超顺磁性纳米簇捕获和分离细菌综合性实验

依托教师的科研成果,设计了"超顺磁性纳米簇捕获和分离细菌综合性实验".利用高温水解法制得超顺磁性纳米簇,进一步修饰沙门氏菌抗体,构建磁性纳米探针,表征了其形貌、磁性和生物活性,并详细探究了对沙门氏菌的分离效率、特异性及抗干扰能力.实验结果表明:磁性纳米探针能够快速、特异、高效地捕获和分离沙门氏菌,捕获效率达95％以上,...     

磁性荧光纳米球的制备及其对细胞的识别和捕获

设计了"磁性荧光纳米球的制备及其对细胞的识别和捕获"综合研究型实验。通过将磁性纳米颗粒和量子点包埋进高分子球内部制得磁性荧光纳米球,进一步通过生物修饰在纳米球表面引入能特异性识别肿瘤细胞的靶向分子,从而实现对肿瘤细胞的识别和捕获。实验内容丰富,操作简便,涉及到化学制备、生物偶联、识别捕获等操作,荧光、磁性、形貌等表征技术以及生物化学实验中常见仪器的使用,能够全方位培养学生的实验技能、科研素养和创新精神。     

产细菌素大肠杆菌分离鉴定及其细菌素抑菌谱测定

目的:本试验从动物粪便中分离产细菌素大肠杆菌,制备细菌素,并对细菌素抑菌谱进行测定,为细菌素的研究与应用提供参考。方法:分别采集家兔、大鼠、鸡、山羊、黄牛和奶牛等6种健康动物新鲜粪便,采用麦康凯琼脂平板分离大肠杆菌,制备大肠杆菌发酵上清液及粗提细菌素,并进行细菌素的抑菌谱测定。结果:从6种健康动物的粪便中共分离到6株大肠杆菌。体外抑菌试验显示,山羊、黄牛和奶牛大肠杆菌发酵上清液对部分革兰阴性菌有抑菌效果,其余均无抑菌效果;而6种粗提细菌素对金黄色葡萄球、白色葡萄球菌等革兰阳性菌和鸡沙门菌和2株鸡致病性大肠杆菌等都具有抑制生长作用。结论:大肠杆菌发酵上清液抑菌谱较窄,粗提大肠杆菌细菌素抑菌谱较宽,其中山羊大肠杆菌素抑菌谱最宽。     

二氧化硅纳米粒子用于检测极微量细胞

据2004年10月13日《参考消息》援引英国《新科学家》周刊10月4日期文章称，利用含有数千个荧光抗体分子的二氧化硅纳米颗粒，可以快速、精确地检测极微量有害细菌。这种纳米粒子加入检测样本(例如肉糜)的溶解液里，就会与细菌粘着在一块；然后通过离心方法，根据纳米粒子与细菌细胞之间的大小的不同，可以使细菌与纳米颗粒分离，并沉淀下来；     

峨眉山一把伞南星抗大肠杆菌内生细菌菌株筛选

从峨眉山采集健康的一把伞南星(Arisaema erubescens(Wall)Schott)植株,采用稀释涂布平板法从植物的组织液中分离内生细菌,采用牛津杯法筛选对大肠杆菌(Escherichia coli)有拮抗作用的抗性菌株。研究结果表明,从一把伞南星中分离得到内生细菌23株,经过初筛和复筛共得到2株对大肠杆菌有较强抑菌活性的内生细菌:YC06、YC09,这两个菌株的发酵产物对大肠杆菌也有抑菌作用,抑菌圈直径均在13.0 mm以上。     

磁性纳米细菌传感器表征污染土壤生物毒性的教学实验设计

设计了一个适用于本科生环境监测学、环境生物学和环境土壤学等环境学科专业的探索性实验——磁性纳米细菌传感器(MNPs-P.phosphoreum biosensor)表征污染土壤生物毒性实验.实验内容包括MNPs-P.phosphoreum Biosensor合成、MNPs-P.phosphoreum Biosensor...     

致仔猪水肿病大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

从疑似仔猪水肿病病料中通过细菌分离、生理生化试验、动物试验和PCR试验,分离到了10株致仔猪水肿病的大肠杆菌.利用药物敏感性试验,对分离的10株大肠杆菌进行了耐药性检测,结果表明：10株大肠杆菌对2种抗生素都耐药,且许多菌株有多重耐药现象.     

绿原酸磁性印记聚合微球的制备与表征

以Fe_3O_4纳米粒为磁性组分,绿原酸为模板分子,甲基丙烯酸和三羟甲基丙烷三丙烯酸酯分别为功能单体和交联剂,采用多重乳液悬浮聚合法制备了绿原酸磁性印迹聚合微球,并对形态、大小、组成和磁响应性进行了表征.采用静态平衡吸附试验研究了绿原酸磁性印迹聚合微球的吸附性能,发现其对绿原酸表现出较好的吸附特异性,进一步的Scatchard分析表明存在两类不同性能的吸附位点.     

反相-高效液体色谱法测定三种常见细菌胞外多聚物中的单糖组分

为研究细菌胞外多聚物(Extracellular polymeric substances,EPS)的复杂组分及其对环境中矿物细颗粒的溶蚀、改性作用,本文选取了土壤常驻菌硅酸盐细菌、空气常见致病菌金黄色葡萄球菌和人体常见菌大肠杆菌为研究对象,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)快速定性定量检测了三种细菌胞外多糖中单糖成分的方法 .结果表明:8种单糖在检测条件下进行了很好的分离,硅酸盐细菌胞外多糖中单糖成分有甘露糖和葡萄糖醛酸;金黄色葡萄球菌胞外多糖中单糖成分有核糖、葡萄糖,且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸和半乳糖;大肠杆菌胞外多糖中单糖成分有核糖和半乳糖,且在其生长过程中会消耗甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖;不同微生物胞外多糖组成和含量上均有较大差异.该研究建立了用反相高效液相色谱快速测定细菌胞外多糖组分的方法 .     

纳米磁性高分子复合微球的制备及表征

介绍了纳米磁性高分子复合材料的制备方法和对磁性高分子微球的各项特征的表征方法,并对其未来研究方向进行了展望。     

磁性Fe3O4微粒表面有机改性及表征

利用化学共沉淀法制备了磁性Fe3O4纳米微粒,用硅烷偶联剂MPS对所制备的磁性微粒进行表面有机改性,并用FTIR、XRD、TEM、XPS等表征方法对样品进行了表征,结果表明:MPS已经很好地键连到了磁性Fe3O4纳米微粒的表面。改性的磁性Fe3O4纳米微粒具有亲水和亲油两种性质,采用改性后的磁性微粒可以显著改善磁性微球的性能指标。     

磁性Fe_3O_4微粒表面有机改性及表征

利用化学共沉淀法制备了磁性Fe3O4纳米微粒,用硅烷偶联剂MPS对所制备的磁性微粒进行表面有机改性,并用FTIR、XRD、TEM、XPS等表征方法对样品进行了表征,结果表明:MPS已经很好地键连到了磁性Fe3O4纳米微粒的表面。改性的磁性Fe3O4纳米微粒具有亲水和亲油两种性质,采用改性后的磁性微粒可以显著改善磁性微球的性能指标。     

产细菌素米氏链球菌S3的筛选及其细菌素生物学特征研究

从大连地区泡菜中分离到32株乳酸细菌,通过牛津杯法,从中筛选出1株有明显抑菌活性代谢产物的米氏链球菌S3.排除酸、过氧化氢等干扰因素后,离心发酵液对指示菌Micrococcus flavs ATCC28001仍有抑菌作用,用胰蛋白酶对其透析液处理后活性丧失,说明它们产生的抑菌物质是细菌素.以S,菌株为试材,对其细菌素类物质的产生及细菌素粗提物进一步研究,发现在对数末期其抑菌活性最高,对热相对稳定(100℃20 min),易被胰蛋白酶、蛋白酶K和胃蛋白酶失活,显示活性的pH值范围为4.0～5.5,粗提液表现为不仅抗藤黄微球菌属、枯草芽孢杆菌属、金黄色葡萄球菌属等革兰氏阳性菌,而且对大肠杆菌(E.coli)等革兰氏阴性菌也有一定抑制作用.说明S3菌株产生的是一类具有广谱抗菌作用的细菌素.     

荚膜红细菌(Rhodobacter capsulatus)hemA基因的高效可溶表达及其酶学性质对比研究(英文)

研究目的:提供一种酶学性质优良的,可在大肠杆菌体内高活性可溶表达的,具有工业应用前景的5-氨基乙酰丙酸合成酶。创新要点:利用E.coli Rosetta(DE3)表达编码荚膜红细菌5-氨基乙酰丙酸合成酶(RC-ALAS)的hemA基因,实现其在大肠杆菌体内高活性可溶表达。以放射形土壤杆菌和类球红细菌hemA基因表达的5-氨基乙酰丙酸合成酶(AR-ALAS和RS-ALAS)为参照,对分离纯化后的RC-ALAS进行酶学性质对比研究。研究方法:工程菌的构建如图1所示,酶的分离纯化采用镍柱亲和层析和凝胶过滤层析,酶学性质的测定采用对比研究法。重要结论:(1)RC-ALAS酶活性高达198.2 U/mg,比AR-ALAS(151.1 U/mg)和RS-ALAS(116.9 U/mg)分别提高31.2%和69.5%;(2)RC-ALAS对底物琥珀酰辅酶A的专一性常数((kcat/Km)S-CoA)为1.4989,高于AR-ALAS(0.7456)和RS-ALAS(1.1699),具有较高的催化效率;(3)对含有荚膜红细菌hemA基因的工程菌进行补料分批发酵,发酵结束时,ALA的产量高达8.8 g/L(67 mmol/L)。     

杜鹃内生细菌的分离鉴定及抗性测定

以牛肉膏蛋白胨和NA培养基为分离培养基,研究从杜鹃中分离内生细菌和抗生素测定的方法.通过组织分离法从毛白杜鹃(R mucronatum)中分离培养后并用划线法分离得到内生细菌的纯培养物.通过菌落形态的观察和鉴别,革兰氏染色并镜检初步鉴定为5株不同的内生细菌.利用利福平及链霉素梯度平板法筛选得到相应的抗性突变株(3株),此突变株可作为细菌内生性鉴定中的抗生素标记菌株.组织分离时的表面消毒条件和方法直接影响内生细菌的分离纯化结果,表面消毒条件适宜则分离得到的内生细菌多样性增加.     

基于自组装及纳米磁球放大的大肠杆菌O157：H7的压电免疫检测

应用压电免疫传感器快速检测了大肠杆菌O157:H7(E．coli O157:H7)．将巯基乙酸(MACA)自组装在AT切向的压电金电极上,以N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为反应介质,形成酰氨键固定大肠杆菌抗体．并通过α-甲基丙烯酸(MAA)把抗体修饰在纳米磁球上,采用夹心法将抗原夹在两个抗体间,压电石英晶体交流阻抗(PQCI)和循环伏安法对修饰过程进行了表征,抗原浓度与形成夹心复合物前后的PQCI振动频移相关,其免疫传感器能在3h内检测2×103-8×108CFU／mL范围内的目标细茵,105CFU／mL情况下重复性实验的RSD在7％以下。     

土壤微生物分离纯化和分子鉴定实验研究

通过微生物学实验项目“微生物分离纯化和分子鉴定”的实施,在生物技术专业本科生中开展了土壤细菌的分离、纯化和鉴定实验。学生在老师的带领下从太行山采集了土壤样品,利用平板法进行了土壤中细菌、真菌和放线菌的分离、纯化,对分离纯化的细菌进行了16SrDNA序列分析,结果表明：该细菌为假单孢杆菌。学生通过野外采集土样,实验室分离纯化的实验过程,既锻炼了学生的实验动手能力,又培养了学生的学习兴趣,激发了学生的学习热情,加深了学生对微生物理论知识的理解,提高了学生的创新能力。     

PLGA载多柔比星磁性纳米微球的制备与表征

采用复乳法制备了PLGA载多柔比星磁性纳米微球,并对其形貌、粒径、磁性、包封率、载药量等特性进行了表征．实验结果证明,微球形貌良好,粒径分布在20±5nm范围内,在乳液中分散均匀,具有一定的磁性,微球包封率为41．2％,载药量为0．4％．微球制备方法简便易行,效果良好,各项特性指标符合药物载体要求,在生物活体癌症靶向治疗中具有潜在应用价值．     

产氢细菌分离纯化实验教学的研究与探索

通过教改项目“有机废水发酵产氢实验装置的研发与应用”的实施,在环境专业本科生范围内开展产氢细菌分离纯化实验教学的研究与探索.以污水处理厂的剩余污泥或者校园河水及底泥为实验样品,对模拟有机废水进行厌氧发酵产氢,利用亨盖特(Hungate)厌氧滚管法对产氢发酵液中的产氢细菌进行分离纯化,并通过产氢实验对产氢细菌进行验证.通过实验中的学习和锻炼,激发学生的兴趣,增强学生的学习热情,拓宽学生的专业知识面,加深学生对环境微生物学理论知识的理解,促进学生创新能力的培养和提高.     

Fe3O4/SiO2复合磁性粒子的制备及其药物缓释行为

目的:采用共沉淀法和溶剂热法制备Fe_3O_4纳米磁性粒子,对其药物控释性能进行检测。方法:以正硅酸乙酯(TEOS)为前驱体,采用Stober法,在乙醇/水溶液中,通过氨水催化水解硅醇盐,制得核壳式结构的Fe_3O_4/SiO_2复合磁性微球;以X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、Fourier红外光谱(FTIR)等手段表征样品的结构,研究复合材料的耐酸性、磁分离行为及对药物布洛芬的缓释行为。结果:SEM显示Fe_3O_4与Fe_3O_4/SiO_2粒子均为纳米颗粒,粒径分布基本均匀;与溶剂热法比较,共沉淀法制得的Fe_3O_4晶粒结晶度较好,XRD衍射峰强,SiO_2的包裹使得Fe_3O_4尖锐的特征衍射峰稍微下降,表明包覆过程没有破坏其晶体结构,Fe_3O_4/SiO_2样品谱图中出现了无定型SiO_2的衍射峰,红外谱图同样出现了无定型SiO_2的透射峰。结论:表面二氧化硅的包覆显著改善了四氧化三铁纳米粒子的耐酸性,磁分离实验表明二氧化硅的包裹减弱了Fe_3O_4的磁性,布洛芬缓释实验表明Fe_3O_4/SiO_2复合磁性微球具有较好的药物缓释效果。