双引物PCR检测抗草甘膦豆粕饲料中的转基因成分

在一个PCR反应体系内,同步扩增大豆内参照基因lec和抗草甘膦大豆外源基因盒中的CaMV35s启动子、nos终止子或cp4 epsps基因,建立转基因大豆双引物PCR检测方法.PCR产物用限制性内切酶酶切进一步鉴定.结果表明,用双引物PCR扩增出标准转基因大豆阳性对照、阿根廷大豆、美国RR大豆及豆粕中的lec基因和相应的特异性外源基因;酶切反应确证PCR产物为特定片段大小的目的序列.建立的双引物PCR法适用于抗草甘膦大豆原料和豆粕饲料中转基因成分的简单化、高精度和高灵敏检测.     

对2023年江苏卷中PCR引物选择题的思考

<正>PCR技术是指利用DNA半保留复制的原理,在体外短时间内大量扩增目的基因的技术,与体内DNA复制相比,该技术最大特点是能使微量DNA大幅增加。因此PCR技术被广泛用于病原体鉴定、犯罪嫌疑人DNA比对分析、cDNA文库的构建等。随着基因工程的快速发展,作为基因工程基础的技术,PCR已经成为高考出题的热点,这种题型往往结合真实情境,考查学生解决问题的必备知识和关键能力,很好地对学生的核心素养进行了考查,江苏卷对基因工程的考查尤为重视,2017年至2023年,基因工程年年涉及,其中,对引物的考查方向很多：引物的特点、引物的选择、引物的修饰等,其中,2023年对引物选择的考查,体现了高考评价体系中综合性的考查要求。     

例析PCR引物的设计原则问题

<正>PCR技术是一项能在生物体外根据DNA半保留复制的原理,对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术,能在短短的几个小时内,实现DNA分子百万份拷贝的复制.该技术常用于遗传病的诊断、古生物学物种亲缘关系的鉴定、DNA序列鉴定、刑事案件犯罪嫌疑人DNA比对分析、定点诱变基因、cDNA文库的构建等多个方面.近年来,随着基因工程技术的更新发展,高考试题中对于PCR引物的考查成为了一个亮点,     

例析几类与PCR引物有关的试题

通过计算引物的数量、选择引物的种类及设计引物的序列等几类试题的分析,加深对PCR技术过程及应用的理解,提高学生解题能力及高考备考水平。     

基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统的构建与应用

PrimerHunter是一款多重PCR引物设计软件,该软件能够高效地设计出具有特异性的多重引物,但是只能在Linux系统的命令行中运行,而且没有考虑引物二聚体的问题。针对这些问题,文章建立了基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统,实现了PrimerHunter的界面化,完成了C/S模式向B/S模式的转换,同时增加了原软件不具备的引物二聚体检测模块,能够有效检测引物对之间的二聚体情况,为相关生物学领域研究提供了一种高效的多重PCR引物设计工具。     

水样中大肠菌数定量PCR检测实验设计

为不断完善环境微生物学实验课程建设,培养学生的实际样品分析能力,设计了一套检测水样中大肠菌数的实时荧光定量PCR(pdymerase chain reaction)实验。教学实践表明,实验方案切实可行,学生完成情况良好,学生了解并践行了实时荧光定量PCR技术检测环境样品中的大肠菌数的方法,切身体会到新实验技术的简便性与灵敏性,提升了学生的学习兴趣与创新能力。     

FTA滤膜用于PCR检测肉中志贺氏菌的研究

建立直接从肉中检测志贺氏菌的快速、敏感、特异的PCR检测方法．根据GenBank公布的志贺氏菌属的侵袭性质粒抗原基因IpaH的保守序列设计特异性引物．经过PCR扩增得到393bp的产物．经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物．使用FTA滤膜处理样品．再通过PCR方法检测志贺氏菌．猪肉、牛肉、羊肉检测的检出限均为10CFU／mL匀浆,可在6h内完成对肉中志贺氏菌的检测．FTA滤膜用于PCR检测肉中志贺氏菌灵敏度高,耗时短,为肉中志贺氏菌的快速检测提供了新的方法．     

FTA滤膜用于PCR检测豆制品中蜡样芽孢杆菌的研究

采用FTA滤膜从豆制品中直接提取模板DNA,根据蜡样芽孢杆菌的hblA基因设计一对特异性引物进行PcR,并对反应条件进行优化．结果表明该引物能特异性扩增出338bp的目的条带;不增菌的情况下,PCR检测蜡样芽孢杆菌的灵敏度是102CFU／mL,检测时间为4h．     

定量PCR检测激光切割的若干细胞中基因NGF转录本

在不提取RNA的情况下,激光切割少量细胞进行基因转录本的定量检测,目前尚未有报道,本研究以大鼠海马神经元中的NGF为例,定量PCR技术检测了激光切割的20个细胞中的NGF转录本含量,为进一步研究特定神经元细胞中NGF功能提供参考依据.     

流感嗜血杆菌分型研究与PCR检测的进展

流感嗜血杆菌 (Haemephilusinflelenzae,HI)是引起儿童急性呼吸道感染的常见病原菌[1] 。常可引起小儿肺炎、鼻咽炎、会厌炎、中耳炎、关节炎、败血症等多种感染并可以引起小儿化脓性脑膜炎[2 ] ,严重威胁小儿的健康。同时 ,对一些免疫力降低的成年人如慢性支气管炎患者[3] 、HIV感染者[4 ] 、流感嗜血杆菌的感染也渐渐被众多学者所证实。国内外在流感嗜血杆菌的分类分型及检测方面进行了广泛的研究 ,现就流感嗜血杆菌的分型与检测方面进展进行综述。1　流感嗜血杆菌的分型研究1.1　流感嗜血杆菌的生物分型法　根据流感嗜血杆菌对吲哚、…     

食品沙门氏菌PCR快速检测试剂盒简介

在我国食源性疾病中细菌性食物中毒病例最为常见，其中由沙门氏菌引起的中毒病例占70％-80％，而以肉、蛋、奶等畜产品被沙门氏菌污染所引起的中毒可占90％以上。因此，目前对食品质量安全监控进行CMA认证检测时，沙门氏菌的检测已成为了必检的卫生指标测定项目之一。传统的检测方法过程复杂，周期长，不仅造成人力物力的浪费，也影响了口岸的通关速度。     

南瓜种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT—PCR检测方法的建立

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一.本文建立了免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)的分子检测方法直接从带毒种子中检测出该病毒,扩增获得其CP基因,并克隆到pMD18-T载体中,经核苷酸序列分析表明,该分离物CP基因全长为486个核苷酸,编码由161个氨基酸组成的17.3kDa蛋白,与国内外已报道的CGMMV的CP基因相比,其核苷酸序列的同源性为91.4%~99.4%,其推导的氨基酸同源性为98.8%~100%.IC-RT-PCR方法的建立,为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法,很有应用前景.     

世界首创的结核菌血液测试法

世界首创的结核菌血液测试法澳大利亚ＣＳＬ公司即将上市被认为是世界首创的结核菌（ＴＢ）血液测试法。以澳大利亚联邦科学与工业研究组织（ＣＳＩＲＯ）开发的技术为基础，该测试去大大改善当今发达国家结核病患者的前景。１９９５年８月在澳大利亚开始试用该法，美国、...     

家蚕微孢子DNA的PCR检测灵敏度研究

对纯化的家蚕微孢子的DNA抽提及PCR检测灵敏度进行了研究。结果显示:以0.1mol/L K2CO3 0.1mol/L KHCO3作为诱导剂诱导人工纯化的微孢子发芽是最佳选择,配合proteaseK法,能较好地抽提微孢子的DNA;PCR检测灵敏度研究发现,最低检测微孢子核酸浓度是3.25×10-2pg(25μl反应体系),溶液中只要有4粒微孢子即可检出。     

美国中学实验:PCR法检测转基因食品

基因工程使得科学家们能够在生物中表达特定的基因,通过外源基因的植入和表达提高农作物抗病虫害、耐酸碱盐、耐除草剂、耐贮藏等能力,从而提高品质、增加产量、降低生产成本。世界人口不断增长的压力促使许多国家投入大量人力、物力、财力发展转基因农产品。自1983年第一株转基因植物诞生以来,转基因作物正源源不断地走出实验室进入大田并商品化。转基因食品在食品市场中的份额不断加大,这一方面展示出现代科技在农业生产上的巨大应用前景,     

应用PCR技术扩增SRY基因检测性别

本文介绍了一种从基因水平快速、简捷地鉴定性别的方法及该方法的实际应用价值.PCR(polymerase chain reaction)技术是目前最常用的体外扩增DNA片段的技术,SRY(sex determining regionof the Y)基因是男性特有的基因,位于Y染色体上.在SRY基因区域设计特异的引物,利用PCR技术,以管家基因GAPDH为内参照,若能扩增出SRY基因片段,即可判断为男性,否则为女性.该法可对一滴血、一根毛发、多年的尸块、胎儿、有争议的性别进行性别鉴定.广泛应用于法医鉴定、无创孕期胎儿性别鉴定以预防X连锁隐性遗传病患儿的出生以及对有性别争议的运动员体检等.目前赤峰市的各大医院还未开展此技术,值得推广.     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

食品是人类赖以生存和发展的物质基础,而食品营养、安全问题是关系到人体健康和国计民生的重大问题,已经引起了人们的高度重视。在选用微生物的快速检测方法时,应该考虑到方法的预期目标的精确性、检测时间、经济性、可接受性、操作简便性、技术服务等因素。介绍了PCR技术检测食品微生物的优点,分析了PCR技术在食品检测中的应用及一些新的PCK检测技术,进一步说明了这些技术在食品微生物检测中的发展和应用。     

在食品检验中应用PCR技术

PCR技术(Polymerase Chain Reaction)自问世一来,已在医学工程、疾病诊断、遗传工程、考古学及法医学等领域得到了广泛应用.1989年被称为“分子年”,PCR技术被列为十项重大科学发明之首,这种PCR技术也称为体外基因复制过程.在引物指导下,在体外通过DNA聚合酶将目的基因快速而可靠地进行多次反复合成的技术.由于此方法具有灵敏特异、产量高、快速、操作简便和容易自动化等突出优点.因此也被应用于食品检验.     

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.     

优化多重PCR检测Duchenne muscular dystrophy基因外显

目的:介绍一种快速简便地优化多重PCR检测DMD基因外显子缺失的方法及详细步骤.方法:采2ml外周血,用0.2%氯化钠处理收集白细胞,再用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA,用优化的多重PCR法直接检测DMD基因外显子的缺失.结果:用该方法检测DMD基因外显子缺失结果准确清晰.结论:用优化的多重PCR技术可以直接检测DMD基因外显子缺失,跟通常使用的9对引物一步法相比,具有经济、快速、简便等特点.