,证明豆球蛋白基因整合到花叶芋的基因组中;通过胭脂碱分析,表明pGV3850:1103neo中的胭脂碱合成酶基因在再生植株中进行了表达。     

基因工程在提高植物抗逆性上的研究进展

筛选具有抗性的目的基因,通过不同方式转入到受体细胞,并使其在受体细胞中表达,以提高植物的抗逆性。利用基因工程提高植物抗逆性具有广阔发展前景。     

土壤农杆菌在植物基因工程中的应用

利用土壤农杆菌转入外源基因是植物基因工程中的有效手段．为此，对土壤农杆菌转化系统中的载体系统、土壤农杆菌转化植物的分子机制以及土壤农杆菌在基因工程中应用的研究进展作了综合评述。     

油菜菌核病及抗病研究进展

本文通过对油菜菌核病的研究现状、抗油菜菌核病的研究状况及其展望的介绍,综述了油莱菌核病的病原真菌的形态特征、侵染部位及生态条件、侵染机理及过程.提出了对油菜菌病进行生物防治.对寄主进行选育抗病品种和有条件的通过基因工程,将抗病基因介导或转化到寄主细胞中,使基因重组产生异植株防治该病.     

农杆菌介导CSPs基因转化甘蓝型油菜转化体系的研究

以甘蓝型油菜下胚轴为外植体,通过农杆菌介导法,对其遗传转化条件进行了研究,建立了转冷激蛋白(CSPs)的遗传转化体系。结果表明,甘蓝型油菜下胚轴经预培养2d后,用浓度为OD600=0.4的农杆菌菌液侵染90s,再经共培养和愈伤诱导培养,外源基因转化到油菜下胚轴外植体的转化效率高。然后通过PCR检测转化后在筛选培养基上诱导成苗的油菜,初步确定CSPs基因已整合到油菜再生植株中。这为以后其他基因转化到甘蓝型油菜的研究奠定一定的基础。     

除草剂"Basta"对油菜植株和愈伤组织的生长分化的影响

通过研究除草剂“Basta”对3个油菜品种的植株和愈伤组织的生长及分化的影响,发现“Basta”对油菜植株和愈伤组织的生长及分化具有强烈的抑制作用,而且品种不同,抑制程度不同。并在此基础上找到合适的“Basta”筛选压,为以bra基因作为选择标记基因的基因转化试验莫定了基础。