铜绿假单胞菌感染与耐药分析

目的：了解我院临床分离出的铜绿假单胞菌感染情况及耐药性,为临床合理应用抗菌药物和医院内感染监控提供依据。方法：对我院2007年1月至2009年12月从临床标本中分离出的铜绿假单胞菌采用肉汤稀释法进行药敏检测,采用WHONET5.3软件进行统计分析。结果：3年共分离出281株铜绿假单胞菌,敏感性较高的分别是亚胺培南（89.4%）、哌拉西林-他唑巴坦（86.5%）、头孢他啶（86.1%）和头孢吡肟（82.8%）,亚胺培南有耐药增加的趋势。其来源主要是痰液和创面分泌物（脓液）标本,科室分布主要以骨科、内科和脑外科为主。结论：铜绿假单胞菌存在较严重的交叉耐药及多重耐药现象。加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测,规范抗菌药物的应用,及早进行菌株培养和药敏,是控制铜绿假单胞菌感染和耐药上升的有效措施。     

铜绿假单胞菌临床分布及药敏分析

铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌，在自然界分布很广，空气、水、土壤、正常人体皮肤、肠道和呼吸道都有存在，为条件致病菌，近年来铜绿假单胞菌在医院感染中有逐渐增多趋势，现将我院2003．10-2005．10月铜绿假单胞菌感染共68例进行分析并报道如下。     

头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌抗菌活性的研究

目的：评价头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星对呼吸道分离的铜绿假单胞菌体外联合效应，为临床用药提供实验依据。方法：用微量液体稀释法测三种抗生素单用时对31株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC），并用微量液体平板棋盘法测出联合用药时对这些菌株的MIC，计算FIC指数。结果：头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合用药对铜绿假单胞菌的体外抗菌协同作用为35．5％～38．7％，相加作用为41．9％～45．2％，无关作用为16．1％～22．6％，无拮抗效应。结论：头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合应用，对呼吸道分离的铜绿假单胞菌的体外抗菌作用以协同和相加作用为主，无拮抗效应。     

呼吸道感染铜绿假单胞菌RAPD分型与抗生素耐药谱分型比较研究

目的：调查张家口地区呼吸道感染铜绿假单胞菌的分子流行病学情况，为临床防治提供依据。方法：用随机扩增DNA多态性分析技术对31株铜绿假单胞菌进行分型，并与抗生素耐药谱分型比较。结果：31株铜绿假单胞菌RAPD分型共有9种不同的基因型，其中基因A型17株，占54．8％。抗生素耐药谱分型有6型。结论：基因A型为优势菌株，且为多重耐药，是这一年来张家口地区呼吸遭感染的相关菌株，RAPD分型在医院呼吸道感染铜绿假单胞菌流行病学的研究中有较大应用价值。     

盐酸氨溴索联合阿米卡星对铜绿假单胞菌成熟生物膜的体外影响

目的通过在体外复制铜绿假单胞菌（P．a）的生物膜模型,研究盐酸氨溴索与阿米卡星对铜绿假单胞菌生物膜的影响。方法以聚氯乙烯吸痰管作为生物膜载体制作铜绿假单胞菌体外生物膜模型,分别在生物膜形成的不同时间加入3MIC的阿米卡星及不同浓度的盐酸氨溴索,采用连续稀释法进行生物膜内存活菌菌落计数。结果与单独应用阿米卡星组相比,阿米卡星与盐酸氨溴索合用后,生物膜中的活菌数明显减少。成熟生物膜中的活菌数随盐酸氨溴索浓度的增高而减少。结论盐酸氨溴索能增强阿米卡星对生物膜内铜绿假单胞菌的清除作用。     

β-内酰胺酶的活性检测和抑制研究进展

β-内酰胺类抗生素是20世纪的伟大发明之一,拯救了数以万计生命.然而,随着抗生素临床应用的普及,由β-内酰胺酶导致的致病菌耐药性问题也日益突出.耐药菌的进化和传播严重影响到人类健康和全球社会经济发展.因此,检测/抑制β-内酰胺酶的活性对合理使用抗生素、有效治疗感染类疾病具有重要意义.目前,特异性检测、抑制β-内酰胺酶的相关方法和临床应用已有报道.本综述主要阐述细菌产生β-内酰胺酶的耐药机理,总结近年来β-内酰胺酶荧光探针和抑制剂的发展,以期为今后设计特异性高、灵敏度强的该类荧光探针和抑制剂提供理论依据,解决抗生素耐药性问题.     

铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

目的:调查铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.方法:用微量液体稀释法进行药敏检测,用RAPD技术进行基因分型.结果:耐药谱分6型,Ⅰ型占44.5%,Ⅱ型占18.5%,Ⅲ型占7.4%,Ⅳ型占7.4%,V型占11.1%,Ⅵ型(不定型)占1.1%;RAPD分9型,A型占51.9%,B型占7.4%,C型占7.4%,D型占7.4%,E型占7.4%,F型占3.7%,G型占3.7%,H型占7.4%,Ⅰ型占3.7%.结论:基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其它型别为非流行相关菌株.RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值.铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢唑啉、头孢呋肟耐药率高;对喹诺酮类抗生素较敏感;对氨基糖甙类抗生素有一定的耐药性;亚胺培南的耐药率最低.     

头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌抗活性的研究

目的:评价头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星对呼吸道分离的铜绿假单胞菌体外联合效应,为临床用药提供实验依据.方法: 用微量液体稀释法测三种抗生素单用时对31株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),并用微量液体平板棋盘法测出联合用药时对这些菌株的MIC,计算FIC指数.结果:头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合用药对铜绿假单胞菌的体外抗菌协同作用为35.5%～38.7%,相加作用为41.9%～45.2%,无关作用为16.1%～22.6%,无拮抗效应.结论:头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合应用,对呼吸道分离的铜绿假单胞菌的体外抗菌作用以协同和相加作用为主,无拮抗效应.     

铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的克隆表达及活性

为了研究使用酵母表达系统表达重组铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的效果,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)将铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶基因ly23克隆至酵母表达载体pSEP1和pSEP1alpha上,并分别转化至酿酒酵母细胞,对胞内表达及分泌表达重组噬菌体裂解酶LY23的表达水平及裂解活性进行测定。结果表明,用酿酒酵母表达系统分泌表达的LY23粗酶液处理10min后,铜绿假单胞菌菌液的OD_(620)值下降约50%,且比浊法测定显示LY23对铜绿假单胞菌具有较为显著且专一的裂解活性。本文研究使用酵母表达系统可分泌表达具备裂解活性的噬菌体裂解酶,可为后期探讨其分离纯化提供基础。     

吴茱萸不同提取物对铜绿假单胞菌的体外抑菌作用研究

目的:研究吴茱萸乙醚提取物、正丁醇提取物、挥发油、水提物对绿脓杆菌的抑菌作用.方法:用乙醚脱脂,得乙醚提取物;将乙醚脱脂后的吴茱萸用70%乙醇提取,正丁醇萃取,得正丁醇提取物1、2、3;用挥发油提取器提取挥发油;用蒸馏水加热回流法提取水提物.用以上提取物分别进行抑菌试验.测定吴茱萸正丁醇提取物1、2中的总皂苷、总黄酮的含量.结果:试验表明正丁醇提取物1、2、3和残渣均在31.25mg/mL时对临床绿脓杆菌仍有抑菌作用;挥发油在1.25%时对临床绿脓杆菌仍有抑菌作用;乙醚提取物对标准绿脓杆菌的MIC为250mg/mL,对临床绿脓杆菌的MIC为125mg/mL;水提物对标准绿脓杆菌无抑制作用,对临床绿脓杆菌的MIC为125mg/mL.正丁醇提取物1、2的总皂苷含量测定结果为28.71%、31.27%;总黄酮的含量分别为43.25%、44.31%.结论:研究提示正丁醇提取物1、2、3和残渣及挥发油对绿脓杆菌有明显的抑菌作用,四者之间的抑菌作用没有显著性区别.水提物和乙醚提取物对绿脓杆菌有抑制作用,抑菌作用比正丁醇提取物、残渣和挥发油的作用弱.     

紫外照相技术在检测假单胞菌荧光铁载体中的应用

铁载体的检测方法有通用的络天氰(CAS)检测法,但未见针对荧光类铁载体的检测方法相关报道.本研究采用紫外照相技术实现了对荧光铁载体进行原位检测,结果显示此方法对荧光铁载体获得较好的效果.     

34株嗜麦芽窄食单细胞菌的耐药性分析

目地：探讨嗜麦芽窄食单细胞菌对各种抗生素的耐药性,指导合理使用抗生素.方法：采用标准纸片扩散法进行试验.结果：菌株对于复方磺胺甲恶唑、左旋氧氟沙星、环丙沙星、派拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、奥格门丁/克拉维酸和头孢噻肟的耐药率为9.8%、17.6%、34.6%、56.3%、69.9%、67.8%、95%、93.1%,对于亚胺培南、头孢唑啉、氨苄西林的耐药率为100%.结论：嗜麦芽窄食单细胞菌对临床常见的抗生素以复方磺胺甲恶唑最为敏感.     

不同培养基对荧光假单胞菌产铁载体的影响

分别比较了蔗糖-天冬氨酸培养基,MKB培养基,诱导培养基,LB培养基对荧光假单胞菌产铁载体的影响,发现蔗糖-天冬氨酸培养基最适合于荧光假单胞菌产铁载体研究。     

尿路感染病原菌分布及大肠埃希菌的耐药性分析

目的：了解保山某院尿路感染病原菌的分布情况及大肠埃希菌的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法：用VITET-2Compact60全自动微生物分析仪鉴定细菌,K—B纸片扩散法做体外药敏试验,统计、分析细菌的检出率和药敏结果。结果：尿路感染病原菌占第一位的是大肠埃希菌（74．2％）,其次为肺炎克雷伯菌（10％）,次之为表皮葡萄球菌（4.3％）;病原菌在临床各科室分布情况为泌尿科45．7％、康复科20％、ICU14.3％;52株大肠埃希菌对13种抗生素的耐药率居前三位的分别为：氨苄西林98％、复方新诺明76．9％、庆大霉素65．4％,52株大肠埃希菌对厄他培南、亚胺培南均敏感;52株大肠埃希菌中产ESBLsIg／29株占55．8％,非产ESBLs的23株占44．2％。结论：医院尿路感染病原菌以大肠埃希菌为主,科室分布以泌尿科为首,尿路感染大肠埃希菌的耐药情况较严重,医院应加强其耐药性监测,医生应依据体外药敏试验结果合理选择抗生素。     

假单胞菌单基因甲基化位点的检测与自发表型变异分析

重亚硫酸盐测序(BSP)技术是一种广泛应用的DNA甲基化检测技术,其检测分辨率达到单碱基水平,可用于短片段的高精度测序.利用BSP技术对DNA水平上不存在差异的绿针假单胞菌HT66及其荧光表型突变株HT66-FLUO的同一基因片段gacS并行测定,发现HT66-FLUO的gacS中存在2个甲基化位点,甲基化率分别为50...     

长期小剂量红霉素对预防和控制COPD绿脓假单胞菌感染的临床研究

目的:随着社会人口老龄化,慢性阻塞性肺疾病(COPD)是目前我国老年人最常见的呼吸系统疾病,而反复肺部感染是加重病情,危及生命的主要原因,同时也给整个社会造成沉重的经济负担,现在我国大力推广农村合作医疗以实现国家最大福利,故这项研究课题能最大程度减轻国家和家庭经济压力,减少医疗资源浪费.方法:这项研究主要是采用小剂量红霉素肠溶胶囊预防COPD绿脓假单胞菌感染并进行临床研究,观察其再次住院率和再次感染细菌情况.结果:红霉素小剂量(250mg/天)、长期应用对稳定期COPD合并慢性绿脓杆菌肺部感染患者的痰细菌清除率有明显提高,其机制是红霉素可抑制和破坏绿脓杆菌形成的生物膜.此外,小剂量红霉素长期应用还能显著改善稳定期COPD合并慢性绿脓杆菌肺部感染患者的肺功能和生活质量.意义:目前国内对此类研究尚不多,可以填补我省的空白,对我国农村医疗建设起到重要作用.     

沼泽红假单胞菌和红螺菌对水体净化作用的初步研究

从安瓿瓶中将冻干的光合细菌(Photosynthetic Bacteria,PSB):沼泽红假单胞菌(Rhodomeudomonas palustris)与红螺菌(Rhodospirillum)复苏,得到活性较高的菌株。将其施放于鱼塘养殖池水中,待繁殖后测定COD,氨氮含量,吸光度等各项指标。结果表明,沼泽红假单胞菌与红螺菌对鱼池水质具有较好的改善作用。     

几株红假单胞菌混菌培养条件的探讨

通过三株红假单胞菌在不同碳源、氮源、pH值和不同温度等条件的混菌培养实验，筛选出适合其生长的最适碳源、氮源、pn值和培养温度、试验结果表明：该混合菌株在乙醇、丙酸钠、乙酸钠等5种碳源中，以乙酸钠为最适碳源；在氯化铵、硫酸铵等5种无机氮源中，以硫酸铵为最适氮；最适pH为8．5；最适培养温度为38℃。     

DHA-1型β-内酰胺酶基因克隆及其结构

为了克隆多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的DHA-1型β-内酰胺酶并探测其序列的结构特征,抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切粘末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-TEasy载体进行T-A克隆.在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序.通过以上方法,克隆筛选到含5.2kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个DHA-1基因和一个ampR基因,依次在DHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26.因此,可以认为成功克隆了质粒介导的DHA-1基因,并在其相邻序列中存在插入序列IS26.     

海藻酸钙-活性炭固定化好氧反硝化施氏假单胞菌生物脱NO3--N的研究

以采自温州西片污水处理厂曝气池的活性污泥样品中分离获得的好氧反硝化施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）WZUF25 研究对象,分析其在最适宜条件下在人工NO3^--N 污水中菌体生长和去除NO3^--N 进程及反硝化占总氮去除率;采用海藻酸钙-活性炭包埋法固定Pseudomonas stutzeri WZUF25,研究固定化细胞在最适宜条件下去除NO3--N 进程和完整性.研究得出：Pseudomonas stutzeri WZUF25的脱NO3^--N 能力明显比目前报道的好氧反硝化菌强,其海藻酸钙-活性炭固定化细胞去除人工NO3^--N污水的过程中,固定化胶珠是完整的.