鲟鱼胚胎细胞分离培养的初步研究

研究了鲟鱼胚胎细胞的体外分离培养方法,并比较了体外培养液及添加血清浓度等条件,初步探讨了鲟鱼胚胎培养技术.结果表明,采用机械分离法,受精后48h的胚胎可获得较多的细胞,胚胎细胞在28℃,DMEM+10%胎牛血清培养液及无CO2条件下,可进行贴壁生长.     

Atoh1转录因子在耳蜗内的转译后调节（英文）

Atoh1属于bHLH转录因子家族成员,其对耳蜗毛细胞的胚胎发育及损伤后再生具有重要作用。许多讯号通道在转录水平上对Atoh1有调节作用,包括Notch和Wnt通道。在蛋白转译后水平,Atoh1是经由泛素-蛋白酶通道所调节。体外细胞实验及体内动物实验都显示:经由上述讯号通道的调节手段不仅影响耳蜗发育,也导致毛细胞的损伤后再生。本综述回顾了耳蜗内各个对Atoh1调节讯号通道研究的进展,并聚焦于泛素-蛋白酶通道对Atoh1进行转译后调节及其对毛细胞发育的影响。     

一种小鼠原代肝细胞的分离与培养方法

目的:探索一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离方法,并延长其体外培养的时间。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠,以含双抗的D-Hanks灌流液经肝门静脉充分灌注肝脏,然后以0.2 mg/mL的Ⅳ型胶原酶灌注消化,接着过滤、离心、洗涤,获得小鼠原代肝细胞。通过台盼蓝染色检验小鼠原代肝细胞活率,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态变化,糖原染色鉴定细胞纯度,添加ITS-X和HGF细胞因子延长小鼠原代肝细胞的体外培养时间。结果:平均每只成年小鼠肝脏可提取获得原代肝细胞约2×107个,台盼蓝染色显示细胞活率均超过95%,糖原染色结果表明此方法获得的原代肝细胞纯度高于95%,通过添加HGF和ITS-X两种细胞因子能够有效地延长肝细胞形态的体外维持时间。结论:本实验在原有小鼠原代肝细胞两步灌流分离法和培养的基础上,经过优化,成功建立了一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离和培养方法,为肝脏的体外研究提供了技术保障。     

四鳃鲈内脏组织细胞原代培养

采用动物组织块培养法对四鳃鲈（Trachidermus fasciatus）内脏组织进行离体培养研究.对培养条件进行了优化,比较了不同培养基（DMEM、M199）、不同生长条件（加生长因子、不加生长因子）和不同培养条件（CO2培养箱、恒温培养箱）下离体培养细胞的生长情况.结果显示：内脏组织接种后3～5 h,细胞迁移伸展,6 d后生长细胞集群汇合,来源于不同组织的再生细胞呈现不同的形态.在M199培养基中添加青链霉素抗生素（0.28%）及10%小牛血清和1%碱性成纤维生长因子、控温27℃、pH值为7.2～7.4并在CO2（5%）培养箱中培养的内脏细胞生长最快.不同来源的组织培养中肝细胞在离体培养中细胞增殖生长速度最快.     

不同抑菌剂在铁皮石斛开放组培中抑菌效果比较研究

以铁皮石斛无菌组培苗为材料、不定芽诱导培养基为基础培养基,并在此基础上分别添加0.25%的植培灵、6.5 mg/L的清菌易及5 mg/L的农用链霉素,采用开放组培的方式来进行铁皮石斛的增殖培养.通过计算不同处理污染率、增殖系数来比较不同抑菌剂的应用效果.结果表明:添加0.25%的植培灵的培养基(T_1)内所接种的铁皮石斛的成活率为100.00%,污染率为0.00%,与对照(CK_1)均无显著差异.T_1的增殖系数为2.32,是对照的1.8倍.根据上述结果,可将0.25%的植培灵用于开放组培.     

幽门螺杆菌的培养与保存

采用不同培养基对幽门螺杆菌（Helicobacter pyloftc，Hp）进行培养，研究了不同培养基对Hp生长的影响；并评价了Hp低温保存与复苏效果。结果表明：（1）采用固体培养Hp时，在微需氧条件下，培养基分别为哥伦比亚琼脂＋混合抗生素＋6％脱纤维绵羊血，哥伦比亚琼脂＋混合抗生素＋6％马血清，37℃培养3d，均可培养出Hp；在严格无菌的条件下，不添加混合抗生素，培养基为哥伦比亚琼脂＋6％马血清，对细菌的生长没有影响，且不会造成杂菌污染。（2）采用液体培养HD时，培养基为布氏肉汤基础加混合抗生素和6％马血清，Hp增菌迅速。菌株采取冷冻保存液法保存于-70℃-80℃低温条件下，可以成功复苏。     

小鼠抗日本血吸虫抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用的研究

实验用小鼠动物模型。在体外特异性抗日本血吸虫血清(Ab)存在下,巨噬细胞(Mφ),嗜酸性粒细胞(Eos)和中性粒细胞(Neu)均可粘附于童虫表面,使童虫死亡率显著增高。试验中加入葡萄球菌A蛋白(SPA),可使童虫表面粘附细胞数及粘附细胞的童虫数显著降低。表明细胞的粘附至少部分地是通过IgG抗体的Fc段与效应细胞上Fc受体的桥连而实现的。将童虫与抗体和/或细胞体外作用18小时后接种于小鼠腹腔,6周后的成虫回收率Eos加Ab和Mφ加Ab组显著低于对照组(P<0.01)。Neu加Ab组在体外实验虽有一定作用,但体内试验无效。     

鸭胚成纤维细胞培养方法的初步建立

在鸭胚成纤维细胞 (DEF)的制备及单层维持过程中 ,通过对不同消化方式 ,营养液的不同pH值 ,不同血清浓度对细胞生长及维持的影响 ,摸索出一种比较经济实用的培养方法 :细胞增殖时 ,最低血清浓度在 5 %左右、pH6 .8～ 7.2时 ,生长状态较佳 ;维持细胞时 ,血清浓度在 1～ 2 %、pH值在 7.4～ 7.6时较好。添加L -谷氨酰胺后 ,细胞的贴壁性增强     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的:探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定.方法:分别取孕14～16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养,用光学显微镜观察NSCs的生长情况,并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达,经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测.结果:①培养出来的细胞可以扩增生长;②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性;③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后,免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性.结论:采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs.     

优化米曲霉固体发酵生产辅酶Q10的研究

以辅酶Q10产量为指标,对米曲霉2077固体发酵法生产辅酶Q10进行了初步系统性研究.利用配方均匀设计和正交设计方法分别对培养基和培养条件进行优化,建立了相应的数学模型,得到了较优固体培养基为大豆8.20%、麦麸63.53%和谷糠28.27%,确定100 g培养基固体培养条件为：料水比为1、青霉素钠加入量为3mL、发酵温度40℃、发酵时间96 h为较优工艺条件.在此优化培养基和培养条件下得到米曲霉2077产辅酶Q10的最大值为0.947/mg·g-1干培养基.     

无患子优树叶片体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以一株无患子优树嫩叶为外植体,采用多因素正交试验筛选其愈伤组织诱导、体胚分化及植株再生的适宜培养基组成。结果表明：6-BA对无患子叶片愈伤组织诱导的影响显著,在添加1.0 mg·L^-16-BA和0.1 mg·L^-1NAA的MS培养基上培养21 d,愈伤组织诱导率达92.5%;愈伤组织在添加1.0 mg·L^-16-BA、0.5 mg·L^-12,4-D和1.0 mg·L^-1NAA的MS培养基上经3次继代,可分化出体胚,分化率为33.4%;初分化体胚在MS＋1.0 mgo L-1 6-BA＋0.1 mg·L^-1NAA＋60 g·L^-1蔗糖的培养基上培养21 d后可转变为成熟体胚,成熟率45%;成熟体胚在添加1.0mg·L^-16-BA和0.5 mg·L^-1IBA的1/2 MS培养基上可萌发生根,培养30 d后生根率为68.2%。     

顺铂对耳蜗微循环的毒性作用及防护机制

顺铂是一种二价铂化合物 ,属细胞周期非特异性化疗药物 ,于 70年代应用于临床肿瘤化疗 ,是治疗头颈部及泌尿生殖系统恶性肿瘤的首选药物之一 ,对食道鳞状细胞癌的姑息治疗也有一定价值。但是 ,临床研究和动物实验表明 ,顺铂与其他抗肿瘤药物一样 ,有许多毒副作用 ,其中主要有 :消化道反应、骨髓抑制、肾脏损害、内耳中毒及周围感觉神经末梢病变等 ,其中以肾毒性和耳毒性最为严重 ,本文主要综述顺铂对耳蜗微循环的中毒性作用及防护机制。1　耳蜗的血液供应及其微循环特点耳蜗有丰富复杂的血管 ,稳定的血流供应在维持耳蜗正常功能及内环境中起…     

蜂王浆主蛋白(MRJPs)作为灭活胎牛血清(FBS)替代品培养人体细胞的效果评价（英文）

目的:为MRJPs应用于人体细胞培养提供科学依据,为发展蜂王浆在细胞工程的新用途提供技术支撑。创新点:首次验证MRJPs对多种人体细胞的促分裂效果,证实MRJPs可部分替代FBS培养人体细胞,并取得培养人体细胞的MRJPs与FBS和细胞因子的适合比例。方法:鲜蜂王浆中分离得到的MRJPs溶液与FBS按不同比例(0/10、3/7、6/4和9/1)复配成复合血清,分别添加于无血清培养基中用于培养293T、HFL-I、231、HCT116和Changliver等5种人体细胞。以添加体积分数为10%的FBS的无血清培养基为对照,根据MTT法测定的吸光度和细胞形态比较分析结果,得到促进细胞分裂的MRJPs溶液与FBS最佳配合比例。然后在筛选出的最佳复合血清中添加不同的细胞因子,再通过同样的比较分析,得到适合的细胞因子组合。结论:MRJPs对多种人体细胞具有促进分裂作用,可部分替代FBS培养人体细胞。MRJPs与FBS的最佳配比为:60%MRJPs溶液和40%FBS(复合血清);该复合血清与细胞因子的最佳组合为:复合血清+表皮生长因子+胰岛素-转铁蛋白-硒。     

不同氮源的发酵培养基对苏云金杆菌HD-1生长的影响

为了研究不同氮源的发酵培养对HD－1生长的影响，我们选用了花生饼和无盐鱼粉作为氮源。通过发酵培养试验表明，以花生饼为氮源的培养基优于以鱼粉为氮源的培养基，且花生饼浓度与HD－1菌株产毒能力呈正相关，花生饼的最佳添加量约为22．6％。     

淡黄花百合的离体保存

对淡黄花百合组培苗的离体保存研究结果表明:在培养温度15-24℃,光照时间11h/d,光照强度1500lx条件下,最适培养基为添加1-3%甘露醇的MS培养基,保存10个月后存活率为92%左右,存活的幼苗接种于增殖培养基上,100%正常生长和增殖.     

阻滞和非阻滞品系小鼠早胚体外培养的比较

收集阻滞品系昆明(Kunming,KM)小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠受精卵,以及KM小鼠和B6C3F1小鼠交叉交配所得受精卵,进行体外培养,研究阻滞品系小鼠早胚体外发育阻滞原因。结果表明,卵母细胞内在因素对子一代早胚体外发育的能力影响较大,即体外培养是否发生2-细胞阻滞与卵母细胞有关。     

黑豆粉对灵芝壳聚糖产量影响的研究

目的:研究不同含量的黑豆粉对灵芝壳聚糖产量的影响。方法:通过菌丝活化、原种培养、栽培培养三阶段获得灵芝子实体,提取壳聚糖并测其含量及脱乙酰度。结果:灵芝栽培培养基中加入1%黑豆粉时,灵芝壳聚糖得率最高,较空白对照组提高了43%;而添加少于或多于1%黑豆粉,灵芝壳聚糖产量会有所下降。结论:添加1%的黑豆粉可以提高灵芝壳聚糖产量。     

大鼠骨骼肌细胞的原代培养及鉴定

探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3～5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5～6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。     

蓝莓离体快速繁殖研究

利用成龄蓝莓的茎段为外植体,培养在添加各种激素配比的改良WPM培养基上,研究蓝莓离体繁殖影响因素,筛选蓝莓离体最佳增殖和生根培养基及培养条件。结果表明:在WPM+ZT0.8mg/L的增殖培养基上,蓝莓的增殖数最大达45,在1/2WPM+IBA0.5mg/L的生根培养基上生根率在品种间存在差异,可达70-90%。通过炼苗,试管苗的成活率达85%以上,建立了蓝莓工厂化育苗技术体系,为蓝莓商品基地的建立提供了充足的优良苗木。     

CO_2应用归纳

1.动物细胞培养用CO_2培养箱培养细胞,目的是创造适宜的PH环境。例1动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。图1是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示