聚合酶链式反应技术及应用简介

聚合酶链式反应（PCR）又称为无细胞分子克隆系统,或特异性DNA序列体外走向酶促扩增法。该技术是由美国GetuS公司和加尼福利亚大学子1985年联合创建的。1988年,随着耐热聚合酶的商品化,PCR技术的应用得到了突飞猛进的发展,并因此在1989年被世界著名的《Science》杂志列为世界重大科学发明。PCR是90年代分子生物学领域的一项革命性突破,由于该技术敏感性高,特异性强,使用方便快捷,对原始材料质量要求低,现已在遗传性疾病、传染病及肿瘤诊断研究等领域得到广泛运用。1993年,PCR的发明人MSlliS因发明了PCR技术而获得诺贝尔…     

聚合酶链式反应（PCR）技术

聚合酶链式反应（PCR）技术，是八十年代中期发展起来的新技术，它的诞生改变了分子生物学研究的指导方法，本综述了PCR技术的原理，操作方法及其在许多领域的广泛应用，随着PCR技术的进一步发展和完善，将进一步推动分子生物学的理论研究，其应用领域。     

使用中的聚合酶链式反应仪的温度分布及维护

聚合酶链式反应仪（PCR仪）是分子生物学的基本仪器。它通过设定不同温度变化条件对被扩增的DNA片段进行变性、退火和聚合处理，以达到将DNA片段的量成倍地扩增的目的。因此温度的分布和准确程度，尤其是各个温度的时间控制直接影响DNA片段扩增的效率。通过定期对使用中的PCR仪进行检测，可以了解仪器的工作状况，及时发现问题并加以维护、保养。     

常用聚合酶链式反应（PCR）技术概述

聚合酶链式反应（PCR）技术在过去20多年中,经过不断改良以及与其他研究手段相结合,如今已发展为有数十种之多研究方法的一套技术手段。本文对较常用的几种PCR技术手段的原理、优点、缺点和应用等作了概述。     

聚合酶链式反应技术在生物学及医学中的应用

1985年美国Cetus公司人类遗传学研究室的学者Mullis等人建立了一套体外大量快速扩增特异DNA片段的技术——聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reactbn，PCR)，这一技术的发明，给整个分子生物学领域带来了一场划时代的革命。由于这项工作，Mullis获得了1993年的诺贝尔化学奖。一项实用性的技术在面世后仅仅8年就荣膺诺贝尔奖项，这在目前的科学史上是绝无仅有的，这从另一个侧面说明了这项技术在科学研究中的价值。     

食品专业教学中聚合酶链式反应机理的教学技巧

对于初学者或非生物专业学生来讲,聚合酶链式反应(PCR)的机理和指数扩增机理比较抽象而难以理解。本文就食品专业本科生和研究生教学中如何技巧性地讲授这一反应的机理进行了图文并茂有层次的阐述,包括问题的引入、复制的原理、指数扩增的依据以及如何在食品微生物检测中应用几个方面。     

PCR技术在植物生物学方面的研究和应用

<正> 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种根据生物体内 DNA 复制的特点而设计的在体外对特定 DNA 序列进行快速扩增的新技术。自1985年诞生以来,PCR 技术不断完善,特别是随着耐热的 Taq DNA 聚合酶的应用和自动化 PCR 仪的设计成功,使得 PCR 技术的操作程序大大简化,目前在分子生物学及相关学科中得到了广泛的应     

聚合酶链式反应(PCR)技术在临床检验中的应用

聚合酶链式反应是近年来发展起来的体外基因扩增技术,已经在很短的时间里迅速进入生命科学、医学研究、遗传工程、疾病诊断、法医学、考古学等各个领域。本文简要介绍这种技术在临床检验中的应用。     

新型DNA聚合酶——Pfu酶的研究

介绍了PCR技术的发展历程,阐述了DNA聚合酶对于PCR技术发展的重要性。比较了各种DNA聚合酶如Taq、Vent、Pwo和Pfu酶的性能,从而显示新型DNA聚合酶-Pfu酶的性能优势,并指出完善Pfu酶仍需努力的方向。     

影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素

研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。     

聚合酶链反应检测儿童急性呼吸道流感嗜血杆菌感染的研究

目的 :建立儿童急性呼吸道感染的PCR检测方法 ,并与常规方法进行比较。方法 :选择编码外膜蛋白P6基因作为靶片段设计引物 ,分别用PCR方法及常规培养法检测 78例急性呼吸道感染儿童。结果 :建立的PCR检测法可以检测 10～ 5 0个流感嗜血杆菌 ;78例急性呼吸道感染儿童中PCR方法检出 4 2株 (5 3.8% ) ,常规培养方法检出 33株 (4 2 .3% ) ,培养法检测阳性者PCR方法均为阳性。PCR方法较培养法有显著性差异。结论 :PCR方法检测呼吸道流感嗜血杆菌感染比常规方法更快速 ,更简便 ,更敏感。PCR方法检测流感嗜血杆菌有可能成为临床流感嗜血杆菌感染诊断的一种实用、理想的方法。     

聚合酶链反应检测真菌感染的实验研究

本研究以NS5-NS6为引物,扩增真菌同源性序列ssu-rDNA片段,建立广范围真菌检测的方法。用此方法扩增医学主要致病真菌、细菌和人体细胞,结果所有真菌均扩增出一个约310bp的产物,而细菌和人体细胞均扩增阴性,1pg白色假丝酵母菌DNA即可检出。     

An Inexpensive Gel Electrophoresis-Based Polymerase Chain Reaction Method for Quantifying mRNA Levels

In order to engage their students in a core methodology of the new genomics era, an ever-increasing number of faculty at primarily undergraduate institutions are gaining access to microarray technology. Their students are conducting successful microarray experiments designed to address a variety of interesting questions. A next step in these teaching and research laboratory projects is often validation of the microarray data for individual selected genes. In the research community, this usually involves the use of real-time polymerase chain reaction (PCR), a technology that requires instrumentation and reagents that are prohibitively expensive for most undergraduate institutions. The results of a survey of faculty teaching undergraduates in classroom and research settings indicate a clear need for an alternative approach. We sought to develop an inexpensive and student-friendly gel electrophoresis-based PCR method for quantifying messenger RNA (mRNA) levels using undergraduate researchers as models for students in teaching and research laboratories. We compared the results for three selected genes measured by microarray analysis, real-time PCR, and the gel electrophoresis-based method. The data support the use of the gel electrophoresis-based method as an inexpensive, convenient, yet reliable alternative for quantifying mRNA levels in undergraduate laboratories.     

基于IT环境下的供应链管理

本文概述了供应逻管理的基本思路与信息技术的作用，分析了传统的供应链管理模式中存在的问题，提出了企业在IT环境下要建立起以信息技术为支撑体系的集成化的供应链管理模式。     

工艺尺寸链在三类工艺问题中的应用

本文结合实例,探讨了工艺尺寸链在工序精度分析、测量基准选取和定位误差计算这三类工艺问题中的应用。     

虚拟价值链:价值链研究的新发展

本文首先回顾了价值链研究的发展历程，然后基于企业竞争格局和竞争环境的巨大变化，指出传统的物质价值链（Physical Value Chain）理论所存在的主要缺陷，最后试图提出虚拟价值链（Virtual Value Chain）理论是适合现代企业竞争环境和竞争条件的，是对传统物质价值链理论的重大突破，是价值链理论研究的新发展。     

利用已知微卫星引物寻找目的DNA

利用聚合酶链式反应(PCR)方法特异性扩增河北省饶阳县大仓鼠(Circetulvs triton)基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳检测以期出现特异性条带，可以进一步回收进行序列分析．     

On-Site Pedagogical Content Knowledge Development

Experiences and reflection have long been regarded as a foundation for pedagogical content knowledge (PCK) development. However, little is known about how experienced teachers develop their PCK via reflection-in-action during their moment-to-moment classroom instruction. Drawing upon data sources including classroom observations, semi-structured interviews and stimulated recall interviews based on lesson videos, this study examined instances when four experienced teachers were found to invent new instructional strategies/representations on the spot during the lesson (referred to as on-site PCK development) in their first attempts at teaching a new topic. The study documented the moment-to-moment experiences of the teachers, including their reconstructed thought processes associated with these instances of on-site PCK development. An explanatory model of a three-step process comprising a stimulus, an integration process and a response was advanced to account for the on-site PCK development observed among the teachers. Three categories of stimulus that triggered on-site PCK development were identified. Factors influencing the integration process and, hence, the resulting response, included teachers’ subject matter knowledge of the new topic, their general pedagogical knowledge and their knowledge of student learning difficulties/prior knowledge related to the new topic. Implications for teacher professional development in terms of how to enhance teachers’ on-site PCK development are discussed.     

快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶

用含有TaqDNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli DH5α菌株，IPTG诱导表态TaqDNA聚合酶。利用该酶的热，经两轮－70℃深度冷冻和75℃水浴，细菌裂解释放内容物，以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合以达到快速纯化Taq DNA聚合酶的目的。PCR扩增反应表明所制备的Taq DNA聚合酶的活力、敏感性、特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。     

Supply Chain Performance Analysis of Dow Jones Industrial Average Indexed Firms and Top 50 Supply Chain Firms

Operations and Supply Chain Management (OSCM) courses may cover supply chain strategies, supply chain classification, and supply chain performance. Familiarity with various manufacturing and logistics firms would help students to better understand such topics. Information on the Dow Jones Industrial Average indexed firms and top 50 supply chain firms by Gartner is easily accessible and typically covers a variety of industries from chemical, food/beverage, high‐tech to retail, to name a few. Instructors of OSCM courses can take advantage of this kind of information to discuss industry characteristics and supply chain classification. We present how to collect financial data, calculate supply chain metrics (e.g., inventory turns, profit margin, and cash‐to‐cash cycle) by building a spreadsheet model and creating an earns‐turns matrix, which prescribes supply chain classification. We also show how to analyze supply chain performance and describe industry characteristics based on the earns‐turns matrix. We provide vital questions and takeaways for instructors to lead and wrap‐up discussions. Students claim that they appreciated learning about industry characteristics and different supply chain strategies through the earns‐turns matrix analysis.