快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立

为建立快速诊断小鹅瘟的PCR方法,根据已发表的GPV主要结构蛋白VP3基因序列,经多序列比对和Oligo6．0软件分析设计特异性PCR引物。以微量法提取病鹅肝组织DNA,优化PCR反应引物退火温度、循环次数和鉴定其特异性,并与酚氯仿法和煮沸法进行同步对比研究。结果显示,建立的PCR检测方法能够特异性检测病鹅肝组织中GPV的核酸,其扩增片段大小为343bp,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为35次。微量法提取的病毒核酸PCR检测灵敏度分别是酚氯仿法的50倍和煮沸法的2500倍。该PCR检测方法不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒以及健康鹅肝组织发生交叉反应。本研究建立的GPVPCR检测方法能够快速诊断小鹅瘟。     

脐带血基因组DNA的简单快速提取方法

目的:一种从人脐带血中快速提取基因组DNA的方法探索。方法:取新鲜抗凝脐带血,以无菌超纯水除去红细胞,再用碘化钾破碎白细胞,获取基因组DNA。结果:碘化钾法提取的基因组DNA经电泳检测条带明亮,含量及纯度均较高,可用于PCR扩增。结论:本实验建立的脐带血基因组DNA提取方法具有操作简便、快速和低成本的特点,适用于临床检测和研究。     

全流程自动化病毒核酸检测系统构建与优化

为提高实验室病毒核酸检测能力,减少检测人员暴露风险,该研究利用机械臂取代人工操作,整合病毒样本前处理、核酸提取纯化、PCR体系构建、PCR扩增检测4个子系统,并通过优化开盖功能、吸液防堵塞功能及液面追踪功能,实现全流程自动化病毒核酸检测系统稳定运行。优化后,开盖成功率提高至99.13%(P<0.001),吸液成功率提高至99.31%(P<0.001),构建PCR扩增体系成功率提高至98.89%(P=0.005)。通过优化时序管理,实现24小时千人份病毒样本全流程自动化核酸检测,满足高通量精准病毒核酸检测需求。     

几种药用植物基因组DNA提取方法研究

采用改良2×CTAB法和改良SDS法提取富含多糖和次生代谢物质的几种药用植物不同器官基因组DNA,并用紫外分光光度计分析,凝胶电泳和PCR扩增进行鉴定。结果表明:改良2×CTAB法和改良SDS法均能有效去除不同药用植物材料中的蛋白质、多糖、酚类及其他次生代谢物质,获得较高质量基因组DNA。但与改良SDS法相比,改良2×CTAB法提取的基因组DNA质量更好。     

病毒的基因结构

1病毒基因组的组成 病毒基因组可以由DNA组成,也可以由RNA组成,每种病毒颗粒中只含有一种核酸,或为DNA或为RNA,两者一般不共存于同一病毒颗粒中。组成病毒基因组的DNA和RNA可以是单链的,也可以是双链的,可以是闭环分子,也可以是线性分子。如乳头瘤病毒是一种闭环的双链DNA病毒,而腺病毒的基因组则是线性的双链DNA,脊髓灰质炎病毒是一种单链的RNA病毒,而呼肠孤病毒的基因组是双链的RNA分子。     

小麦基因组DNA提取方法比较研究

用4种方法对小麦基因组DNA进行提取,采用琼脂糖凝胶电泳法和核酸蛋白分析仪比较DNA的浓度和质量,结果显示,4种DNA提取方法在DNA浓度上有所差别,方法一所提取的DNA浓度最高,但消耗试剂最多;方法二所提取的DNA浓度最低,有蛋白质污染,但过程简单;方法三和方法四所提取的DNA浓度相当,方法三有蛋白质污染,过程简单,方法四纯度高,过程最复杂.采用同一对引物和反应体系对所提取的DNA进行PCR扩增,结果显示4种方法所提取的基因组DNA均能满足分子标记检测的需要.     

疏叶骆驼刺中包含一种新杆状DNA病毒（英文）

目的:新杆状DNA病毒的分离与鉴定。创新点:首次在高寒地区代表性植物——疏叶骆驼刺中发现杆状DNA病毒,为研究杆状DNA病毒的进化、地理分布及寄主范围提供了新证据。方法:利用分段聚合酶链式反应(PCR)克隆疏叶骆驼刺杆状病毒(Alhagi bacilliform virus,ABV)的基因组序列;通过基因组分析、序列比对和进化树分析阐明ABV的进化地位;用Southern印迹杂交和反向PCR分析ABV序列与宿主基因组的关系;并通过PCR检测确定ABV在我国西北地区疏叶骆驼刺中的分布。结论:本研究获得了7068 nt的ABV基因组序列,根据基因组结构、保守序列比对及进化树分析,推测ABV是一种新杆状DNA病毒。分子检测证据表明,ABV基因组序列已整合进入疏叶骆驼刺基因组中,但没有产生游离病毒。此外,对我国西北11个不同地区的疏叶骆驼刺进行PCR检测,结果显示其中9个地区的疏叶骆驼刺均含有ABV序列,由此表明ABV在我国西北地区的疏叶骆驼刺中广泛存在。     

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的 :比较三种不同的DNA提取方法提取人全血基因组DNA对DNA提取效率、纯度以及PCR扩增的效果影响。方法 :分别应用中山医科大学达安公司DNA提取液 ,珠海黑马医学仪器有限公司DNA提取液 ,胍盐酸法三种不同的方法提取人全血基因组DNA。结果 :三种方法提取的DNA纯度平均分别为 :1.4 8,1.5 1,1.5 6 ,各组间差异无显著性。 2 0 0 μL全血中所提取DNA总量平均分别为 1.6 μg ,2 .3μg ,4 .1μg。用 0 .8%琼脂糖凝胶电泳鉴定胍盐酸法制备的DNA效果较其它两种方法好 ,PCR扩增效果差异不明显。结论 :胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其它两种方法 ,提取效率高 ,为三种全血基因组DNA提取方法中之首选。     

漫谈病毒的功与过

<正> 病毒是一类没有细胞结构但有遗传复制等生命特征的低等生物,也称分子生物,主要由核酸和蛋白质组成。不同种病毒其大小、结构和形态各异。病毒没有独自的代谢系统,而是在病毒基因组作用下由寄主细胞进行合成核酸和蛋白质,并在细胞内装配成新的病毒粒子,因此它们只能在一定种类的活细胞内增殖。     

一种简便的石斛DNA提取方法

对石斛兰基因组DNA的提取方法进行了改良，提出一种简便、实用的DNA提取方法，经紫外检测、电泳检测及PCR检测，结果表明所得DNA的产量和纯度能够满足分子生物学研究操作的要求．