烤鸭肉在储存过程中菌群结构变化研究

探究烤鸭储存过程中菌群的变化,为延长其贮存期奠定理论基础．用酚、氯仿、异戊醇法提取烤鸭肉中细菌的基因组DNA,PCR扩增16SRNAV3区,用DGGE电泳技术分析菌群结构的变化情况,然后用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行烤鸭肉菌群结构相似性分析．PCR结果表明,成功扩增了细菌基因组DNA,为230bp;DGGE实验结果表明,DGGE分子指纹图谱上条带存在显著差异;用bionumberics软件分析,发现样本相似度不断变化,表明在储存过程中,烤鸭肉菌群结构发生了变化．该研究为延长烤鸭肉保质期提供理论参考依据．     

肠道菌群结构多样性初筛研究

目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用.     

禽肉在储存过程中菌群结构变化研究

研究禽肉储存过程中菌群的变化,为其长期贮存奠定理论基础.采用酚氯仿异戊醇法提取禽肉中菌群基因组DNA,并通过PCR扩增及DGGE电泳技术探讨其随保存时间延长,菌群结构变化情况.结果表明,成功扩增了菌群基因组DNA,为230bp.DGGE电泳结果发现,DGGE分子指纹图谱上条带存在显著的差异,用bionumberics软件分析DGGE结果,发现第一天和第二天样本的相似度最高为0.75,第三天与第一天相比,相似度为0.47,第四天与第三天相比,相似度又下降为0.16,表明禽肉在储存过程中不断有新的菌种出现,但是具体是什么菌种有待于高通量测序分析.     

PCR-DGGE技术分析孤独症家庭成员肠道菌群结构

目的应用PCR-DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis,变性梯度凝胶电泳）技术对孤独症家庭成员肠道微生物菌群结构进行研究.材料和方法提取粪便细菌总基因组DNA,PCR扩增细菌16S rDNA基因V3可变区,DGGE方法检测PCR产物.结果建立了孤独症家庭成员肠道菌群组成的DGGE指纹图谱,分析结果显示孤独症儿童肠道菌群结构的相似度为0.42-0.65,家庭内孤独症儿童与父母之间的相似度为0.42-0.68.结论 PCR-DGGE技术是一种快速有效的用于分析研究人体肠道菌群结构的技术.孤独症儿童肠道菌群结构与父母的相似度较高,提示生活环境对肠道菌群的组成有影响.     

玻璃珠法提取堆肥微生物总DNA及其DGGE分析

采用玻璃珠法从高温堆肥样品中进行了微生物总DNA的提取,以细菌16S rRNA基因 V3区通用引物进行了PCR扩增,随后用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对其微生物多样性进行评估.结果表明,玻璃珠法能够快速、有效地获得高质量的堆肥微生物总DNA,所得的DNA分子片段在15kb以上,使用细菌16S rRNA 基因通用引物(27F和1492R)对总DNA进行PCR扩增,获得了近全长的16S rDNA序列(约1.5kb);DGGE分析结果表明,用该方法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,能够进一步应用于群落结构分析.因此,玻璃珠法提取的DNA可以用于堆肥微生物的分子生态学研究及微生物群落结构分析.     

Reconditional PCR方法在微生物分子生态学研究中的一种应用

虽然PCR扩增过程中所引入的杂和双链分子在TGGE或DGGE图谱分析微生物群落多样性结果时,对分析结果准确性的影响日益受到广泛关注,但迄今为止,尚未提出任何系统的关于去除PCR扩增过程中所引入杂和双链分子的可行性方法.本文将给出一种在克隆前较为有效减少样本中杂和双链的改良方法——“Reconditional PCR”.通过对原初PCR扩增进行上述改进,随后进行的TGGE分析可以更加准确反映种群遗传多样性,所构建的克隆文库也可以更准确地反映原初样本的生物多样性.     

酸奶中菌种的分离和纯化过程探讨

高三课本中已经涉及到发酵工程,酸奶作为一种发酵产品,以其丰富的营养保健价值和香醇的口感受到了大家的厚爱,而引起酸奶发酵的菌种更引起学生浓厚的兴趣.     

DGGE和qPCR联用定量分析环境样品中优势菌群

精确定量环境样品中特定微生物类群的数量对阐明环境生物治理/修复过程中微生物的功能和效应具有重要意义.该文以土壤样品为例,将PCR-DGGE技术与定量PCR(qPCR)技术联用,定量检测样品中优势微生物类群数量.方法:抽提样品DNA,针对16S rDNA进行PCR-DGGE分析,明确样品中的优势菌群;再根据特定优势菌群的基因序列设计适合的定量引物,通过针对特定优势菌群的定量PCR分析,得到样品中优势菌群的数量信息.该方法灵敏度高、重复性好,并且无需培养,最大限度地保持了样品原始群落信息.     

系列化酸奶开发研究

将酸奶与水果、谷物、蔬菜、维生索、矿物质、中药等原辅料进行不同组合，生产各种符合卫生要求的，功能多样，风味独特的系列化酸奶。生产系列化酸奶成为人们日常生活中或餐桌上不可缺少的美味食品，为提高人们的机体免疫力，增强机体的活力和健康作出更多的贡献。     

脱硫菌16S rDNA片段的克隆与序列分析

生物脱硫技术在能源工业发展和环境保护等方面显示出潜在的优势。本文利用NaAc法抽取总DNA作模板，用真细菌专一性引物进行PCR方法扩增HB2的16S rDNA片段并进行琼脂糖凝胶的回收，选用PUCm—T—vector，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞，然后在含氨卞青霉素Ap／IPTG／X2gal的平板上筛选阳性克隆，PCR检测阳性克隆最后进行测序。结果表明，所测片段序列与多种假单胞杆菌的16S rDNA的同源性达98％以上。     

洛阳市地方酸奶中乳酸菌的分离及其杆球比分析

本试验通过浓度梯度稀释法、平板涂布法,分离洛阳市生生酸奶和阿新酸奶中的乳酸菌,并采用革兰氏染色法初步鉴定该乳酸菌,然后通过平板菌落计数法分别计数两种酸奶的杆球比.结果表明,两种酸奶产品中的乳酸菌为球菌和杆菌,均成革兰氏阳性,生生酸奶和阿新酸奶中的杆球比均为1∶1,且两种酸奶中含菌量均达到并超过国家要求的酸奶中乳酸菌活菌数量,属合格产品,其中生生酸奶中乳酸菌的含量约为阿新酸奶含量的一半,相比较而言,阿新酸奶的营养价值较高.     

Detection of bacterial DNA by PCR and reverse hybridization in the 16s rRNA gene

The clinical diagnosis of sepsis is difficult, particularly in neonates. To devise a rapid and reliable method for identifing bacteria in blood and cerebrospinal fluid (CSF), we developed a pair of primers according to the gene encoding 16 s rRNA, found in all bacteria. DNA fragments from different bacterial species and from clinical samples were detected with polymerase chain reaction (PCR), and with reverse hybridization using a universal bacterial probe, a gram-positive probe and a gram-negative probe. Our results showed that a 371 bp DNA fragment was amplified from 20 different bacterial species. No signal was observed when human DNA and viruses were used as templates. The sensitivity could be improved to 10⁻¹² g. All 26 culture-positive clinical samples (22 blood samples and 4 CSF samples), were positive with PCR. The gram-negative and gram-positive probe hybridized to clinical samples and to known bacterial controls, as predicted by Gram’s stain characteristics. Our results suggest that the method of PCR and reverse hybridization is rapid, sensitive and specific in detecting bacterial infections. This finding may be significant in the clinical diagnosis of sepsis in neonates. Project (396457) supported by the Zhejiang Provincal Natural Science Foundation.     

常见酸奶酸菜中乳酸菌的筛选及乳酸菌素的特性研究

以日常生活中常见的也是深受人们喜爱的酸奶和下饭菜(酸菜、泡菜)等富含乳酸菌的食品为原材料,通过MRS分离培养基等选择性培养基分离出若干株乳酸菌,进一步纯化分离得到单一的乳酸菌种保存待用,并对乳酸菌的生长条件进行测定。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等病原菌作为指示菌,通过抑菌实验、蛋白酶处理实验等系列实验来检测乳酸菌具有较好抑制病原菌生长能力的内在物质——某种多肽类物质,称之为乳酸菌素。对筛选出的菌株进行相应的生理生化实验,鉴定出有乳杆菌属、链球菌属、片球菌属和明串珠菌属等多个属的乳酸菌株。     

莲藕汁凝固型酸奶的研制

以莲藕汁和牛奶为主要原料,市售酸奶作发酵剂,制成具有双重营养与保健功能的酸奶.通过正交实验筛选出莲藕凝固型酸奶的最佳工艺参数及配方:莲藕汁/纯牛奶=5:5(V/V),加含量为5%的蔗糖、0.02%的安赛蜜,加入10%市售酸奶作为发酵剂,在43℃下发酵6 h,以此工艺生产出具有莲藕特有风味的酸奶.     

Natural populations of lactic acid bacteria in douchi from Yunnan Province, China

This research was aimed at isolating and identifying the predominant lactic acid bacteria (LAB) in the traditional Chinese salt-fermented soybean food, douchi, from Yunnan, China. The predominant LAB present were isolated and identified by conventional culture-dependent methods combined with molecular biological methods. Two hundred and sixty isolates were obtained from thirty kinds of traditional fermented douchi from six cities and counties in Yunnan, and those strains were divided into twelve groups by their morphological and biochemical characteristics. Based on 16S ribosomal DNA (rDNA) sequencing and analysis, 56 representative strains were identified as belonging to 6 genera and 14 species: Lactobacillus (4 spp.), Weissella (3 spp.), Pediococcus (2 spp.), Staphylococcus (2 spp.), Enterococcus (1 sp.), and Bacillus (2 spp.). The results show that douchi contains a large natural population of LAB of diverse composition from which some strains could be selected as starters for functional fermented foods. This is the first study on the original douchi from Yunnan, and the results suggest that it may be a useful source for the isolation of LAB. This study has also laid a foundation for further research on developing functional douchi products.