大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的培养及鉴定

目的：探讨SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法的可行性.方法：分离并消化大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,采用胶原酶消化组织块方法,并进行免疫组化鉴定.结果：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,易体外贴壁,经消化酶消化后,24h内贴壁的细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达较其它时段贴壁的细胞高.结论：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原代培养可行,对研究ED病治疗机制有重要意义.     

大鼠睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。     

鲟鱼胚胎细胞分离培养的初步研究

研究了鲟鱼胚胎细胞的体外分离培养方法,并比较了体外培养液及添加血清浓度等条件,初步探讨了鲟鱼胚胎培养技术.结果表明,采用机械分离法,受精后48h的胚胎可获得较多的细胞,胚胎细胞在28℃,DMEM+10%胎牛血清培养液及无CO2条件下,可进行贴壁生长.     

小鼠Bmi1基因的克隆及其在支持细胞中的表达

目的从昆明鼠睾丸中克隆Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞（SSCs）的滋养层.方法以5日龄昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染TM4细胞（睾丸支持细胞株）,在转染后40 h进行免疫荧光鉴定.结果成功克隆小鼠睾丸Bmi1基因的cDNA,测序正确;免疫荧光细胞染色显示,转染后的支持细胞中有Bmi1蛋白表达.结论本研究为以转染了Bmi1基因的支持细胞作饲养层培养SSCs奠定了基础.     

骨骼肌卫星细胞及其在组织工程与创伤修复中的应用

骨骼肌的成体肌细胞数量基本保持恒定,骨骼肌的再生主要依赖骨骼肌卫星细胞的分化与增殖。骨骼肌卫星细胞是能够被激活、进而分化为肌细胞的一类成肌细胞。本文对骨骼肌卫星细胞的发生、体外培养与分化以及增殖的调控进行综述,并对激活肌卫星细胞在组织工程和创伤修复中的应用进行介绍。     

刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的研究

目的:研究刺五加多糖对体外培养人白血病K562细胞有无增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:取培养至对数生长期的K562细胞(密度为5×104/mL和1×106/mL)分别接种于96孔培养板(100μL/孔)及50mL培养瓶(1.5mL/瓶)中,加入不同浓度的刺五加多糖作用24h后,用CCK-8法检测刺五加多糖对K562细胞增殖抑制作用;荧光显微镜检测细胞凋亡。结果:不同浓度刺五加多糖(0.405、0.810、1.620、2.430、3.240mg/mL)作用K562细胞24 h,抑制率分别为16%、27%、48%、50%、55%;荧光显微镜下观察发现培养K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。结论:刺五加多糖对体外培养K562细胞生长有明显的抑制作用,可诱导K562细胞凋亡。     

四鳃鲈内脏组织细胞原代培养

采用动物组织块培养法对四鳃鲈（Trachidermus fasciatus）内脏组织进行离体培养研究.对培养条件进行了优化,比较了不同培养基（DMEM、M199）、不同生长条件（加生长因子、不加生长因子）和不同培养条件（CO2培养箱、恒温培养箱）下离体培养细胞的生长情况.结果显示：内脏组织接种后3～5 h,细胞迁移伸展,6 d后生长细胞集群汇合,来源于不同组织的再生细胞呈现不同的形态.在M199培养基中添加青链霉素抗生素（0.28%）及10%小牛血清和1%碱性成纤维生长因子、控温27℃、pH值为7.2～7.4并在CO2（5%）培养箱中培养的内脏细胞生长最快.不同来源的组织培养中肝细胞在离体培养中细胞增殖生长速度最快.     

猪耳皮肤组织冷藏后成纤维细胞的特性变化

目的:本试验旨在探究猪耳皮肤组织块在4℃冷藏条件下保存后,考察其成纤维细胞的细胞活力、细胞周期及细胞骨架等特性变化。方法:采集猪耳皮肤组织,分别冷藏保存2、4、7d后,进行成纤维细胞分离培养,同时设立新鲜组织块对照组,观察组织块原代细胞培养开始贴壁以及80%汇合的时间,再传至第3代,MTT检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞周期,免疫荧光染色检测细胞骨架的变化。结果:与对照组相比,各保存组成纤维细胞经组织原代培养后开始贴壁和80%汇合时间滞后,细胞形态都良好;保存7d的细胞活力与对照组相比显著性降低;保存4d和7d的G0/G1期细胞显著性增加,保存7d的S期细胞显著性降低;各组细胞具有良好的骨架系统,各给药组微管蛋白的荧光强度与对照组也无显著差异。结论:猪耳缘组织块在4℃保存后,经原代培养和继代培养,可获得具有正常增殖活力和细胞特性的成纤维细胞。     

大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度（98.4%）明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型.     

小鼠肝实质细胞原代培养方法及鉴定

目的:寻求一种简单的原代小鼠肝细胞培养方法.方法采用Ⅳ型胶原酶原位灌流方法分离肝细胞,并采用免疫荧光和透射电镜方法对其进行鉴定.结果:光镜下细胞贴附、伸展、呈圆形、椭圆形及多边形.细胞核体积较大,其中有许多双核的肝细胞.细胞浆为颗粒状,细胞边界轮廓清晰可见.采用Cytokeratin 18的抗体进行肝细胞免疫荧光染色鉴定,显示细胞染上绿色荧光,细胞轮廓清晰.采用透射电镜鉴定,细胞在电镜下均可见到:肝细胞上有大量微绒毛,细胞间有特征性的紧密连接以及毛细胆管.胞浆内有丰富的细胞器.结论:成功地在体外培养了小鼠肝细胞并对其进行了鉴定,为进一步的实验研究奠定基础.     

负荷运动对人体骨骼肌卫星细胞的影响

骨骼肌在运动损伤、发育和重建等过程中卫星细胞具有重要的生理作用。适宜的运动训练可以激活肌卫星细胞,使之增殖并向成肌的肌卫星细胞转化。文章阐述了骨骼肌卫星细胞的特征、负荷运动对肌卫星细胞的影响,以及运动对卫星细胞的激活与增殖的作用机制;并对人体衰老过程中肌卫星细胞的变化规律进行分析与探讨。     

运动性骨骼肌微损伤和骨骼肌细胞凋亡的关系探析

细胞凋亡是细胞接受某种信号或受到某种因素刺激后,为了维持内环境稳定而发生的一种主动性消亡过程,但是过度的细胞凋亡与多种疾病有关。运动性骨骼肌微损伤是运动过程中肌肉受到牵拉及肌组织内生理生化环境改变而造成的骨骼肌细胞超微结构的损伤。很多实验表明运动训练开始后骨骼肌内的生理生化环境都会导致骨骼肌细胞凋亡,而且细胞凋亡与运动性骨骼肌微损伤具有相同的时相性,显示凋亡可能是运动性骨骼肌微损伤的一个重要因素,从而探讨运动性骨骼肌微损伤的机制。     

食品中大肠菌群半固体培养基快速检测法的研究

本研究主要研究食品中大肠菌群半固体培养基快速检测法。结果表明：在乳糖发酵培养基中添加0．8％琼脂、0．5％SDS的半固体快速检测法现象明显,结果报告时间大大缩短,且结果同样可用MPN报告。     

双孢蘑菇液体菌种培养基的优化

采用正交试验优化双孢蘑菇的液体培养基配方,发现黄豆粉、葡萄糖、硫酸镁、以及玉米粉和葡萄糖的交互作用对双孢蘑菇的液体培养有显著影响,磷酸二氢钾、麦麸汁对实验结果无显著影响。双孢蘑菇最佳液体培养基配方为:黄豆粉2%,玉米粉2%,葡萄糖2%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.20%,麦麸0.20%。把双孢蘑菇液体菌种接入小麦栽培种中,菌丝表现出生长快的优势,生长速度较为一致,满瓶时间短,证明利用液体菌种制备栽培种比固体菌种具有更大的优势。     

Effect of cultivating conditions on α-galactosidase production by a novel Aspergillus foetidus ZU-G1 strain in solid-state fermentation

The work is intended to achieve optimum culture conditions of α-galactosidase production by a mutant strain Aspergillusfoetidus ZU-G1 in solid-state fermentation (SSF). Certain fermentation parameters involving moisture content, incubation temperature, cultivation period of seed, inoculum volume, initial pH value, layers of pledget, load size of medium and period of cultivation were investigated separately. The optimal cultivating conditions of α-galactosidase production in SSF were 60%initial moisture of medium, 28 ℃ incubation temperature, 18 h cultivation period of seed, 10% inoculum volume, 5.0～6.0 initial pH of medium, 6 layers of pledget and 10 g dry matter loadage. Under the optimized cultivation conditions, the maximum α-galactosidase production was 2037.51 U/g dry matter near the 144th hour of fermentation.     

骨骼肌卫星细胞的活性及影响因素

骨骼肌卫星细胞通过激活、基因表达、增殖分化途径主要形成成肌干细胞,维持、修复骨骼肌结构和功能.卫星细胞的活性受多种因素影响.主要从卫星细胞的激活、基因表达、增殖分化等活性和影响卫星细胞活性的各种相关因素两大方面对骨骼肌卫星细胞进行综述.     

Genotypic differences in callus induction and plant regeneration from mature embryos of barley (Hordeum vulgare L.)

An efficient induction system and regeneration protocol based on mature barley embryos were developed. Embryos isolated from mature seeds, dehusked by hand and inoculated with longitudinally bisected sections, showed low contamination and high primary callus-forming capability. The influences of nine culture media on primary callus induction and germination from the mature embryos of barley cultivars Golden Promise and Zaoshu 3 were analyzed. The results showed that the two cultivars had much higher values of primary callus induction in the B16M6D medium as compared to the other eight medium formulations, with a frequency of 74.3% and 78.4% for Golden Promise and Zaoshu 3, respectively. Furthermore, Zaoshu 3 demonstrated particularly high stability in callus induction over the different media, indicating its potential utilization in callus induction and regeneration for its good agronomic traits and wide adaption. There were significant differences amongst 11 barley genotypes in terms of primary callus induction in the optimum medium, with percentages of callus induction and germination response ranging from 17.9% to 78.4% and 2.8% to 47.4%, respectively. Green plantlets of Dong 17, Golden Promise, and Zaoshu 3 were successfully developed from primary calli through embryogenesis, with green plant differentiation frequencies ranging from 9.7% to 21.0% across genotypes.     

贡蕉胚性细胞悬浮培养过程中几个参数的变化

以贡蕉（Musa acuminata cv．Mas）未成熟雄花序来源的胚性愈伤组织为材料建立了贡蕉胚性细胞悬浮系（Embryogenic cell suspensions,ECS）,测定了其培养过程中培养物的鲜重、干重及培养液的PH值、阿拉伯半乳糖蛋白（Arabinogala ctan proteins,AGPs）含量等生长参数在培养过程中的变化动态．结果表明：在培养周期内,培养物的鲜重在继代后第24d达到高峰,干重在继代后第21d达到高峰;培养液中的pH值表现为先下降,第3d下降到最低,随后开始升高;培养液中AGPs含量随培养天数而增加,在第14d含量达到最高,随后保持稳定状态．     

Primary leiomyosarcoma of the nipple-areola complex： Report of a case and review of literature

Primary leiomyosarcoma of the nipple-areola complex is extremely rare. Less than ten such cases have been reported in English literature so far. Herein we describe a 52-year-old female presenting with a 1.5 cm× 1.1 cm×0.7 cm nodular lesion over her left nipple, and leiomyosarcoma was proved by pathological examination of the excised specimen. Positron emitted tomogram (PET) revealed no abnormal signal other than the primary site. Microscopically, this poorly circumscribed tumor was composed of interlacing bundles of smooth muscle cells with bizarre and pleomorphic nuclei, as well as prominent nucleoli. Its mitotic count was up to 7 mitoses per 10 high power fields (HPF). Immunohistochemical study of tumor cells revealed positive stain for α-smooth muscle actin and vimentin; and negative for cytokeratin, CD34 and S-100. Left simple mastectomy was undertaken and no residual mass lesion was noted on the resected specimen. Related literatures about the diagnosis and treatment for breast leiomyosarcoma will be presented here.