干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)3MP-5-3产β-甘露聚糖酶条件优化

为了提高β-甘露聚糖酶的产量,对干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)3MP-5-3产β-甘露聚糖酶的发酵条件进行单因素试验优化。通过DNS法测定酶活和测量OD值考察菌株生物量。优化后的培养基组分为：6 g·L^-1角豆胶,8 g·L^-1葡萄糖,7 g·L^-1酵母浸粉,10 g·L^-1蛋白胨,10 g·L^-1牛肉膏,3 g·L^-1柠檬酸铵,6 g·L^-1乙酸钠,8 g·L^-1磷酸氢二钾,1 mL吐温80,初始pH 5.5。培养条件为：5%接种量,120 mL/250 mL装液量,33℃,100 rpm·min^-1振荡培养48 h。菌株3MP-5-3 β-甘露聚糖酶活性由19.93±0.07 U·mL^-1提高至64.55±0.20 U·mL^-1,是初始产量的2.24倍。     

褐色高温单孢菌PE-211纤维素酶的纯化及固定化研究

本研究望能为其在工业、农业、轻工业等方面的应用提供一定的理论依据。研究方法如下：利用摇瓶培养基进行培养,经硫酸铵盐析、2LSephadexG-100柱纯化,用壳聚糖进行固定化。结果是粗酶液被纯化,以戊二醛为交联剂制备固定化酶,得出结论：褐色高温单孢菌PE-211纤维素酶经硫酸铵盐析、2KSephadexG-100柱纯化,粗酶液被纯化47．5倍．比活力为54．15[U／rag,以戊二醛为交联剂制备固定化酶。酶动力学研究表明,固定化酶的最适pH为8．5,最适温度为70℃,且固定化酶在60℃～80℃活力较高;该酶的耐热性很强．而固定化酶的热稳定性比原酶强;以羧甲基纤维素钠为底物。固定化酶的Km为7．19mg／ml,Vmax为0．132mz／ml·min。     

杏鲍菇产木聚糖酶液态发酵条件优化及酶学性质研究

利用杏鲍菇(pleurotus eyngii)降解啤酒糟液态发酵生产木聚糖酶,运用单因素与正交试验研究了啤酒糟、玉米芯与麸皮的不同组分、氮源、pH值、培养时间、转速、装瓶量等对产木聚糖酶活力的影响,并对其粗酶的酶学性质进行了研究。结果表明:碳源为3%啤酒糟、1%麸皮和1%玉米芯,氮源为0.5%酵母膏,pH值为5,培养时间为8d,转速为160 r/m in,接种量为10%,装瓶量为100 mL/250mL时,酶活力最高。其粗酶液的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6,在pH4~6的范围内酶活性较稳定。但粗酶液的热稳定较差,当温度升至60℃时酶活力损失65%以上。     

小麦酯酶的纯化研究

采用DEAE-52,Sephadex G-200柱层析法从辽春9号小麦面粉里提取分离纯化小麦酯酶,分别用二次蒸馏水、0.1～0.5 moL/J 的NaCl溶液进行梯度洗脱,最终确定,粗酶液经DEAE-52用二次蒸馏水、0.2 moL/L的Nacl溶液洗脱后的两组份为纯化组份.上述两组份经sephadex G-200用0.2mol/L的NaCl溶液洗脱后的3组份中第1组份分别为纯化组份,本法第1组份纯化倍数为4.9771倍,回收率为20.09%;第2组份纯化倍数为1.5276倍.回收率为8.55%.     

产壳聚糖酶菌株的初步筛选

利用选择性培养基从土壤中分离具有产壳聚糖酶能力的菌株，获得两株产壳聚糖酶菌株，对其中的一株非芽孢杆菌Yg菌株进行产酶试验并对其酶活性以及酶解最适条件进行测定．结果显示：Yg菌株所产壳聚糖酶具有较强的降解壳聚糖的能力，不同产酶时间所得酶液中，产酶36h所得酶液的酶活力最强；用产酶36h所得酶液降解3％壳聚糖，酶解最适pH值为5．5—6．0，最适温度为50—55℃，10％的酶量完全降解3％的壳聚糖所需时间为30h．     

黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究

纯化了黑曲霉Aspergillus niger FJL0801糖化酶,并对其酶学性质进行研究.粗酶液经纯化后,较粗酶液纯化了38.42倍,酶活回收率达到17.45%.酶最适作用温度为60℃;最适反应pH值为4.5;在60℃下,保温2 h后,相对酶活42%±2.8%.在pH4.5,60℃下,作用时间在60 min以内,其酶活保存89%±2.56%;其酶学性质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,该酶比较适合应用于淀粉糖化工业.     

碱性蛋白酶高产菌株的筛选

实验采用土壤为样品,对样品进行分离,纯化,培养,筛选出了3株产酶能力较高的菌株,即R1、R2、R3。复筛确定了R1的产酶能力相对较高。通过相对酶活力的测定,确定了反应最佳温度为30℃,最佳pH为9。菌株在最适条件下产酶能力达246.8U/ml。     

细黄链霉菌产木聚糖酶的研究

通过多因子摇瓶发酵优化实验,以细黄链霉菌为始菌,研究产木聚糖酶的情况.以甘蔗渣为惟一碳源,测定不同甘蔗渣含量的培养基中细黄链霉菌所产木聚糖酶的活力,同时测定氮源、接种量对该菌产木聚糖酶的影响,结果表明,其最适碳源含量为10%,最适氮源为酵母膏和硫酸铵的混合氮源,其最适接种量为5%;在装料50mL的三角摇瓶中于30℃、120rpm振荡培养5d后,发酵液中木聚糖酶活力达7.74IU/mL.     

β-葡萄糖苷酶的液态发酵及转化分析

目的研究拟青霉液态发酵法生产β-葡萄糖苷酶,并用其转化大豆异黄酮糖苷.方法液态发酵,TLC法.结果确立了产酶的最适温度及最佳培养时间.结论发酵培养最适温度为28℃,发酵培养72h时酶活力最高.10％的大豆异黄酮经发酵液转化后经薄层定性鉴别,游离型的大豆苷元和染料木素的含量明显增加.     

离子色谱法测选矿废水中NO_3~-和SO_4~(2-)

建立电导检测离子色谱法测定选矿废水中微量NO3-和SO42-含量的新方法。该方法使用Metrosep A Supp5 250/4.0型阴离子色谱柱分离,以3.2 mmol·L-1Na2CO3与1.0 mmol·L-1Na HCO3溶液为淋洗液,流速0.7 m L·min-1进行洗脱,由抑制型电导检测器进行定量测试。实验结果表明:NO3-和SO42-在一定范围内呈线性关系,检出限分别为5.69、8.49 mg·L-1。该方法用于选矿废水试样中2种阴离子的测定,加标回收率NO3-为100.0%,SO42-为107.1%,相对标准偏差小于2%。     

生淀粉糖化菌的选育及发酵条件

以黑曲霉(Aspergillus niger)523原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉NL-3,其生淀粉酶活力为156μ/ml.产酶最适培养条件为:起始pH4.5,30℃,72小时.K~+、Mg~(2+)对NL—3产生淀粉糖化酶有促进作用;Z_n~(2+)对产酶有抑制作用.酶的最适作用条件为:以玉米淀粉为底物时最适温度50℃,最适pH4.5;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度60℃,最适pH4.0—4.5.酶在60℃保温15分钟,玉米淀粉为底物的酶剩余活力80%.甘薯淀粉、马铃薯淀粉为废物的酶剩余活力98%.     

pCR-HBc-X6-βhCG CTP37 DNA疫苗的大规模提取和纯化

本文研究了DEAE-Cellulose阴离子交换树脂纯化pCR-HBc-X6-βhCG CTP37质粒DNA的方法。经研究发现纯化的质粒不含RNA和蛋白质污染;其OD260/OD280高于1.8;每2500ml发酵液可得到4.95mg的质粒DNA。     

白芷叶总香豆素的大孔树脂纯化工艺

采用单因素与正交试验结合的方法对白芷叶总香豆素的大孔树脂纯化工艺进行研究,发现其优选工艺为:大孔树脂型号为D-101、上柱液的质量浓度为0.2 g/mL、上柱体积为3 BV,上柱液pH为4,上柱液流速为2 BV/h,洗脱用乙醇体积分数为90%,洗脱速度为2 BV/h,洗脱体积为6 BV.采用该纯化工艺,可使白芷叶总香豆素的纯度达到58.3%.     

氧电极法测定发芽苦荞中过氧化氢酶活性的研究

应用氧电极法测定发芽苦荞中过氧化氢酶活性。利用硫酸铵对发芽苦荞中过氧化氢酶进行硫酸铵(NH_4)_2SO_4分级纯化,研究了反应温度、pH值和底物浓度对过氧化氢酶活性的影响。结果表明,20%的(NH_4)_2SO_4饱和度是对粗酶液初步提纯的最佳浓度,测定过程中反应的最适温度为30℃左右,最适pH为7.2,过氧化氢浓度在0.6~0.75mol/L是最合适的底物区域。应用氧电极测定过氧化氢酶活性是一种简单、直观、值得推广的方法。     

产几丁质酶Bt-016菌株发酵条件优化探究

采用单因素及均匀设计法对产几丁质酶Bt-016菌株的发酵培养基和发酵条件进行优化。单因素试验结果确定了几丁质、氮源、碳源、pH和接种量为影响发酵条件的显著影响因子,采用U9(95)水平对5个影响因子进行最佳发酵条件和培养基优化,结果表明:蔗糖2g/L、蛋白胨20g/L、初始pH值为8、接种量1. 572%、几丁质含量2. 5%为最适发酵培养条件,在此条件下,Bt-016发酵液OD600值为3. 864 5,较优化前提高了21%;产几丁质酶活力为2. 796 1 U/m L,较优化前提高了33%。研究结果为杀虫防病Bt菌株的开发提供了菌源依据。     

应用昆虫体生产乳糖酶的纯化方法及理化性质的研究

本文将已构建好的带有乳糖酶基因的杆状病毒(AcNPV p10 Z-9)作为载体,经口服感染人工饲养的银纹夜蛾(Argyrogra(?) agnata)幼虫,在昆虫体内高效表达乳糖酶蛋白,表达水平可占虫体可溶性蛋白的20％。将虫匀浆后,经高速离心、丙酮沉淀及冷冻干燥等方法,即可制备成粗酶。进一步经FPLC β-aminophenyl-β-D-thiogalactopyranoside亲和柱层析方法制备成精制酶,可作为试剂及药物应用.经测定纯化后的酶比活为150000u/mg蛋白。酶活力的最适pH值是6.0～8.0,最适温度为30～40℃。该酶水解对硝基苯-β-D-半乳糖(ONPG)的米氏常数(Km)值为7.14×10~(4)mol/L,乳糖可竞争性地抑制乳糖酶水解ONPG的能力,Ki值为1.30×10~(-3)mol/L。     

土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶的酶学特性及其对大豆异黄酮的水解（英文）

目的:分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶(At-Bgl),探究其酶学特性及其对大豆异黄酮的水解效果。创新点:成功将At-Bgl分离纯化出来,并首次将分离纯化后的At-Bgl应用于水解大豆异黄酮糖苷。方法:利用超滤、透析、阴离子交换柱层析和聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)等手段分离纯化土曲霉来源的β-葡萄糖苷酶(表1),并用解析电离串联飞行时间质谱技术(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定蛋白条带。以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷(p NPG)为底物进行酶学特性研究;以p NPG和纤维二糖为底物,进行酶动力学参数研究(表2);以胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟动物胃肠道酸性环境,进行酸耐受性研究。通过高效液相色谱(HPLC)检测At-Bgl对大豆异黄酮糖苷的水解效果(表3)。结论:At-Bgl属糖苷水解酶第三家族(GH3),分子量约为120 k Da(图1),最适酶解条件为p H 5.0和65°C,具有良好的热稳定性和p H稳定性(图2),且胃蛋白酶和胰蛋白酶耐受性强(图3)。At-Bgl可将大豆异黄酮糖苷高效转化为异黄酮苷元(图4)。综上所述,At-Bgl在增强动物胃肠道对大豆异黄酮的水解方面具有重要应用价值。     

纤维素降解菌的筛选及其产酶特性

优化纤维素降解菌株CY10产酶条件,为该菌株在纤维素的生物降解方面提供实验依据.通过单因素试验对CY10菌株产酶条件进行优化,依据纤维素酶(CMCase)和滤纸糖化酶(FPase)活力大小确定最适培养时间、初始p H、碳源、氮源、温度、接种量及装液量等.结果表明:菌株CY10产酶的最适初始p H为6.5,碳源为麦麸(2.0%),氮源为酵母粉(0.5%),在30℃培养42 h;该菌株所产CMC酶和滤纸酶的酶活性最适温度为45℃,最适p H为6.5.在此条件下,CY10菌株的CMCase和FPase活力分别达到21.26 U/m L和23.57 U/m L.为此,菌株CY10在纤维素的生物降解方面具有较好的应用前景.     

尖孢镰刀菌产碱性低温脂肪酶发酵条件的优化

通过实验对尖孢镰刀菌NC03摇床发酵产脂肪酶的培养基组成和培养条件进行了优化,得出最佳产酶培养基组成配方为：蛋白胨5 g/L,酵母膏6 g/L,NaH2PO43 g/L;橄榄油250 mL/L,吐温80 25 mL/L。最优发酵条件为250 mL的摇瓶装液量50 mL,培养温度30℃,发酵时间84 h。经过优化后发酵液脂肪酶酶活力最高可达到11.32 U/mL,较优化前提高了3.0倍。     

来自链霉菌属的阿魏酸酯酶的分离纯化、理化性质

通过盐析透析、离了层析、疏水层析,对链霉菌属发酵液中的阿魏酸酯酶（FAE）进行分离纯化。并进行酶学性质研究。得出的阿魏酸酯酶的纯化倍数为2．67,回收率为55．8％,酶分子约为30kDa。其最适反应pH约为6．0,最适温度约为50℃,金属离子Cu^2＋和Zn^2＋对阿魏酸酯酶酶活力均有明显的抑制作用,而Mg^2＋、Fe^2＋、Ca^2＋、Na^＋和Mn^2＋对酶的活性均有一定的促进作用。