反义bcl-2逆转录病毒表达载体的构建

凋亡是一种不同于坏死且受基因控制的主动性细胞自我消亡过程,亦是许多抗癌药物作用的主要机理之一。Bcl-2是一种凋亡负控制的重要基因,其蛋白产物能抑制细胞的凋亡或程序性细胞死亡过程。我们构建了反义bcl-2逆转录病毒表达载体导入多发性骨髓瘤细胞株来调节Bcl-2基因表达,从而诱导细胞凋亡或增加细胞对凋亡诱导剂的敏感性,来探讨与多发些骨髓瘤的关系。     

IK4基因突变体与其逆转录病毒载体的构建及在白血病细胞中的表达

对造血调控中发挥重要作用的IKAROS基因亚型IK4进行突变,并构建重组逆转录病毒表达载体及使其在白血病细胞中表达。采用重叠延伸PCR定点突变技术,成功构建了4个IK4单突变或多突变突变体。将这4个突变体克隆至Pmscvpuro逆转录病毒载体中,构建重组蛋白表达载体。基因测序验证突变序列正确后,将重组逆转录病毒载体与病毒包装质粒VSVG、Gag-Pol共同感染293T细胞,过滤收集病毒上清,将病毒上清转染白血病NB4细胞。用Puromycin对细胞进行筛选,并通过Western印迹法对突变体表达细胞系进行验证。通过重叠延伸PCR法成功构建了4个IK4的定点单突变和定点多突变体,利用逆转录病毒介导的转染方法使IK4的4个突变体在白血病细胞中成功稳定表达,为后续的功能和机制的研究奠定了基础。     

血管内皮生长因子家族及其受体

血管内皮生长因子(VEGF)家族包括VEGF—A,-B，—C，—D,—E和胎盘生长因子(PIGF),都与同型的酪氨酸激酶受体VEGFR—1(Fltl)，VEGFR—2(KDR／Flk1)和／或VEGFR—3(Flt4)结合。本文综述血管内皮生长因子家族及其受体在肿瘤血管生成、淋巴管生成及肿瘤转移中的作用。     

逆转录病毒载体构建过程中的“LTR”和“Ψ”——谈对南通市2014届高三第一次调研测试第33题的补充

以剖析逆转录病毒载体构建的一道试题为起点,分析了逆转录病毒基因组中"LTR"和"Ψ"的作用,奠定了逆转录病毒载体构建过程中"LTR"和"Ψ"操作要求的理论基础,这是对试题的必要补充,同时有利于学生对逆转录病毒载体构建过程的全面理解。     

血管内皮细胞生长因子

血管内皮细胞生长因子（VEGF）是一种高度特异作用于血管内皮细胞的多功能因子,与内皮细胞的FLT_1和FLK_1受体有高度的亲和力．总结了VEGF的结构特点、分类、体内分布与表达以及生物学功能．     

血管内皮生长因子936~*T/C基因多态性与胃癌的关系

研究血管内皮生长因子(VEGF)936*T/C基因多态性与胃癌之间的关系,了解该基因多态性对胃癌生成及发展的影响。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测胃癌患者和健康者外周血的VEGF936*T/C基因型。结果,胃癌患者外周血中VEGF936*T/C基因型或等位基因与健康者相比无差异(精确概率法计算基因型P=0.226;卡方检验等位基因x2=2.934,P=0.087)。Ⅲ、Ⅳ期病理分期患者C/C基因型和C等位基因比例(66.7%和82.0%)明显大于Ⅰ、Ⅱ期(12.9%和1.2%),两者差异有统计学意义(基因型:x2=14.215,P=0.000;等位基因:x2=28.430,P=0.000)。结果表明,VEGF936*C/C基因多态性与胃癌的生成无关,而与胃癌的进展相关。     

棒状杆菌表达载体的构建

ｐＧＡ４６－４是一个带有谷氨酸棒杆菌妄动功能片断的质粒。用ＰＣＲ技术从ｐｇａ４６－４中扩增该启动子片断，将该启动子Ｔ４噬菌体Ｐ３２基因的终止子克隆到大肠杆菌质粒ｐＫ１８上，再接入棒状杆菌粒ｐＸＺ１０１４２构建一穿梭表达载体。     

L-ficolin突变体原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

目的构建L-ficolin突变体的原核表达载体，为研究L-ficolin的糖结合位点奠定基础。方法设计L-ficolin突变体基因上、下游引物，分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点。以插入L—ficolin M2（Val144Phe）和M6（Glu 307Asp）点突变的完整编码区基因的质粒pCDNA3-L-ficolin为模板，通过PCR扩增获得突变体的基因片段，将其克隆入原核表达载体pGEX—KG．然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定；将此表达载体转化入表达菌BL21（DE3）pLvSs诱导表达。并采用SDS—PAGE对表达产物进行鉴定。结果经酶切及序列分析表明．成功地构建了重组原核表达载体pGEX-KG—L—ficolin—M2、pGEX-KG-L-ficolin—M6，SDS—PAGE显示目的蛋白大量表达。结论L—ficolin突变体融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达。为研究L-ficolin的糖结合位点打下基础。     

鼻咽癌血管内皮生长因子表达和微血管计数的研究

目的 :检测鼻咽癌中血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)的表达和微血管计数 (Microvesselcount ,MVC) ,以探讨其相互关系及临床意义 .方法 :采用免疫组织化学S -P法 ,检测 6 8例鼻咽癌NPC和 12例鼻咽部粘膜慢性炎症的石蜡标本组织中血管内应生长因子 (VEGF)的表达 ,并根据Ⅷ因子相关抗原标记的内皮细胞对微血管进行计数 .结果 :1) 6 8例鼻咽癌标本中 4 1例VEGF检测阳性 (6 0 3% ) ,对照组 12例鼻咽部粘膜慢性炎症标本组织均未见阳性着色 . 2 )鼻咽癌组织中的MVC显著高于鼻咽部粘膜慢性炎症组 ,鼻咽癌组织中VEGF表达和MVC转移组均高于非转移组 ,差异有显著意义 (P <0 . 0 1) . 3)鼻咽癌组织中的VEGF表达和MVC随着临床分期上升而升高 . 4 )在鼻咽癌中VEGF表达与MVC呈正相关 (r=0 . 75 5 5 9) ,相关有显著性 (P <0 0 0 1) .结论 :鼻咽癌组织中VEGF表达和微血管计数与癌生物学行为密切相关 ,有可能作为判断肿瘤生物学行为 ,转移潜能及预后指标 .对采用血管生成抑制剂防止鼻咽癌转移有参考价值     

猕猴桃抗菌肽截短体原核表达载体的构建

抗菌肽是生物体先天防御系统中的多肽,协助机体抵御外源微生物的侵害.天然抗菌肽提取难度大,不利于其开发利用,其旨在探究猕猴桃抗菌肽体外高效制备方法.本研究通过生物信息学方法进行序列分析与基因克隆合成猕猴桃截短体抗菌肽(Truncated Antimicrobial Peptide,TrAMP)序列,并将其连接到原核表达载体pET-47b(+)+Fa-AMP上,转化获得其BL21(DE3) pLysS工程菌,经PCR和测序鉴定,表明重组表达载体构建成功,并经生物信息学模型预测显示抗菌肽具有抑菌活性,为进一步研究猕猴桃抗菌肽体外诱导表达及生物学功能验证奠定基础.     

用于农杆菌转化的雪花莲外源凝集素(GNA)基因植物中间表达载体的构建

雪花莲外源凝集素(GNA)是一类能特异地和甘露糖残基结合的蛋白质成分,对人畜毒性极低,但对同翅目昆虫有强烈的抗性.为利用雪花莲外源凝集素对同翅目害虫的抗性,将雪花莲外源凝集素基因置于Ubi启动子和Tnos终止子的控制之下,插入pCAMBIA3300的SmaI位点,构建了可用于农杆菌转化的植物中间表达载体-pCUGAN-Bar.将pCUGAN-Bar电击转入农杆菌,得到了带有pCUGAN-Bar的农杆菌菌株,可用于小麦和水稻的转化工作.     

向量在代数解题中的运用

作为数学工具的向量有着广泛的应用,本文就初等代数方面,给出了如何利用向量的线性运算、向量三角不等式、向量数量积、向量向量积和向量混合积等解决问题,方法简明规范,且有利于培养学生的创造性思维能力。     

矢量在中学数学解题中的应用

用矢量法解决中学数学问题，常常可以收到化繁为简，化难为易的效果．文章从四个方面探讨了用矢量解决中学数学问题的方法，说明了矢量作为运算工具应用的广泛性和优越性．     

Structural Damage Detection with Damage InductionVector and Best Achievable Vector

lintroductionWithtiledevelopmentoftilespaceandnuclearilldustrieselc.,thefuturestructureswillbeordersofmagnitudelargerandmorecomplexthantheirpredecessors.Keepingthosestructuressaferequirestjlattheintegrityoftilestructuresbeperiodicallymollitored.However,th…     

Homoharringtonine induces apoptosis of endothelium and down-regulates VEGF expression of K562 cells

Homoharringtonine (HHT) has currently been used successfully in the treatment of acute and chronic myeloid leukemias and has been shown to induce apoptosis of different types of leukemic cells in vitro. Emerging evidence suggests that angiogenesis may play an important role in hematological malignancies, such as leukemia. How ever, whether HHT can relieve leukemia by anti-angiogenesis is still unknown. We investigated the anti-angiogenesis potential of HHT with the human umbilical vein endothelial cell line (ECV304) and leukemic cell line (K562) in vitro. Cellular proliferation was determined by MTT assay and apoptosis was analyzed by flow cytometry. The mRNA expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) was assessed by RT-PCR and VEGF protein production was detected by Western blot. Inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis by HHT were discovered in ECV304 cells, and appeared in a dose- and time-dependent manner. Also, treatment with HHT caused down-regulation of VEGF mRNA expression in K562 cells in similar dose- and time-dependent manner and inhibition of VEGF protein production in K562 cells in response to the enhancing concentration of HHT. The results demonstrated that HHT could also induce apoptosis in endothelium and down-regulate VEGF expression in K562 cells. In conclusion, we believe HHT has anti-angiogenesis potential and speculate that HHT might exert its anti-leukemia effects via reduction of angiogenesis.     

Homoharringtonine induces apoptosis of endothelium and down-regulates VEGF expression of K562 cells

INTRODUCTION Homoharringtonine (HHT) is a cephalotoxin alkaloid with anti-leukemic activity and had been used successfully in the treatment of acute and chronic myeloid leukemias (O払rien et al., 1995; 1999; Feldman et al., 1992). The principal mecha-nism of action by HHT is the inhibition of protein synthesis in a dose- and time-dependent manner by binding to ribosome and inhibiting polypeptide chain elongation (Tujebajeva et al., 1989; Zhou et al., 1995). HHT had been shown to indu…     

植物基因工程研究进展 --目的基因的克隆与载体构建

20世纪80年代以来．基因工程技术在农业上的应用取得了斐然成果，植物基因工程已成为农业绿色革命的最重要技术手段，为此对植物基因工程中目的基固的克隆，载体构建的研究进展作了综合评述．     

浅析电位移矢量

在讨论线性电介质,各向同性(异性)介质,各向同性线性介质以及均匀(非均匀)介质,均匀各向同性介质含义的基础上,得出结论:在任何电介质中,电位移矢量都可定义为D=ε_0E P.在不约定ε为常量的前提下,D =εE也是成立的.