环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB／c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1：1．28×10^3,单抗腹水效价达1：1．024×10^6,IC50为68．31ng／mL,属于IgM型,轻链kappa,CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。     

克百威单克隆抗体的制备及鉴定

本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB／CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水．腹水效价达10^-6～10^-7。琼脂双扩试验表明各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白均为IgG2a亚类。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,并测定抗体蛋白含量为3～8mg／mL;用SDS—PAGE进行纯度鉴定,电泳图谱均显示了IgG抗体及其重链和轻链条带,分离的抗体纯度在90％以上。对纯化的单抗5E2进一步做交叉反应试验,与其他氨基甲酸酯类杀虫剂残杀威、速灭威、灭多威、甲奈威、异丙威、仲丁威的交叉反应率分别为7．2％、4．5％、2．8％、7．9％、9．5％、8．9％,结果表明单抗5E2有较好的特异性。     

抗CT单克隆抗体的某些特点及其应用

本文对5种分泌抗霍乱肠毒素单克隆抗体的生物学性质作了较详细的研究。研究表明,4株抗CT-McAb细胞株经鉴定3 A_(10)株为抗AB单克隆抗体,而3H_7、3C_7、1F_8为抗B亚单位单克隆抗体。4株细胞株对数增殖期的群体倍增时间为19～21h。双扩散证明,上述单抗为IgG_1型抗体。腹水抗体经-30℃贮存5年,仍保持原有的各种抗体特性。细胞通过体外连续传代30代以上,复经液氮冻存2年后,仍能恒定地分泌单克隆抗体。腹水抗体经硫酸铵纯化,IgG_1纯度经PAGE电泳分离及CS-910双波长薄层扫描技术,并以电子计算机算出IgG_1纯度为95.063％,酶标记抗体对CT的检测具有较高的特异性和敏感性。     

霍乱弧菌单克隆抗体研制及应用

采用霍乱弧菌菌株免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/O,在PEG作用下进行细胞融合,获得二株能分泌抗霍乱弧菌单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤株.体内外培养可用辣根过氧化物酶、亲和素生物素及荧光标记葡萄球菌A蛋白测定霍乱弧菌专一的单克隆抗体,经6个月传代培养和液氮冷冻复苏培养良好,产生抗体稳定.细胞培养液效价为1∶8,小鼠腹水效价1∶3200,经44株霍乱弧菌(EL Tor生物型)和10株其它肠道内致病菌检测结果,对霍乱弧菌有特异性抗体.经IgG亚型测定属IgG_3,杂交瘤细胞染色体稳定在95～105条。本文还对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体若干问题,进行了讨论。     

免疫PCR技术在肿瘤学中的应用及融合蛋白的基因表达

本研究建立了免疫PCR技术。并以此为基础检测了血清中的肿瘤抗原。 肿瘤病人血清检测结果表明免疫PCR技术对肿瘤有较大诊断价值。将构建的单链抗体和链亲 和素融合蛋白基因pET21scFvCEASTA在大肠杆菌HMS174（DE3）(plysS)中进行表达,免疫组化及蛋白印迹均提示获得了具备结合生物素和抗原分子活性的双特异融合蛋白。     

科技杂志要览

用亲和层析法纯化人精浆蛋白Purificationofhumanγseminoproteinwithaffinitychromatography摘要:[目的]用亲和层析法从增生的前列腺组织中纯化人精浆蛋白(γ-seminoprotein,γ-sm).[方法]采用超声波粉碎、NP-40提取与两种免疫亲和层析相结合[抗人精浆蛋白单抗(E4B7mAb)亲和层析和蛋白A亲和层析]的新提纯方案,获得了高纯度γ-sm抗原.[结果]所纯化的γ-sm蛋白经ELISA双抗夹心法和免疫印迹分析检测证明,用此法从增生的前列腺组织中分离到γ-sm抗原,而且纯化的γ-sm具有生物活性.[结论]这种方法的建立将为分离γ-sm抗原提供一种有效途径,…     

抗诺氟沙星单克隆抗体的制备及其性质的研究

为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用淋巴细胞杂交瘤技术。继建立产生抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤ZMC_4后,又建立了一株能分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMC_9。本文将对ZMC_9的建株作一简报。材料与方法以正常人A型Rh阳性的红细胞为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NSI小鼠骨髓瘤细胞在50％PEG(分子量4,000)作用下融合,经HAT选择性培养基培养,生成淋巴细     

马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Westem blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白.以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1:13,000.     

抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

洋葱黄矮病毒和韭葱黄条病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备

根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)和韭葱黄条病毒(LYSV)序列设计特异引物,分别扩增OYDV和LYSV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化诱导产物,免疫小鼠,获得高纯度的抗CP血清。Westernblot分析表明,OYDV与LYSV血清学远缘相关。对大蒜田间样品的间接ELISA检测表明,OYDV和LYSV在田间普遍发生,且通常为复合侵染。两者间微弱的血清学交叉反应对ELISA检测结果影响极小,可用于样品检测。     

第十一届中国专利金奖项目简介

<正>肿瘤坏死因子受体可溶部分的重组基因,及其融合基因与产物专利号:ZL01132074.5专利权人:上海中信国健药业有限公司本项目属于生物医药领域的人源化抗体类药物。我国在人源化抗体类药物的研发方面起步较晚,2005年以前没有一种人源化单抗类药物正式上市,国内销售的单抗类药物均为国外进口,其高昂的价格令大多数患者无法承受。同时,抗     

一种快速、简易诊断人畜疫病的新ELISA技术:同步酶联SPA—ELSA

酶标技术—ELISA,1971年由Engvall和Perlmann等建立,经过十几年的研究改进,目前已形成这样几种方法:ELISA间接法(主要用于检测抗体)是将已知抗原吸附(包被)于固相载体,经孵育后,洗去抗原,然后加入含有特异性抗体的被检血清,洗去,再加入酶标记抗同种球蛋白的抗体     

乙型肝炎病毒子宫内传播的研究

对15例HBsAg阳性(RPHA法)母亲的16例流产死胎开胸后心脏穿刺采血,并采集胎肝组织。应用ELISA检测胎儿血清HBsAg及IgM抗HBc,并检测胎儿血清HBV DNA多聚酶活力;免疫电镜法检测胎儿血清及肝匀浆中HBV抗原颗粒;将10％中性福尔马林固定、石蜡包埋的胎肝组织应用未标记的PAP法(DAKO PAP kit)检测肝细胞的HBsAg及HBcAg。结果以免疫电镜从其中7例胎儿血清及肝匀浆中查到HBsAg抗原颗粒,其中5例血     

肿瘤标志物检测在肺癌患者血清中的临床观察

目的:分析研究肺癌患者血清肿瘤标志物检测的方法以及应用价值,为临床提供依据。方法:选取2014年1月到2015年1月肺癌患者资料50例以及肺部非肿瘤性疾病患者资料50例实施回顾性分析,对两组患者治疗之前以及治疗之后的血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平进行检测,将检测结果进行统计学分析。结果:肺癌组患者的血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平显著高于非肺癌组患者(P0.05),具有统计学意义,其中血清癌胚抗原水平最高,小细胞癌患者血清神经元特异性烯醇化酶水平最高,鳞癌患者血清细胞角质蛋白19片段水平最高;化疗有效和化疗无效患者之间的血清肿瘤标志物比较存在明显的差异(P0.05),具有统计学意义。结论:对肺癌患者进行血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平检测可以帮助对肿瘤细胞类型的判断,患者化疗之前以及化疗之后的血清水平改变情况和治疗效果密切相关。     

拉萨地区2248例乙型肝炎病毒血清学标志分析

目的：探讨西藏拉萨地区乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）血清免疫学标记的组合模式。方法 共２２４８例ＨＢＶ血清样本，均以免疫酶联技术（ＥＬＩＳＡ）法检测５项指标。以聚合莲反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶ ＤＮＡ。为表述方便，设定血清ＨＢＶ免疫学标记检测项目第１－５项的排列顺序为（１）乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ），（２）乙肝表面抗体（抗－ＨＢｓ），（３）乙肝ｅ抗原（ＨＢｓＡｇ），（４）乙肝ｅ抗体（抗－ＨＢｅ），（５）乙肝     

人内脂素的原核表达和分离纯化

目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。     

青霉素类抗生素人工抗原制备与鉴定

选用青霉素类抗生素中的两种药物——青霉素G和氨苄青霉素,作为半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)通过不同的化学方法偶联合成了三种人工免疫抗原。三种抗原分别为BP-BSA(生理学法)、AP-BSA(生理学法)和AP-BSA(戊二醛法)。通过紫外、红外扫描和SDS-聚丙烯酰胺电泳法对三种合成抗原进行鉴定,发现半抗原与载体蛋白的偶联率为11∶1~12∶1。将合成的这三种抗原分别免疫9只新西兰大白兔,并用ELISA检验免疫后的兔子,发现其血清中分别产生了相应抗体,表明三种人工抗原合成成功。这为下一步获得针对青霉素类核特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。     

犬腺病毒Ⅱ型弱毒疫苗株的分离、鉴定与筛选

应用犬肾传代细胞 (MDCK) ,通过人“O”型红细胞吸附和氯仿处理等方法 ,从美国犬四联弱毒疫苗中分离出一株腺病毒 ,经形态、理化及生物学特性等系统鉴定证明 :该毒株是犬Ⅱ型腺病毒 ,命名为CAV2 XN3 株。实验将该病毒复制成弱毒疫苗 ,免疫 8只 2月龄当地幼犬 ,经临床观察证明 ,试验犬未出现不良反应 ;免疫后 14天采血测定血清中和抗体效价达到 1∶12 8,免疫后 2 5天血清中和抗体效价达到 1∶2 5 6 ,免疫后 10个月降至 1∶32 ,但仍能耐受强毒攻击 ,而对照组 4只犬则发病死亡。表明该弱毒疫苗激发免疫快 ,免疫期长 ,安全有效。     

百色市林下鸡场禽流感免疫抗体消长情况检测报告

使用重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株)、禽流感H5+H9(Re-5、Re-2株)二价灭活疫苗对百色市林下鸡场灵山土鸡开展免疫,免疫后采样检测H5、H9抗体水平。结果表明,1次免疫与2次加强免疫抗体高峰值分别在免疫后45d、60d,60 d后1次免疫鸡群抗体开始衰退;1次免疫H5+H9二价苗比1次免疫H5单价苗H5抗体衰退速度较慢;H9抗体滴度普遍高于H5并且衰退速度慢;二次免疫的抗体水平普遍高于一次免疫,抗体水平与免疫次数呈正相关系。