双引物PCR检测抗草甘膦豆粕饲料中的转基因成分

在一个PCR反应体系内,同步扩增大豆内参照基因lec和抗草甘膦大豆外源基因盒中的CaMV35s启动子、nos终止子或cp4 epsps基因,建立转基因大豆双引物PCR检测方法.PCR产物用限制性内切酶酶切进一步鉴定.结果表明,用双引物PCR扩增出标准转基因大豆阳性对照、阿根廷大豆、美国RR大豆及豆粕中的lec基因和相应的特异性外源基因;酶切反应确证PCR产物为特定片段大小的目的序列.建立的双引物PCR法适用于抗草甘膦大豆原料和豆粕饲料中转基因成分的简单化、高精度和高灵敏检测.     

实验动物金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立和应用

为了快速检测出实验动物临床样品中的金黄色葡萄球菌（SA），建立了一种普通PCR方法。同时合成3对引物，用金黄色葡萄球菌的阳性核酸DNA做模板，进行引物扩增，筛选出一对能扩增出270 bp单一目的片段的引物。逐一对该引物灵敏度、重复性和特异性进行了测试。实验结果显示，该方法具有高度的特异性，除了识别金黄色葡萄球菌基因组外，对小鼠其他常见病原菌均不发生交叉反应，具有优良的敏感性和稳定性。两个不同操作人员，在两个不同时间段，利用两台不同品牌的PCR仪器，用金黄色葡萄球菌阳性样品进行测试，结果显示此方法再现性良好。用该方法检测待测样本，效果也良好。     

活性污泥中氨氧化菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的比较

为了快速准确地检测活性污泥中氨氧化菌(AOB)的拷贝数,探求一种新的快速简便的绝对定量标准品的制备方法。利用纯化的PCR产物和重组质粒标准品分别进行绝对定量,比较两者熔解曲线、扩增曲线、标准曲线和绝对拷贝数等方面的差异,分析两种标准品制备方法应用方面的优势。结果显示,两种标准品制备的熔解曲线都呈单一尖峰、扩增曲线指数期平行、标准曲线R299%,PCR产物作为标准品得到的AOB绝对拷贝数小于质粒标准品的结果(P0.05),表明纯化的PCR产物作为标准品较制备重组质粒标准品而言,操作过程更加简便、经济、对人员专业要求更低,在其纯度较高的情况下,具有和重组质粒标准品一样的应用效果。     

提高PCR反应特异性的几点策略

根据近年来PCR方法的一些新进展，从不同方面综述了提高PCR扩增特异性的方法。     

利用搭桥PCR法合成vcath-BmKIT基因

搭桥PCR技术采用具有互补末端的搭桥引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段拼接起来。本实验通过设计合适的搭桥引物,利用PCR技术,将基因vcath和BmKIT连接在一起,构建了融合基因,为研究基因vcath和BmKIT的表达及其在生物杀虫剂中的协同作用奠定了基础。     

实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

PCR技术研究进展

PCR技术是近年发展起来的一种体外特异性扩增DNA片段的新技术,在分子生物学检测与研究中得到广泛应用.本文扼要介绍了PCR技术的基本原理,对PCR技术的方法及特点作了详细阐述,特别是PCR技术在分子生物学的理论研究,遗传病的产前诊断、突变基因的检测、法医学鉴定以及病毒和癌症检测等应用研究的新进展作了综述.预测PCR技术在分子生物学的各个领域的应用具有广阔的前景.     

例析未知序列的PCR扩增

本文例析并介绍了未知序列的PCR扩增方法.要对已知序列两侧的未知序列进行测序分析,可将其连成环状,利用已知序列设计引物,进行反向PCR.为减少随机片段的含量,可再进行巢式PCR.未知序列也可用热不对称交错PCR来扩增.     

皖南花猪ESR基因PCR扩增影响因素初探

采用PCR扩增皖南花猪ESR基因140bp的特异片段,对ESR基因PCR扩增的相关因素进行研究,以提高扩增的效率,通过多次实验确定皖南花猪ESR基因的PCR反应条件.     

影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素

研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。     

PCR在动物源性食品安全方面的应用

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是一项体外酶促扩增DNA技术,具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速高效等特点。在肉品科学方面有潜在的应用价值,本文综述PCR在肉类科学中的应用：如微生物的检测,肉类品种的鉴定等。     

PCR技术的应用及前景展望

综述现代生物技术PCR在分子生物学研究、医学、法学和生物化学等领域的多种应用,展望PCR技术广阔的发展前景     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

食品是人类赖以生存和发展的物质基础,而食品营养、安全问题是关系到人体健康和国计民生的重大问题,已经引起了人们的高度重视。在选用微生物的快速检测方法时,应该考虑到方法的预期目标的精确性、检测时间、经济性、可接受性、操作简便性、技术服务等因素。介绍了PCR技术检测食品微生物的优点,分析了PCR技术在食品检测中的应用及一些新的PCK检测技术,进一步说明了这些技术在食品微生物检测中的发展和应用。     

FTA滤膜用于PCR检测肉中志贺氏菌的研究

建立直接从肉中检测志贺氏菌的快速、敏感、特异的PCR检测方法．根据GenBank公布的志贺氏菌属的侵袭性质粒抗原基因IpaH的保守序列设计特异性引物．经过PCR扩增得到393bp的产物．经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物．使用FTA滤膜处理样品．再通过PCR方法检测志贺氏菌．猪肉、牛肉、羊肉检测的检出限均为10CFU／mL匀浆,可在6h内完成对肉中志贺氏菌的检测．FTA滤膜用于PCR检测肉中志贺氏菌灵敏度高,耗时短,为肉中志贺氏菌的快速检测提供了新的方法．     

PCR技术在环境监测中的应用

PCR技术是在体外合成特异性DNA片段的方法，其基本原理类似于生物体内的DNA的复制，PCR技术应用于环境监测具有快速、灵敏、准确、简便、特异性强的特点，被广泛应用于水体、气体和土壤等方面环境污染的监测中，PCR技术对环境保护具有深远的意义.     

PCR技术在环境监测中的应用

PCR技术是在体外合成特异性DNA片段的方法,其基本原理类似于生物体内的 DNA的复制,PCR技术应用于环境监测具有快速、灵敏、准确、简便、特异性强的特点,被广泛应用于水体、气体和土壤等方面环境污染的监测中,PCR技术对环境保护具有深远的意义．     

使用中的聚合酶链式反应仪的温度分布及维护

聚合酶链式反应仪（PCR仪）是分子生物学的基本仪器。它通过设定不同温度变化条件对被扩增的DNA片段进行变性、退火和聚合处理，以达到将DNA片段的量成倍地扩增的目的。因此温度的分布和准确程度，尤其是各个温度的时间控制直接影响DNA片段扩增的效率。通过定期对使用中的PCR仪进行检测，可以了解仪器的工作状况，及时发现问题并加以维护、保养。     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

计算机软件在PCR实验上的应用

对与PCR实验紧密相关的计算机软件——引物设计软件、凝胶图像处理软件、数据分析软件和文献查找软件的应用进行了概述。