淀粉样前体蛋白通过抑制线粒体凋亡通路调节人肝癌细胞对5-氟尿嘧啶的抗性（英文）

目的:探讨淀粉样前体蛋白(APP)是否与肝癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的过程相关,并探索其发挥作用的分子机制。创新点:首次探索并初步证实APP通过影响线粒体凋亡通路信号的传递可以促进肝癌5-FU耐药。方法:为探究肝癌中APP与5-FU耐药性之间的关系,我们构建了APP沉默和过表达的Bel7402细胞系,并进行了细胞活性检测、细胞凋亡和细胞周期、蛋白质印迹和荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)等实验,验证过表达或沉默APP时,肝癌细胞的状态变化,以及APP发挥作用的分子机制。结论:与Bel7402细胞相比,耐药细胞Bel7402-5-FU中APP的表达明显上调。在Bel7402细胞中过表达APP降低了细胞的5-FU敏感性,而沉默Bel7402细胞的APP表达提升了细胞对5-FU的敏感性。从机制上讲,APP的过表达和沉默可以调节线粒体的凋亡途径和凋亡抑制基因(BAX、BID、Bcl-2和Bcl-xl)的表达,并进一步影响细胞凋亡的进程。综上所述,我们的结果初步表明APP在肝癌耐药过程中显著上调,APP能够通过影响线粒体凋亡通路调节肝癌细胞的5-FU敏感性,这为研究肝癌耐药机制提供了新的视角。     

AAZ2可通过靶向PDK1介导线粒体依赖的凋亡（英文）

大部分化疗药物可以促进活性氧（ROS）产生,同时ROS可以诱导细胞凋亡。本研究构建了一种有机砷化合物N-(4-(1,3,2-dithiarsinan-2-yl)phenyl)acrylamide(AAZ2),其可通过促进ROS产生诱导胃癌线粒体依赖的细胞凋亡。具体机制为AAZ2通过靶向丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)导致葡萄糖代谢改变和氧化应激,继而抑制PI3K/AKT/m TOR通路,最终激活半胱天冬酶（caspase）依赖的细胞凋亡。此外,体内实验也证实了AAZ2可以抑制胃癌移植瘤的生长。综上,在胃癌中,AAZ2可以通过靶向PDK1影响葡萄糖代谢及随后的氧化应激反应,抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,最终诱发线粒体依赖的细胞凋亡。     

缺氧诱导因子(HIF-1α)与肿瘤病理的关系

缺氧是实体瘤生长中存在的普遍现象,它和肿瘤的发展、浸润和转移密切相关。缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子,HIF-1是由α亚基和β亚基组成的异源二聚体,HIF-1α代表HIF-1的活性,其表达与肿瘤增殖、侵袭和转移、肿瘤新生血管生成等特征密切相关。HIF-1α对临床的诊断和对癌症治疗手段和新药物的研发有着重要的应用价值,对HIF-1α的研究有着及其广阔的前景。     

维生素D受体（VDR）通过调节M2巨噬细胞外泌体SMAP-5介导肝星状细胞的静息（英文）

肝纤维化有效治疗方案的制定需要深入了解其发病机制。肝纤维化的特征是活化的肝星状细胞（a HSC）过度产生细胞外基质。尽管已证实M2巨噬细胞能促进HSC活化,但所涉及的分子机制仍不明确。在此,我们提出参与巨噬细胞极化的维生素D受体（VDR）可能通过改变巨噬细胞外泌体的功能来调节巨噬细胞和HSC之间的通信。本研究证实,激动VDR可以抑制M2巨噬细胞对HSC活化的促进作用。源自M2巨噬细胞的外泌体可以促进HSC活化,同时激动VDR改变了M2外泌体中的蛋白质组分并逆转其激活HSC的作用。平滑肌细胞相关蛋白5(SMAP-5)被发现是M2巨噬细胞外泌体促进HSC活化的关键效应蛋白,其作用机制是通过调节HSC的自噬通量。基于这些结果表明,VDR激动剂和巨噬细胞外泌体分泌抑制剂的联合治疗可获得更加优异的抗肝纤维化效果。本研究旨在阐明VDR和巨噬细胞在HSC激活中的关联,其结果有助于对肝纤维化的发病机制理解,并为肝纤维化的治疗提供潜在的靶点。     

肝癌微环境中肝星状细胞活化及Stefin B的表达

探讨肝癌微环境中肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化与Stefin B表达情况。采用不同浓度TGF-β_1(5、10和20 ng/m L)、不同浓度肝癌细胞条件培养液(25%、50%和75%)以及TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液混合的方法分别处理HSC,免疫细胞化学染色法和Western blotting法检测α-SMA和Stefin B蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖。结果:TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液分别单独作用或共同作用时,HSC的α-SMA表达均升高且细胞出现活化,细胞增殖能力均增强;Stefin B在TGF-β_1单独作用时表达下调,而在肝癌细胞条件培养液单独作用及TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液共同作用时显著升高。结果表明:肝癌微环境能够促进HSC活化及Stefin B表达。     

优化的TTF-1核心启动子驱动miRNA-7表达有效抑制人非小细胞肺癌细胞的生长（英文）

靶向基因治疗是一种很有前景的肺癌治疗方法。在前期工作中,我们报道了由甲状腺转录因子-1(TTF-1)启动子调控微小RNA-7(miR-7)的靶向表达可在体外和体内抑制人肺癌细胞的生长,但干预效率有待进一步提高。在本研究中,我们通过5’缺失分析鉴定了TTF-1的核心启动子(从-1299 bp到-871 bp),并筛选出潜在的结合转录因子核因子-1(NF-1)和激活蛋白-1(AP-1)。进一步分析的结果表明：NF-1的表达水平,而非AP-1的表达水平,与人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中TTF-1核心启动子的活性呈正相关。此外,NF-1的沉默可以降低由TTF-1核心启动子调控的miR-7的表达。重要的是,我们在TTF-1核心启动子的序列上优化了四个不同的序列(称为^optTTF-1启动子)以形成额外的NF-1结合位点(TGGCA),并通过电泳迁移率实验(EMSA)分析验证了NF-1对^optTTF-1启动子的结合效率。通进一步研究,结果显示^optTTF-1启动子可更有效地驱动miR-7表达并在体外抑制人NSCLC细胞的生长,同时...     

基于微阵列技术的缺氧/复氧诱导下血管内皮细胞转录组分析

目的:应用全转录组芯片研究缺氧/复氧诱导下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转录组轮廓。创新点:血管内皮细胞(VEC)缺氧/复氧损伤被视定为许多生理和病理过程中导致器官功能障碍的重要驱动因素。然而,其详细病理生理机制和基因表达谱信息尚未阐明。本研究首次应用全转录组芯片技术研究VEC缺氧/复氧诱导下的转录组轮廓。方法:采用缺氧孵育3h后复氧1h的HUVEC为缺氧/复氧组,同时常氧孵育的HUVEC为常氧对照组。应用含58 339条探针的全转录组芯片检测每组三个样本。对差异表达基因进行生信分析和功能验证。结论:本研究发现372个有意义的差异表达基因探针。相关基因涵盖多种途径和功能,例如氧自由基的产生、钙超载、炎症、糖脂代谢、内皮细胞增殖、分化、细胞骨架及通透性调节、细胞裂解、凋亡和血管生成。另外,实验进一步表明,差异表达基因pleckstrin同源样域家族A成员1(PHLDA1)的m RNA和蛋白质表达结果与微阵列结果一致。STRING分析发现,PHLDA1可能与差异表达基因SLC38A3、SLC5A5、Lnc-SLC36A4-1和Lnc-PLEKHJ1-1具有物理性和/或功能性相互作用,这有望揭示VEC在缺氧/复氧环境下长链非编码RNA(lnc RNA)的相关机制。     

柚皮苷通过HIF1A通路抑制结肠癌的有氧糖酵解（英文）

代谢重编程是癌症中一种常见的现象,而有氧糖酵解是其重要特征之一。缺氧诱导因子1亚基（HIF1Α）被认为在有氧糖酵解中发挥重要作用。柚皮苷是一种从葡萄柚和柑橘类水果中提取的天然的黄酮糖苷。在本研究中,我们通过分析结肠癌数据库,确定了与HIF1Α相关的糖酵解基因。通过进行细胞外酸化率和细胞功能的实验,证实了过表达HIF1Α对糖酵解以及结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。此外,我们用柚皮苷作为结肠癌细胞的抑制剂来阐明其对HIF1Α功能的影响。结果显示,结肠癌组织中HIF1Α和烯醇酶-2(ENO2)水平高度相关,其高表达提示结肠癌患者预后较差。HIF1Α直接与DNA启动子区域结合,上调ENO2的转录;而ENO2的异常表达增加了结肠癌细胞的有氧糖酵解水平。最重要的是,一定浓度的柚皮苷抑制了HIF1Α的转录活性,从而降低了结肠癌细胞的有氧糖酵解水平。总之,柚皮苷通过降低HIF1Α的转录活性来减少结肠癌细胞的糖酵解以及结肠癌细胞的增殖和侵袭。本研究有助于阐明结肠癌的进展与糖代谢之间的关系,并证明柚皮苷对结肠癌的治疗效果。     

FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路抑制胶质母细胞瘤侵袭性并促进替莫唑胺化疗敏感性（英文）

为了探索FOXO1在胶质母细胞瘤（GBM）进展和化疗耐药中的作用和机制,本研究采用体外细胞学实验和动物实验分析FOXO1和mi R-506对GBM细胞系U251增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬和替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的影响,并通过双荧光素酶报告实验分析FOXO1与mi R-506相互作用的靶点。结果显示：FOXO1-miR-506轴可抑制GBM细胞侵袭和迁移能力,并促进其对TMZ的化疗敏感性,且自噬参与其中;FOXO1作为转录因子可与mi R-506启动子区域相结合并上调其表达;此外,mi R-506可结合在E26转录因子-1(ETS-1)3’-UTR区并下调ETS1表达,而ETS1可促进FOXO1从细胞核向细胞浆转移进而抑制FOXO1-miR-506轴。裸鼠动物实验结果显示,过表达FOXO1可促进GBM对TMZ的化疗敏感性,但mi R-506抑制剂和过表达ETS1均可逆转该现象。综上所述,FOXO1/miR-506/ETS1/FOXO1环路参与GBM侵袭性和化疗敏感性的调节,可作为GBM治疗的潜在靶点。     

RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的影响

目的:探讨RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植免疫耐受的影响。方法:通过shRNA干扰T细胞mTOR表达后,诱导T细胞向Foxp3+Tregs细胞分化。对60只雄性SD大鼠施行30次异位节段小肠移植,随机分为A组(mTOR-shRNA转染组)、B组(mTOR抑制剂RAD001干预)和C组(移植对照组、注射生理盐水)。观察小肠移植后受体大鼠的体重变化、生存时间及移植小肠病理切片评估排斥反应程度。结果:构建的mTOR-shRNA质粒表达载体在体外能有效地抑制大鼠骨髓细胞mTOR基因mRNA和蛋白的表达。RNA干扰大鼠T细胞mTOR基因可调节T细胞的定向分化,Tregs细胞增多,而Th17细胞分化减少。抑制mTOR基因可诱导大鼠异位小肠移植的免疫耐受,减轻受体抗移植物的排斥反应,显著延长移植物的存活时间。结论:RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的研究为mTOR抑制剂(RAD001)在移植后的临床应用提供理论和实验依据。     

轮枝孢菌素A靶向c-Met抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭（英文）

目的:结肠癌是全球第三大常见癌症,转移是结肠癌患者死亡的主要原因,因此迫切需要寻找能够抑制结肠癌转移新方法。在前期研究中,我们证明了轮枝孢菌素A在各种类型的癌症中均具有强大的抗肿瘤增殖作用。在本研究中,我们试图确定轮枝孢菌素A对结肠癌细胞的抗转移作用,并阐明其潜在的分子机制。创新点:首次发现轮枝孢菌素A可以有效地抑制结肠癌细胞在体内外的迁移和侵袭。在分子水平上,沉默c-Met显著降低了结肠细胞的侵袭,而轮枝孢菌素A正是有效的c-Met抑制剂;同时,轮枝孢菌素A还可以通过削弱c-MET磷酸化来抑制c-MET下游Ras/Raf/MEK/ERK信号通路,从而达到抗肿瘤转移效果。方法:采用划痕分析和Transwell法来证明轮枝孢菌素A对结肠癌细胞体外迁移和侵袭的影响;采用蛋白质印迹法来确定c-MET及其下游分子的表达水平和活性;采用实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析以评估c-Met的m RNA表达水平;采用RNA干扰测定用于沉默细胞中c-Met的表达;采用质粒瞬时转染以过度表达Erk。结论:轮枝孢菌素A显著抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭,抑制c-Met转录表达,削弱c-MET磷酸化,从而抑制其下游Ras/Raf/MEK/ERK信号通路,这是轮枝孢菌素A抗结肠癌细胞转移的主要分子机制。根据本研究结果,我们确定天然产物轮枝孢菌素A具有进一步开发抗癌症转移的巨大潜力。     

一种新的溶瘤腺病毒抑制肝癌细胞的生长（英文）

目的:研究新型溶瘤腺病毒GP73-SphK1sR-Ad5对肝癌细胞生长的抑制作用。创新点:GP73-SphK 1sR-Ad5是一种新型的溶瘤腺病毒,可以特异及有效地抑制肝癌细胞生长,为肝癌的临床治疗提供新思路。方法:通过整合高尔基体蛋白73(GP73)及鞘氨基醇激酶1(SphK 1)构建了GP73-SphK1sR-Ad5腺病毒,进而转染肝癌Huh7细胞及正常HL7702肝细胞。通过实时定量PCR和蛋白印记实验检测Sph K1和E1A基因的表达;通过四氮唑盐比色分析法(MTT法)检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞凋亡率。构建Huh7异种移植小鼠模型,并注射GP73-SphK1sR-Ad5腺病毒。20天后,记录小鼠肿瘤体积和重量,以及存活时间。用苏木精-伊红(HE)染色法和透射电镜(TEM)观察肿瘤组织的病理变化。结果:GP73-SphK 1sR-Ad5转染显著上调了Huh7细胞中E1A的表达,下调了SphK 1的表达,降低了细胞活性,并提高了凋亡率,然而对HL7702细胞无明显影响。Huh7异种移植小鼠模型内注射GP73-SphK 1sR-Ad5显著降低了肿瘤的体积和重量,延长了小鼠的存活时间,并降低了肿瘤组织中的肿瘤浸润面积、血管密度及核变形和染色质浓缩的细胞数。结论:新型溶瘤腺病毒GP73-Sph K1s R-Ad5可以特异和有效地抑制肝癌进展。     

TNFα在进展期胃癌局部组织中的分布及意义

探明肿瘤效应分子的分布规律、活性状态、效应机制及相互作用,将有助于制定更有效的生物免疫治疗方案,促进体内抗肿瘤效应更充分的发挥,而同时又避免或抑制促肿瘤发生发展的负效应,从而提高恶性肿瘤的治愈率。我们收集了经胃镜及粘膜活检诊断的18例进展期胃癌患者根治术后大体标本,采用免疫组织化学方法,选用TNFα多克隆抗体,分别对癌灶中心区、边缘区及远癌区胃壁中阳性细胞进行了实验观察。在各区胃壁组织中,TNFa活性可见广泛的表达。于胃壁各层中TNFa阳性细胞由远癌区向中心区呈逐渐增多趋势,且中心区、边缘区显著多于远癌区(P<0.01)。深层胃壁中TNFα细胞主要集中于肌间隙中。这表明TNFα在胃癌发生发展中起着重要的作用,但它在胃癌组织中的活性状态、作用机制尚有待进一步研究。     

UPF1通过调控eIF2α-ATF4通路提高细胞内氨基酸水平促进肺腺癌增殖（英文）

目的：UPF1是调节无义介导的mRNA降解的核心因子,参与多种肿瘤进展相关分子通路的调节,其在肺腺癌氨基酸代谢中的作用尚不清楚。方法和结果：本研究通过结合生物信息学和代谢组学,分析发现UPF1与肺腺癌中部分氨基酸代谢通路显著相关,证实UPF1敲低后可显著抑制氨基酸代谢重编程核心蛋白ATF4的表达及eIF2α-Ser51位点的磷酸化水平,且UPF1通过调控ATF4蛋白增加肺腺癌细胞的氨基酸水平进而促进细胞增殖。在临床患者样本数据库中,肺腺癌组织中UPF1的mRNA水平表达异常,UPF1和ATF4均高表达的肺腺癌患者有着较差的总生存期。结论：本研究表明,UPF1是肿瘤氨基酸代谢重编程的潜在调控因子,可作为肺腺癌治疗的新靶点。     

Bmi-1-siRNA对肺腺癌A549细胞迁移和转移的影响

观察Bmi-1基因沉默对A549细胞体外迁移和体内转移的影响。设计针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列作为靶序列构建重组逆转录病毒siRNA表达载体并将其转染入肺腺癌A549细胞;应用RT-PCR和Western Blot方法检测对Bmi-1基因的沉默效果;应用划痕修复和Transwell方法检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外迁移的影响;通过裸鼠尾输入各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对A549细胞在裸鼠体内转移能力的影响。结果显示:沉默Bmi-1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外迁移能力,同时降低VEGF的分泌。Bmi-1-siRNA能抑制肺腺癌A549细胞的转移能力,VEGF可能参与其中。     

槟榔叶水提液对癌细胞的抗迁移作用及其微管靶向性的研究（英文）

本文研究了槟榔(Piperbetle,PB)水提取物对癌细胞转移能力的调节作用及其对微管蛋白结构和网络的影响。采用亚毒剂量对PB和5-氟尿嘧啶(5-FU)处理的癌细胞进行抗迁移研究,观察细胞迁移20小时。在所有处理组中,100μg/m L PB处理的癌细胞均显示出最大的抗迁移作用(P=0.016)。总体上,PB对癌细胞的抗迁移作用高于5-FU。通过细胞形态观察发现,PB处理的细胞表现出与标准微管抑制剂(紫杉醇)相似的细胞特征,并在PB和紫杉醇处理的癌细胞中发现M期细胞群。通过对微管结构和网络进一步研究,我们发现PB和紫杉醇处理的癌细胞表现出长期破坏的纺锤体。因此,我们认为PB具有对癌细胞的抗迁移作用,并可能改变蛋白结构和网络。     

RNAi的革命

通过实验手段向细胞内导入长的双链RNA或者转基因可以产生一些短片段的双链RNA,这些短片段的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异地阻断体内特定基因的表达,使细胞出现特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。SiRNA(small interference RNA)就是这种短片段双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。基本上所有的生物体内也都存在一种内源的小分子RNA,为单链RNA,由基因组转录生成,但是不编码蛋白质,它们的功能在于调节mRNA的翻译,称为miRNA,是由具有发夹结构的前体剪切产生的。RNAi的发现具有划时代的意义,它不仅揭示了细胞内基因沉默的机制,而且有望成为后基因组时代基因功能分析的有力工具,极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程。     

萎叶提取物增强5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞HT29和HCT116的生长抑制作用

研究目的：探讨萎叶（PB）提取物对5-氟尿嘧啶（5-FU）抑制结肠癌细胞HT29和HCT116生长的影响。研究方法：HT29和HCT116细胞分别给予PB、5-FU以及两种药物联合治疗24小时,应用等效线图法分析PB和5-FU的药效学相互作用,AnnexinV／PI染色法检测HT29和HCT116细胞的凋丁L=情况,高效液相色谱法排除PB和5-FU间任何可能的相互化学作用。重要结论：联合PB,低剂量5-FU可以在短时间内起到细胞毒作用,而单独应用PB或5-FU治疗较联合治疗可以诱导更多细胞发生凋亡。进一步采用等效线图法分析显示PB和5-Fu的联合作用在抑制结肠癌细胞HT29和HCT116的生长中分别体现出协同和拮抗作用。因此可以认为在HT29细胞中,PB使得较低剂量5-FU发挥最大抑制结肠癌细胞生长效果,然而在HCT116细胞中,PB没有显著降低5-FU的药物浓度,说明PB和5-FU的相互作用不仅仅体现在诱导细胞凋亡方面。     

环氧合酶-2(COX-2)通过调控细胞上皮间质转化(EMT)促进卵巢癌细胞迁移及其耐药性

目的:研究环氧合酶-2(COX-2)对卵巢癌细胞迁移和耐药性的影响及其机制。创新点:本研究发现COX-2对卵巢癌发生发展有一定的促进作用,可以通过上皮间质转化(EMT)途径促进卵巢癌细胞的迁移和顺铂(CDDP)耐药。其抑制剂塞来昔布(CXB)能起到协同抗癌的效果。方法:CCK-8检测CXB和CDDP对SKOV3和ES2细胞的毒性作用。划痕实验评估COX-2对卵巢癌细胞迁移的作用。蛋白质免疫印迹(western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测EMT相关基因和蛋白的表达水平。结论:COX-2可以通过EMT促进卵巢癌细胞迁移和CDDP耐药;CXB可以起到抑制作用,与CDDP协同抗癌。COX-2可以作为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。     

翻译控制肿瘤蛋白促进癌症侵袭和迁移及其潜在的临床前景（英文）

翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）定位于真核细胞的细胞质和细胞核,是一种高度保守的多功能蛋白。它以外泌体的方式分泌,通过泛素-蛋白酶体系统（UPS）、热休克蛋白27(Hsp27)和分子伴侣介导的自噬（CMA）发生降解。TCTP的结构包含3个α-螺旋和11个β-链,并以螺旋发夹作为其结构特征。TCTP与蛋氨酸-R-亚砜还原酶B(Msr B)和哺乳动物Sec4抑制蛋白家族（Mss4/Dss4）的结构有很强的相似性,这些蛋白家族对小分子GTPase发挥鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）的活性,表明TCTP的某些功能可能依赖于GEF的活性。TCTP对Rheb发挥GEF活性以促进果蝇细胞的生长和增殖。TCTP增强细胞分裂控制蛋白42(Cdc42)的表达从而促进癌细胞的侵袭和迁移。此外,TCTP通过与肌动蛋白微丝（MF）和微管（MT）蛋白结合来调控细胞骨架重排,并参与诱导上皮-间充质转化（EMT）的过程。因此,TCTP促进癌细胞运动。TCTP在癌组织中通常高表达,这减少了患者的存活率,然而药物能靶向TCTP会降低其促癌作用。本文综述了TCTP促进癌细胞侵袭和迁移的机制,并介绍了目前在癌症中抑制TCTP的策略...